骨康膠囊中氨基葡萄糖和硫酸軟骨素的含量測定

宣偉東，陳海飛，萬雅，卞 俊

(中國人民解放軍第四一一醫(yī)院藥學(xué)科，上海 200081)

骨康膠囊為我院骨科臨床應(yīng)用多年的自制制劑，由生姜提取物、硫酸軟骨素及氨基葡萄糖等成分組成。氨基葡萄糖為骨關(guān)節(jié)炎治療藥物，硫酸軟骨素為酶水解產(chǎn)物，具有良好的軟管營養(yǎng)作用[1]。該產(chǎn)品中加入了生姜提取物，其中的姜酚、姜烯類活性成分氨基葡萄糖和硫酸軟骨素對(duì)關(guān)節(jié)炎的治療起到了良好的協(xié)同作用，但同時(shí)也為上述兩種成分的含量測定帶來了極大干擾。為控制該制劑的質(zhì)量，筆者采用分光光度法，分別以Elson－Morgan法、咔唑法測定骨康膠囊中的氨基葡萄糖和硫酸軟骨素的含量。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

UV－2550型分光光度計(jì)(日本島津公司)，AB104－N型電子分析天平(梅特勒－托利多公司)。氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)為100812)、硫酸軟骨素標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào)為110206)均由中國藥品生物制品檢定所提供;骨康膠囊(醫(yī)院自制);其他試劑(乙酰丙酮、濃硫酸、咔唑、對(duì)二甲氨基苯甲醛)均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

試液:乙酰丙酮試液，取乙酰丙酮2 mL，加至50 mL碳酸鈉溶液中，臨用前1 d配制并冷藏。對(duì)二甲氨基苯甲醛試液，稱取對(duì)二甲氨基苯甲醛0.8 g，加無水乙醇和12 mol/L鹽酸各15 mL，混勻，即得。咔唑試劑，稱取50 mg，溶于50 mL 95%乙醇中，充分搖勻，即得。上述試液均須臨用前新鮮配制。

標(biāo)準(zhǔn)品溶液:分別精密稱取經(jīng)105℃干燥恒重后的氨基葡萄糖、硫酸軟骨素對(duì)照品各8，15 mg，分別置100 mL容量瓶中，加蒸餾水溶解，定容，搖勻，分別制得質(zhì)量濃度為80，150 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

供試品溶液:本品每粒膠囊中標(biāo)示含氨基葡萄糖330 mg、硫酸軟骨素60 mg、生姜提取物30 mg。為避免生姜提取物對(duì)含量測定的干擾，須先進(jìn)行預(yù)處理。取本品6粒，倒出內(nèi)容物，合并，混勻，稱重。精密稱取42 mg內(nèi)容物，加蒸餾水10 mL，超聲溶解，過濾，殘?jiān)谜麴s水10 mL分3次洗滌，濾液轉(zhuǎn)移至100 mL分液漏斗，用二氯甲烷10 mL分2次萃取，分取水層，轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，加蒸餾水定容后混勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液 0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，分別置 10 mL 帶塞試管中，加蒸餾水定容至5 mL，分別加1 mL乙酰丙酮試液，混勻后置沸水浴中乙酰化15 min，冷卻，分別加入3 mL無水乙醇和1 mL對(duì)二甲氨基苯甲醛試液，振搖，60℃水浴1.5 h，冷卻至室溫。以不含氨基葡萄糖的空白溶液為參比，照分光光度法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅤA]，在520 nm波長處測定反應(yīng)液的吸收值，以氨基葡萄糖含量(μg)為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為 Y=0.003 6 X －0.026，r=0.999 6。結(jié)果表明，氨基葡萄糖含量在40～200 μg范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。精密吸取硫酸軟骨素標(biāo)準(zhǔn)品溶液 0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 mL，分別置 10 mL帶塞試管中，加蒸餾水定容至1 mL，加濃硫酸6 mL，混勻后置85℃溫浴20 min，冷卻至室溫，分別加入咔唑試劑0.2 mL，振搖，室溫放置2 h。以不含硫酸軟骨素的空白溶液為參比，照分光光度法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅤA]，在530 nm波長處測定反應(yīng)液的吸收值，以硫酸軟骨素含量(μg)為橫坐標(biāo)、吸收度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程 Y=0.001499X+0.01292，r=0.999 8。結(jié)果表明其含量在15～120 μg范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取氨基葡萄糖和硫酸軟骨素標(biāo)準(zhǔn)品溶液各1.0 mL和0.5 mL，分別依法連續(xù)測定5次。結(jié)果的 RSD分別為1.36% 和2.12%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密量取同一批供試品(批號(hào)為110628)溶液適量，照上述方法操作，分別在反應(yīng)結(jié)束后每隔1 h測定反應(yīng)液的吸光度。結(jié)果氨基葡萄糖的吸光度在4 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.52%，6 h內(nèi) RSD 為 3.60%，8 h內(nèi) RSD 為 6.78%;硫酸軟骨素的吸光度在 4 h內(nèi)為 1.38%，6 h為 5.13%，8 h內(nèi)為 8.40%。表明兩者經(jīng)顯色反應(yīng)后，反應(yīng)液在4 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn):按2.1項(xiàng)方法平行制備6份同一批號(hào)的骨康膠囊供試品溶液(批號(hào)110628)，按含量測定方法操作，測定含量。結(jié)果氨基葡萄糖、硫酸軟骨素的平均含量分別為98.4%和97.5%，RSD分別為0.81%和1.21%，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的樣品內(nèi)容物6份，每份21 mg(批號(hào)為110628)，依法制備供試品溶液。精密量取供試品溶液1 mL，置于10 mL容量瓶，加水定容，搖勻。精密量取上述溶液1 mL，分別精密加入相當(dāng)于其含量80%，100%，120%的氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液，照上述方法操作，測定氨基葡萄糖含量，計(jì)算回收率。同法精密量取供試品溶液0.5 mL，精密加入適量的硫酸軟骨素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，依法測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 氨基葡萄糖、硫酸軟骨素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.3 樣品含量測定

精密吸取供試品溶液1 mL，置10 mL容量瓶中，加蒸餾水定容，混勻。精密吸取吸取上述溶液、氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液以各1 mL，分別置10 mL帶塞試管中，加蒸餾水定容至5 mL，另取一支10 mL帶塞試管，加蒸餾水定容至5 mL。上述3支試管照2.2項(xiàng)下方法操作，依法測定吸收度，計(jì)算樣品中氨基葡萄糖的含量。精密吸取硫酸軟骨素標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品溶液各0.5 mL，分別置10 mL帶塞試管中，加蒸餾水定容至1 mL。另取一支10 mL帶塞試管，加蒸餾水定容至1 mL。上述 3支試管照2.2項(xiàng)下方法操作，依法測定吸收度，計(jì)算樣品中硫酸軟骨素的含量。3批制劑含量測定結(jié)果見表2。

表2 3批制劑含量測定結(jié)果[含量(mg/粒)/%]

3 討論

本品主要成分為氨基葡萄糖、硫酸軟骨素和生姜提取物。生姜中姜酚、姜烯等辛辣成分具有活血化瘀、消炎止痛的功效，與氨基葡萄糖、硫酸軟骨素合用，可以起到良好的協(xié)同作用，臨床對(duì)骨關(guān)節(jié)炎優(yōu)良的治療效果也證實(shí)了這一點(diǎn)。含氨基葡萄糖和硫酸軟骨素的制劑多采用Elson－Morgan法[2]、咔唑法[3]或高效液相色譜法[4]進(jìn)行含量測定，但本品中含有生姜提取物，其易氧化的姜酚、姜烯類成分其對(duì)上述方法均可產(chǎn)生極大的干擾。為解決這一問題，在制備供試品溶液時(shí)，先用二氯甲烷萃取生姜中的脂溶性成分，再用Elson－Morgan法測定氨基葡萄糖、咔唑法測定硫酸軟骨含量。結(jié)果表明，這一方法可有效降低生姜成分對(duì)測定的影響，同時(shí)氨基葡萄糖對(duì)硫酸軟骨素的測定未產(chǎn)生干擾。該法準(zhǔn)確度高，回收率好，簡單可靠，適合樣品中氨基葡萄糖和硫酸軟骨素的快速含量測定。

[1]劉憲峰，王 貞，李穩(wěn)強(qiáng).硫酸軟骨素雙酶法生產(chǎn)新工藝[J].中國藥業(yè)，2010，19(22):55 －56.

[2]翟詠紅，萬丹晶.氨基葡萄糖和硫酸軟骨素含量測定方法的建立[J].中國藥業(yè)，2005，14(4):44－45.

[3]齊敬總，閆曉玲.硫酸軟骨素含量測定方法介紹[J].中國生化藥物雜志，2002，23(3):162 －164.

[4]林燕飛，孫靜蕓.HPLC－ELSD法測定復(fù)方氨基葡萄糖片中硫酸軟骨素的含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2006，23(5):388－390.