火把花中不同部位表兒茶素的含量測(cè)定

王賢英，謝香菊，李勝容

（重慶市中藥研究院，重慶 400065）

火把花學(xué)名昆明山海棠 Tripterygium hypoglaucum Hutch(THH），又名粉背雷公藤、金剛藤等，是衛(wèi)茅科雷公藤屬落葉披散或蔓狀灌木植物?；鸢鸦ㄒ幻驾d于《本草綱目》，《李時(shí)珍集解》曰：“生滇南者花紅，呼為火把花?！薄吨参锩麑?shí)圖考》稱昆明山海棠，《滇南本草》稱紫金皮，《中藥大辭典》《全國中草藥匯編》《中國有毒植物》等都有收載。我國昆明山海棠資源豐富，多集中于云南楚紅、紅河、玉溪、昆明、四川德昌等地。關(guān)于火把花的藥用部位還有許多爭(zhēng)議，但上海市藥品檢驗(yàn)所1990年的調(diào)查表明，主要藥用部位為根、根皮及莖枝[1]。火把花的化學(xué)成分非常復(fù)雜，長期研究發(fā)現(xiàn)火把花含有生物堿類[如雷公藤堿 （wilfordie）、雷公藤次堿（wilfori）等]、二萜類[如雷公藤甲素（triptonide）等] 、苷類、糖類、有機(jī)酸類（如齊墩果酸）、多糖、β－谷甾醇、酚性物質(zhì)(表兒茶素)等多種化學(xué)成分，具有抗炎、抗腫瘤、抗生育等藥理活性。火把花的功能主治為“祛風(fēng)除濕，舒筋活絡(luò)，清熱解毒”，臨床常用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性腎炎、白血病、紅斑狼瘡、跌打勞傷、皮膚瘙癢等疾病，其療效顯著。由于當(dāng)前中藥材資源越來越缺乏，為了控制藥材質(zhì)量，又要充分利用好藥材資源，本試驗(yàn)采用高效液相色譜法，不但對(duì)火把花的根、根皮、莖枝的主要化學(xué)成分表兒茶素含量進(jìn)行了測(cè)定，而且對(duì)人們?nèi)菀缀鲆暤娜~的化學(xué)成分表兒茶素含量也進(jìn)行了測(cè)定。

1 儀器與試藥

LC－2010A型高效液相色譜儀，Shimadzu CLASS－VPV6.12SP4工作站（日本島津公司），色譜柱 Diamonsil（鉆石）C18柱(250mm×4.6 mm，5μm)，SK250LH型超聲儀（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司），梅特勒－托利多AB265－S型電子分析天平。乙腈為色譜純，甲醇為分析純，水為超純水，表兒茶素對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為878－200101），火把花根（去皮）、火把花根皮、火把花莖枝、火把花葉均采自四川德昌。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.63%冰醋酸溶液－甲醇 － 乙腈（82.5 ∶2 ∶15.5）為流動(dòng)相，流速 1.0 m L ／min，檢測(cè)波長280 nm，進(jìn)樣量10μL，理論塔板數(shù)按表兒茶素峰計(jì)算，應(yīng)不低于2 500。

2.2 溶液制備

精密稱取干燥至恒重表兒茶素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含 0.1 mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取藥材樣品適量，粉碎，過四號(hào)篩，取約2 g，精密稱定，置50mL量瓶中，加水飽和的乙酸乙酯 40 mL，超聲處理（功率 250W，頻率 50 kHz）30min，放冷，加水飽和的乙酸乙酯至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密稱取表兒茶素對(duì)照品3.8 mg于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45μm濾膜濾過，即得質(zhì)量濃度為0.152 g／L的表兒茶素對(duì)照品溶液，分別取該溶液 2，4，6，8，10，20 μL 于高效液相色譜儀，測(cè)定各色譜峰積分面積，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y）、表兒茶素進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程 Y＝791 232.6X－8 922.3(r＝0.999 96)。結(jié)果表明，表兒茶素進(jìn)樣量在 0.304 ～3.04 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：分別精密吸取表兒茶素對(duì)照品溶液各10μL按各自的色譜條件，反復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果的 RSD＝0.73%，說明儀器精密度較好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取新配制的表兒茶素對(duì)照品溶液各10μL，按上述色譜條件，分別于 1，2，4，5，6 h各進(jìn)樣 1次，共進(jìn)樣 5次，5次測(cè)定相對(duì)應(yīng)峰的峰面積，表明對(duì)照品溶液在6 h以內(nèi)穩(wěn)定。精密吸取新配制的供試品溶液10μL[火把花根（去皮）]，分別于0，1，2，3，4 h進(jìn)樣 1 次進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算表兒茶素含量，RSD ＝1.9% ，表明供試品溶液4 h以內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一火把花根（去皮）各5份，分別研成細(xì)粉，按照供試品制備方法制備供試品溶液，取各供試品溶液10μL，并按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，其5次測(cè)定結(jié)果的 RSD為0.9%，表明其重現(xiàn)性較好。

加樣回收試驗(yàn)：取火把花根（去皮）粉（含量為 0.200 1mg／g，過四號(hào)篩）適量，分別稱取約2 g，精密稱定9份，分別精密加入表兒茶素對(duì)照品（質(zhì)量濃度為 0.152 g／L）1，3，5m L 各 3 份，按照供試品制備方法“表兒茶素”制備供試品溶液，并按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 火把花根（去皮）中表兒茶素回收率試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果

2.4 樣品含量測(cè)定

分別稱取不同部位的藥材樣品，粉碎，過四號(hào)篩，各取約2 g，精密稱定，按照樣品供試品制備方法制備供試液，采用高效液相色譜法外標(biāo)一點(diǎn)法，分別精密吸取對(duì)照品溶液10μL與各供試品溶液10μL，依正文各自色譜條件測(cè)定，計(jì)算本品中表兒茶素的含量。

表2 火把花藥材中不同部位表兒茶素含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[2]，選擇280 nm作為測(cè)定表兒茶素的檢測(cè)波長，流動(dòng)相為 0.63% 冰醋酸溶液 － 甲醇 － 乙腈（82.5 ∶2 ∶15.5）。

火把花的化學(xué)成份非常復(fù)雜，其中有的成分與雷公藤相似，僅含量有差別，而有的僅見于火把花。從以上測(cè)定結(jié)果可以看出，同種火把花藥材中，表兒茶素含量：根＞莖＞皮＞葉?；鸢鸦ㄖ参锸且吧?，目前還沒有種植，為了保護(hù)火把花藥材資源，要充分利用火把花各不同藥用部位的成分含量，物盡其用。因此對(duì)該植物進(jìn)行更深入的開發(fā)研究是很有必要的。

[1]楊小紅，張偉程，陳 香.火把花根的研究概況[J].中醫(yī)藥臨床雜志，2007，19（3）:315 － 317.

[2]曲銀鋒，李松武，劉乃強(qiáng)，等.HPLC法測(cè)定小兒瀉速停顆粒中兒茶素和表兒茶素的含量[J].食品與藥品，2009，11(5):39－41.