復(fù)方米諾地爾維A酸酊的制備及質(zhì)量控制

甘 亮，張 松

(湖北省黃石市第一醫(yī)院，湖北 黃石 435001)

復(fù)方米諾地爾維A酸酊(鄂藥制字H20110418)系黃石市第一醫(yī)院自行研制的酊劑，主要用于斑禿、脂溢性脫發(fā)、病后脫發(fā)、老年性脫發(fā)的治療。該制劑制備工藝簡單、質(zhì)量穩(wěn)定，經(jīng)醫(yī)院多年臨床驗(yàn)證顯示，療效顯著。為有效控制制劑質(zhì)量，筆者參照相關(guān)文獻(xiàn)[1－6]，用高效液相色譜(HPLC)法對其中的米諾地爾、維A酸進(jìn)行定性鑒別和含量測定?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

紫外分光光度計(jì)(美國Waters公司);高效液相色譜儀(美國Agilent公司);TG328A光學(xué)機(jī)械分析天平(湘儀天平儀器設(shè)備有限公司)。復(fù)方米諾地爾維A酸酊(黃石市第一醫(yī)院制劑室，批號分別為20110201，20110306，20110513);米諾地爾對照品(批號為1083－201013)、維A酸對照品(批號為 0862－201005)均來自中國藥品生物制品檢定所;生姜、月桂氮酮均為藥用標(biāo)準(zhǔn)，其余試劑為色譜純或分析純，水為注射用水。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方與制備

處方:米諾地爾 10 g，維 A 酸 0.25 g，生姜 100 g，辣椒 50 g，月桂氮酮30mL，75%乙醇加至1 000mL。

制備:取生姜、辣椒洗凈，加適量乙醇浸泡1周以上，常加攪拌，濾過，殘?jiān)鼔赫V過，合并濾液，靜置24 h，濾過至澄清，加入米諾地爾、維A酸乙醇溶解液及月桂氮酮，加75%乙醇至1 000mL，攪勻，即得。

2.2 質(zhì)量控制

性狀:本品為淡黃色至棕褐色的澄清液體。

鑒別:在含量測定項(xiàng)下的色譜圖中，供試品溶液應(yīng)呈現(xiàn)與米諾地爾、維A酸對照品溶液保留時間相同的色譜峰。

檢查:乙醇量應(yīng)為65% ～75%，應(yīng)符合2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅠC酊劑劑項(xiàng)下的各有關(guān)規(guī)定。

2.3 米諾地爾含量測定

2.3.1 色譜條件

色譜柱:KromasilC18柱(250mm×4.6mm，5μm);填充劑:十八烷基硅烷鍵合硅膠;流動相:甲醇－水(70∶30);流速:1.0mL/min;柱溫:30℃;檢測波長:285 nm;理論板數(shù)按米諾地爾峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.3.2 溶液制備

精密量取本品5mL，置50mL容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50mL容量瓶中，加流動相至稀釋刻度，搖勻，作為供試品溶液。精密稱取米諾地爾對照品25mg，精密稱定，置25mL容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，精密量取 5 mL，置50 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為100μg/mL的對照品溶液。

圖1 米諾地爾高效液相色譜圖

2.3.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):取 2.3.1 項(xiàng)下供試品溶液與對照品溶液及不含米諾地爾 (取除米諾地爾外，其余組方及制備方法與復(fù)方米諾地爾維A酸酊相同的空白酊劑，用依法制備空白樣品溶液)的陰性對照品溶液，分別進(jìn)樣。結(jié)果見圖1。供試品溶液呈現(xiàn)與米諾地爾保留時間相同的色譜峰，而陰性對照品溶液未見該色譜峰，說明空白樣品不干擾含量測定。

線性關(guān)系考察:稱取米諾地爾約10mg，精密稱定，置100mL容量瓶中，加乙醇40 mL，超聲波處理15min使溶解后定容至刻度，搖勻，分別取 10，5，3，2，1mL，加流動相稀釋至50 mL，搖勻，制成系列對照品溶液。分別進(jìn)樣10μL，測定峰面積，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=619 638C+37 606，r=0.999 8(n=5)。結(jié)果表明，米諾地爾檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為2.00～20.00μg/mL。

加樣回收試驗(yàn):取空白樣品9份，每份100mL，分別精密加入米諾地爾適量(約相當(dāng)于制劑中米諾地爾含量的80%，100%，120%)，依法測定米諾地爾含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

精密度試驗(yàn):取同一對照品溶液，依法測定其含量。結(jié)果的RSD為1.00%，表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，于0，1，2，4，8 h 時分別測定峰面積。結(jié)果的RSD為0.93%，表明待測溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液6份并測定含量。結(jié)果的 RSD為1.03%，表明方法重復(fù)性良好。

2.3.4 樣品含量測定結(jié)果

取供試品3批，每批2份，依法制備供試品溶液，精密吸取供試液10μL，按2.3.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，按外標(biāo)法定量，用回歸方程求得樣品含量。結(jié)果見表2。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

表2 樣品含量測定結(jié)果

2.4 維A酸含量測定

2.4.1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C18柱(250mm ×4.6mm，5 μm);填充劑:十八烷基硅烷鍵合硅膠;流動相:甲醇 －水－冰醋酸(90∶10∶0.3);流速:1.0mL/min;柱溫:30 ℃;檢測波長:250 nm，理論板數(shù)按維A酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

圖2 維A酸高效液相色譜圖

2.4.2 溶液制備

精密量取本品5mL，置50mL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，精密量取10 mL，置25 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取維A酸對照品25 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，精密量取10mL，置100mL容量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻得稀釋液，精密量取稀釋液10mL，置25m L容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為10μg/mL的對照品溶液。

2.4.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):取供試品溶液與對照品溶液及不含維A酸 (取除維A酸外，其余組方及制備方法與復(fù)方米諾地爾維A酸酊相同的空白酊劑)的陰性對照品溶液，分別進(jìn)樣。結(jié)果見圖2。供試品溶液呈現(xiàn)與維A酸保留時間相同的色譜峰，而陰性對照品溶液未見該色譜峰，說明空白樣品不干擾供試品溶液的測定。

線性關(guān)系考察:稱取維A酸約12.8mg，精密稱定，置50mL容量瓶中，加乙醇40mL，超聲波處理15min使溶解后定容至刻度，搖勻，分別取 5，3，2，1mL 加流動相稀釋至 10mL，搖勻，制成系列對照品溶液。分別進(jìn)樣10μL，測定峰面積，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為 A=745 94C+8 540.2，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，維 A 酸質(zhì)量檢測濃度的線性范圍為 25.60～128.00μg/mL。

加樣回收試驗(yàn):取空白樣品9份，每份50mL，分別精密加入維A酸適量(約相當(dāng)于制劑中維A酸含量的80%，100%，120%)，依法測定維A酸含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

精密度試驗(yàn):取同一對照品溶液5份，依法測定其含量。結(jié)果的 RSD為1.3%，表明方法精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，于 0，1，2，4，8 h 時分別測定峰面積。結(jié)果的 RSD為0.91%，表明待測溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批號樣品6份，依法制備供試品溶液6份，依法測定含量。結(jié)果的 RSD為1.19%，表明方法重復(fù)性良好。

2.4.4 樣品含量結(jié)果

取供試品3批，每批2份，依法制備供試品溶液，精密吸取供試液10μL，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，按外標(biāo)法定量，用回歸方程求得樣品含量。結(jié)果見表2。

3 討論

根據(jù)米諾地爾的理化性質(zhì)，并參照相關(guān)文獻(xiàn)[1，3，6]，以甲醇－水(70∶30)為流動相，以對照品的峰形和樣品的分離情況進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示，二者在相同保留時間內(nèi)峰形完好，樣品中米諾地爾能夠獲得良好的分離。

根據(jù)維A酸的理化性質(zhì)，參照相關(guān)文獻(xiàn)[2，4，5]，以甲醇－水－冰醋酸(90∶10∶0.3)為流動相，以對照品的峰形和樣品的分離情況進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示，二者在相同保留時間內(nèi)峰形完好，樣品中維A酸能夠獲得良好的分離。

以高效液相色譜法分別測定復(fù)方米諾地爾維A酸酊中米諾地爾和維A酸的含量，方法靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、專屬性強(qiáng)，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

[1]郭燕萍，陳珍鳳，鄭基蒙.復(fù)方米諾地爾溶液中米諾地爾的含量測定[J].中國臨床藥學(xué)雜志，2005，14(1)，52 －53.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:303.

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