人絨毛膜促性腺激素定量檢測方法的評價

全媛 王潔珣 陳小春

人絨毛膜促性腺激素(HCG)是糖蛋白激素家族中的一員,一旦妊娠后絨毛生成, 即可在血循環(huán)中檢測到。因此測定HCG的水平可用于診斷早孕及宮外孕, 進行先兆性流產(chǎn)的動態(tài)觀察及判斷預(yù)后, 還可作為孕期的監(jiān)護觀察指標(biāo)。此外, 也可用于絨毛膜癌、惡性葡萄胎等作為輔助診斷及治療后隨訪的觀察指標(biāo)。因為血中HCG變化較快, 能及時反映出絨毛的分泌活動［1,2］。HCG檢測方法多種多樣, 現(xiàn)對江蘇省泰州市第二人民醫(yī)院兩種檢測HCG方法的重復(fù)性、穩(wěn)定性等指標(biāo)進行評價。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 化學(xué)發(fā)光免疫法 采用美國貝克曼公司UniCel DXI 800免疫分析儀及其配套檢測試劑。

1.1.2 酶聯(lián)熒光免疫法 采用法國生物梅里埃MINI VIDAS和配套檢測HCG試劑。

1.2 標(biāo)本

1.2.1 質(zhì)控品 美國貝克曼公司提供的質(zhì)控品。

1.2.2 血樣 隨機抽取住院及門診患者共100例。

1.3 試驗原理

1.3.1 化學(xué)發(fā)光免疫法檢測HCG原理 UniCel DXI 800免疫分析系統(tǒng)采用化學(xué)發(fā)光技術(shù)和磁性微粒分離技術(shù)相結(jié)合的測定方法, HCG測定原理為雙抗體夾心法。

1.3.2 MINI VIDAS檢測 HCG原理 是一種定量全自動ELISA(酶聯(lián)免疫吸附劑測定)法, 將兩步的免疫夾心法與最后的熒光檢測結(jié)合起來, 利用現(xiàn)成的單劑量試劑和分析儀中儲存的校準系統(tǒng), 對單份樣品進行檢測。

1.4 方法

1.4.1 重復(fù)性實驗(批內(nèi)精密度) 根據(jù)CLSI的EP5-A2文獻［3］對于精密度評價的要求, 分別在UniCel DXI 800免疫分析儀和MINI VIDAS測定三個水平質(zhì)控HCG含量, 3 h內(nèi)各水平測試20次, 計算均值()、標(biāo)準差(s)、變異系數(shù)(CV)。1.4.2 穩(wěn)定性實驗(日間精密度) 按上述方法分別測定三個水平質(zhì)控HCG含量, 1次/d, 連續(xù)測定20 d, 計算均值(x-)、標(biāo)準差(s)、變異系數(shù)(CV)。

1.4.3 比對實驗 根據(jù)CLSI EP9-A2文獻［4］, 選取隨機的住院及門診患者新鮮血樣標(biāo)本100例, 采用上述兩種方法平行檢測HCG含量, 最后對檢測結(jié)果進行相關(guān)性分析。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 重復(fù)性與穩(wěn)定性 化學(xué)發(fā)光免疫法和酶聯(lián)熒光免疫法的重復(fù)性結(jié)果, 見表1, 穩(wěn)定性結(jié)果, 見表2。

2.2 比對實驗 將檢測結(jié)果作回歸曲線, 得到化學(xué)發(fā)光免疫法和酶聯(lián)熒光免疫法比對結(jié)果的回歸方程：y=0.885x+31.24,相關(guān)系數(shù)r=0.985。根據(jù)CLSI文獻要求(r>0.975), 可見兩種方法相關(guān)性理想。

表1 重復(fù)性實驗結(jié)果

表2 穩(wěn)定性實驗結(jié)果

3 討論

HCG是孕卵著床后由人體滋養(yǎng)層細胞分泌的一種糖蛋白激素, 在正常與異常妊娠期有一定的分泌規(guī)律, 滋養(yǎng)細胞的數(shù)量和活力與HCG的分泌密切相關(guān), 因此, 血清HCG測定能夠在臨床上診斷早孕、異位妊娠、先兆流產(chǎn)、葡萄胎及妊娠滋養(yǎng)細胞腫瘤等, 并在治療中和治療后的隨診中成為重要檢測指標(biāo)。

根據(jù)上述實驗結(jié)果, 兩種定量檢測方法均有穩(wěn)定性、重復(fù)性較好的特點, 對比實驗結(jié)果顯示, 兩種方法相關(guān)性較好。另外, 兩種方法有各自的優(yōu)點, 實驗室可根據(jù)具體情況選擇。UniCel DXI 800免疫分析儀：①磁性微粒子/超聲波清洗分離技術(shù), 使攜帶污染率<1 ppm, 避免了交叉污染和攜帶效應(yīng)嚴重等問題。②分析速度最高可達400測試/h, 急診項目分析時間≤15 min。③一次裝載量≥50個試劑位, 試劑儲存在4～10℃, 該系統(tǒng)自動化、智能化程度高。MINI VIDAS：①所有試劑都已經(jīng)預(yù)先分裝在獨立的試劑條中, 減少了交叉污染和干擾, 同時對操作者是較好的保護, 特別是高危標(biāo)本。②該方法可單個或多個標(biāo)本多個項目同時測定, 比較適合小型實驗室或大型實驗室的急診檢測。

［1］衛(wèi)生部臨床檢驗中心.臨床實驗室室間質(zhì)評的要求(草案).全國臨床化學(xué)室間質(zhì)評資料匯編, 2000:1-3.

［2］葉應(yīng)嫵,王毓三.全國臨床檢驗操作規(guī)程.第2版.南京：東南大學(xué)出版社, 1997,21(10):601-604.

［3］NCCLS.Evaluation of performance of quantitative Measurement methods；approved guideline-second edition.NCCLS document EP5-A2, 2004.

［4］NCCLS.Method comparison and bias estimation using patient samples; approved guideline-second edition.NCCLS document EP9-A2.NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne,Pennsylvania 19087-1898 USA, 2002.