脫氧核苷酸鈉干預(yù)對消化性潰瘍面愈合狀況的影響

范 虹 萬 萍 (云南省第一人民醫(yī)院消化科，云南 昆明 650034)

消化性潰瘍(PU)是臨床上的常見病和多發(fā)病，是胃、十二指腸黏膜的保護因素和損害因素的關(guān)系失調(diào)所致，是消化科常見的且存在潛在生命危險的臨床急癥〔1〕。目前PU的治療方式主要采用止血、抗酸、黏膜保護、抗幽門螺桿菌(HP)感染等治療措施。然后近二十年的臨床研究數(shù)據(jù)顯示，患者再出血的概率達到了11%，盡管隨著內(nèi)鏡技術(shù)的成熟應(yīng)用，PU患者病死率并未降低，依然維持在6% ～8%〔2〕。現(xiàn)有研究認為，胃、十二指腸潰瘍愈合不良，導(dǎo)致PU反復(fù)性發(fā)作，導(dǎo)致黏膜炎癥、瘢痕、粘連，最終出現(xiàn)大面積出血或其他并發(fā)癥而死亡〔3〕。因此潰瘍面的愈合是PU預(yù)后的一個重要因素。目前已經(jīng)證實，脫氧核苷酸在外科創(chuàng)面的應(yīng)用時，可以通過促進肉芽組織生長，表皮細胞的遷移，促進局部創(chuàng)傷細胞蛋白質(zhì)合成，增強細胞的抗感染能力從而促進創(chuàng)面的愈合〔4〕。本研究探討脫氧核苷酸鈉干預(yù)對PU創(chuàng)面愈合的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 考馬斯亮藍G250(國醫(yī)藥集團上?；瘜W(xué)試劑公司);REG14-L精密電子天平(美國BD);TGL-16G型冷凍離心機和L8-80型低溫超速離心機(Beckman);Max M5酶標(biāo)儀(Molecular Devices)，BH-2光學(xué)顯微鏡(日本Olympus);ZDJ-1生物組織包埋機(徠卡);醫(yī)用圖像分析處理系統(tǒng)(華海電子有限公司)。OLYMPUS顯微鏡CX21(日本奧林巴斯);PAF鼠單抗IgG(Santa Cruz);PS2鼠單抗IgG(Santa Cruz);免疫組化SABC染色試劑盒(南京建成);Western印跡化學(xué)發(fā)光試劑;其他試劑如冰乙酸、甘油、無水乙醇、澳乙錠、溴酚藍、二甲苯、石蠟、考馬斯亮藍G250、鹽酸氨基葡萄糖化學(xué)純、乙酞丙酮等均購自國藥集團;DYYlll型電泳儀(美國BD);制膠、電泳及轉(zhuǎn)膜儀(Bio-Rad公司)。

1.2 分組及方法 采用改良后的okabe100%冰乙酸涂抹法〔5〕，大鼠禁食12 h后，6%水合氯醛麻醉，劑量為0.4 ml/100 g，麻醉后四肢固定，剪盡劍突至肚臍上的毛，面積約3 cm×4 cm，消毒處理后，沿腹白線打開腹腔約2～3 cm，分離出胃至十二直腸部位，采用玻璃管方式點滴100%冰乙酸于胃小彎處，點滴5處，約0.2 ml/次，持續(xù)60 s，移開玻璃滴管，處理部位顏色蒼白，以0.9%NaCl沖洗后將胃輕輕放入腹腔，縫合腹壁，消毒，并預(yù)防性經(jīng)尾靜脈注入頭孢他啶。術(shù)后均給予飲食、飲水，脫氧核苷酸組靜脈給予200 mg/kg脫氧核苷酸，正常組及模型組給予0.9%Nacl生理鹽水，替普瑞酮組給予替普瑞酮200 mg。給藥7 d后，剖腹取胃，用于各項指標(biāo)的測定，包括潰瘍情況，創(chuàng)面愈合情況，胃黏膜病理及相關(guān)蛋白檢測，胃部胃黏膜組織及黏液按照常法制備成勻漿，置玻璃試管中，3 500 r/min離心15 min，取上清液儲于－20℃?zhèn)溆?。胃黏膜病理采用HE染色，即4%多聚甲醛固定(16 h)，二甲苯、不同濃度乙醇脫水，石蠟包埋，4 μm切片，蘇木素-伊紅染色。

1.3 評價指標(biāo) 采用文獻方法〔5〕評價潰瘍指數(shù)(GUI)，潰瘍面積=長×寬，深度以2 mm分界計算，分10級。同時測定胃黏膜蛋白、氨基己糖、胃黏膜磷脂含量。同時評價HE染色病理療效。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SAS8.0軟件分析。計量資料將采用±s進行統(tǒng)計描述，計數(shù)資料采用構(gòu)成比(%)表示，各組數(shù)據(jù)均采用并行意向性(ITT)分析，并根據(jù)方差是否齊性采用t檢驗或秩和檢驗。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠潰瘍情況比較 相比于模型組，采用替普瑞酮及脫氧核苷酸干預(yù)后，大鼠潰瘍指數(shù)、潰瘍個數(shù)、潰瘍總面積均有顯著減少(P＜0.01)。但替普瑞酮及脫氧核苷酸并無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，且假手術(shù)和正常組大鼠均無潰瘍發(fā)生，見表1。

2.2 各組大鼠黏膜蛋白質(zhì)、氨基己糖和磷脂含量 模型組黏膜蛋白、氨基己糖、磷脂水平均顯著降低，采用替普瑞酮及脫氧核苷酸干預(yù)后，黏膜蛋白質(zhì)水平，氨基己糖，磷脂水平均有明顯升高，脫氧核苷酸組升高更為明顯，(P＜0.05或P＜0.01)，見表2。

2.3 各組大鼠胃黏膜組織HE染色 模型組大鼠胃黏膜毛細血管潰瘍、出血、局部黏膜細胞水腫、可見大量中性粒細胞核密集分布，部分黏膜細胞凋亡、壞死，核體固縮。替普瑞酮組、脫氧核苷酸組的黏膜潰瘍有不同程度愈合，新生較多血管，血管潰瘍出血得到控制，另外脫氧核苷酸組潰瘍灶表面有不同程度的新生上皮覆蓋，有較大量的肉芽組織形成，再生黏膜成熟，修復(fù)較為完全，部分細胞分布有白苔，炎癥細胞減少明顯，見圖1。

表1 各組大鼠潰瘍情況比較(n=12)

表2 各組大鼠黏膜蛋白質(zhì)、氨基己糖和磷脂含量(n=12，mg/g)

圖1 各組大鼠胃黏膜HE染色(×400)

3 討論

PU最主要的病理特征為反復(fù)性潰瘍造成的出血不止，患者潰瘍出血面反復(fù)的愈合、潰瘍造成瘢痕組織增生，炎癥浸潤，最終可能導(dǎo)致患者慢性貧血甚至出現(xiàn)惡性病變〔6〕。因此，PU是一個極為重要的過程，潰瘍的愈合是一個非常復(fù)雜的過程，需要黏膜缺失的填充和黏膜下組織結(jié)構(gòu)的重建。脫氧核苷酸是人體細胞增殖所必需的遺傳物質(zhì)，通過促進成纖維細胞增殖，促進潰瘍面的黏膜重建〔7〕。另外已有研究顯示脫氧核苷酸促進胃黏膜壁細胞合成黏膜蛋白、氨基己糖、磷脂，覆蓋胃黏膜表面，減少胃酸性損傷，因而可以促進胃黏膜的愈合〔8〕。動物研究提示大劑量應(yīng)用脫氧核苷酸，減少潰瘍指數(shù)、潰瘍面積，同時促進黏膜蛋白，氨基己糖和磷脂的合成，因此我們發(fā)現(xiàn)脫氧核苷酸干預(yù)組胃黏膜的愈合較模型組及替普瑞酮組有明顯的改善。

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