組織細(xì)胞壞死性淋巴結(jié)炎患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞檢測(cè)及臨床意義

張國(guó)英，黃子慧，徐衛(wèi)平，王丹霞

(南京市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 南京 210014)

組織細(xì)胞壞死性淋巴結(jié)炎(histiocytic necrotizing lymphadenitis，HNL)又稱(chēng)亞急性壞死性淋巴結(jié)炎及 Kikuchi-Fujimoto病。由 Kikuchi和Fujimoto于1972年首先報(bào)道[1]，是一種淋巴結(jié)反應(yīng)性增生病變[2]。主要癥狀是發(fā)熱，頸部淋巴結(jié)腫大[3]。其病因及發(fā)病機(jī)制尚不清楚，因其臨床表現(xiàn)多樣，缺乏特異性且發(fā)病率較低，臨床上誤診率可高達(dá)30% ～80%[4]。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)HNL患者及健康人群外周血T淋巴細(xì)胞亞群和自然殺傷(natural killer，NK)細(xì)胞百分率，探討其臨床意義。

材料和方法

一、研究對(duì)象

選擇2011年6至12月在南京市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院住院的HNL患者51例，其中男19例，女32例，年齡5 ～45 歲，平均(24.2 ±11.9)歲。

所有病例均符合以下診斷標(biāo)準(zhǔn):(1)發(fā)熱，多有上呼吸道感染等前驅(qū)癥狀，熱型多呈弛張熱，應(yīng)用抗菌藥物治療無(wú)效，女性多于男性;(2)可有頸、腋及鎖骨上窩淋巴結(jié)等部位的輕度痛性腫大，部分患者可有一過(guò)性肝脾腫大及皮疹。實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn):(1)淋巴結(jié)活檢顯示淋巴結(jié)正常結(jié)構(gòu)消失，有大片壞死，周?chē)薪M織細(xì)胞增多;(2)血常規(guī)檢查示白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)正?；蚪档蚚5-6]。

所有HNL患者均給予強(qiáng)的松口服，并配以中藥銀僵合劑熏蒸。療效判定參照以下標(biāo)準(zhǔn)[5-6]:治愈，全身及局部癥狀消退，血象正常;好轉(zhuǎn)，全身癥狀消退，局部癥狀未全消;無(wú)效，全身及局部癥狀加重。51例HNL患者中，經(jīng)治療1個(gè)療程后，19例患者治愈，30例患者好轉(zhuǎn)，2例患者無(wú)效。

18例正常對(duì)照者為健康體檢者，排除妊娠或哺乳期婦女，過(guò)敏體質(zhì)或?qū)Ρ驹囼?yàn)用藥過(guò)敏者，心、肝、腎功能損傷及其他腫瘤、免疫性疾病患者。

二、標(biāo)本采集

采集外周靜脈血2 mL，用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝。

三、FCM檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞

取100 μL上述抗凝血分別加入4個(gè)試管中，每管加入抗 CD45-多甲藻黃素葉綠素蛋白(PerCP)10 μL。各管再依次加入抗CD3-異硫氰酸熒光素(FITC)+CD19-藻紅蛋白(PE)、抗CD3-FITC+CD4-PE、抗 CD3-FITC+CD8-PE、抗 CD3-FITC+CD16CD56-PE各10 μL，避光室溫充分結(jié)合20 min后，每管加入溶血素2 mL，避光放置至透明后2500×g離心5 min，棄去上清液，加入磷酸鹽緩沖液(PBS)2 mL，在混合器上使試管底部的細(xì)胞與PBS溶液混勻，2500×g離心5 min，最后加入0.4 mL PBS溶液混勻直接上流式細(xì)胞儀(FACS CantoⅡ，美國(guó)BD公司)檢測(cè)。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、初診HNL患者T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞百分率

初診HNL患者CD3+、CD4+淋巴細(xì)胞亞群百分率和CD4+/CD8+及CD16+CD56+細(xì)胞百分率均明顯低于健康對(duì)照組(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

二、治愈和好轉(zhuǎn)患者治療前、后T淋巴細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞百分率變化

19例治愈患者治療后CD3+、CD4+淋巴細(xì)胞亞群百分率和CD4+/CD8+明顯高于治療前(P＜0.05)，治療后與健康對(duì)照組比較，CD3+、CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞亞群百分率和CD4+/CD8+差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);30例好轉(zhuǎn)患者治療后CD3+、CD4+淋巴細(xì)胞亞群百分率和CD4+/CD8+明顯高于治療前(P＜0.05)，治療后與健康對(duì)照組比較，CD3+、CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞亞群百分率和CD4+/CD8+以及CD16+CD56+差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)，見(jiàn)表2。

表1 HNL患者及健康對(duì)照組外周血T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞百分率

表2 治愈和好轉(zhuǎn)患者治療前、后外周血T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞百分率

討 論

HNL在世界各地均有報(bào)道，其病因尚不清楚。有學(xué)者提出HNL是由于感染使機(jī)體的免疫平衡受到破壞而發(fā)生自身免疫性疾病或變態(tài)反應(yīng)性疾病樣改變[7]。本研究資料分析了51例HNL患者的T淋巴細(xì)胞亞群，發(fā)現(xiàn)初診患者CD3+、CD4+細(xì)胞以及CD4+/CD8+比值與健康對(duì)照組比較明顯降低，這與國(guó)內(nèi)一些報(bào)道相一致[8-9]。CD4+細(xì)胞受抗原刺激后，產(chǎn)生大量細(xì)胞因子，促進(jìn)CD8+T細(xì)胞的活性。CD8+細(xì)胞能分泌抑制因子，減弱或抑制免疫應(yīng)答，對(duì)CD4+細(xì)胞有調(diào)節(jié)性抑制作用。CD4+/CD8+比例平衡是維持免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和調(diào)控機(jī)體免疫網(wǎng)絡(luò)的重要樞紐，反映了機(jī)體免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)能力[10-11]。這種免疫平衡紊亂時(shí)，可引起繼發(fā)性免疫缺陷。本研究通過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)HNL患者T淋巴細(xì)胞亞群水平低于健康對(duì)照組，提示HNL患者機(jī)體的免疫平衡受到了破壞，輔助性T細(xì)胞數(shù)量或功能低下，機(jī)體識(shí)別和殺傷抗原的能力下降。本研究還顯示，19例治愈患者和30例好轉(zhuǎn)患者T淋巴細(xì)胞亞群逐漸恢復(fù)正常，進(jìn)一步提示HNL患者機(jī)體存在細(xì)胞免疫功能的紊亂。

NK細(xì)胞是重要的天然免疫細(xì)胞，具有廣譜的抗感染和強(qiáng)大的免疫調(diào)控功能，在機(jī)體免疫監(jiān)視過(guò)程中發(fā)揮重要作用[11-12]。分析本組資料發(fā)現(xiàn)，HNL初診患者CD16+CD56+細(xì)胞水平明顯降低，進(jìn)一步說(shuō)明HNL患者的細(xì)胞免疫功能明顯受損。19例治愈患者和30例好轉(zhuǎn)患者 CD16+CD56+細(xì)胞百分率與治療前相比沒(méi)有明顯變化，其臨床意義還有待今后積累更多病例進(jìn)行深入研究。

本研究因檢測(cè)例數(shù)較少，對(duì)2例無(wú)效患者治療前、后T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞的百分率未做比較，仍需要更多病例來(lái)研究確定。

目前，臨床上主要通過(guò)淋巴結(jié)活檢確診HNL，并主張將口服激素作為HNL最有效的治療方法，抗菌藥物治療無(wú)效[4，13]。但由于 HNL 的臨床表現(xiàn)多樣，缺乏特異性，病理組織形態(tài)較復(fù)雜，導(dǎo)致HNL的誤診、誤治率較高，往往繼發(fā)其他免疫系統(tǒng)疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、隱源性機(jī)化性肺炎、自身免疫性肝炎等，嚴(yán)重的會(huì)引起死亡[14-18]。因此，臨床實(shí)驗(yàn)室尋找及時(shí)、有效的療效判斷指標(biāo)顯得尤為重要。本研究發(fā)現(xiàn)HNL初診患者的細(xì)胞免疫功能明顯異常，19例治愈患者和30例好轉(zhuǎn)患者治療后T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞的百分率逐漸恢復(fù)正常，從而認(rèn)為檢測(cè)T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞的百分率對(duì)HNL的療效判斷具有一定的臨床價(jià)值。

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