敖勒蓋熱－13味散質(zhì)量標準研究

阿古拉 烏蘭巴特爾

(1．青島第一療養(yǎng)院，山東 青島 266071; 2．烏審旗蒙醫(yī)醫(yī)院;內(nèi)蒙古 烏審 017300)

敖勒蓋熱－13味散為烏審旗蒙醫(yī)醫(yī)院制劑，由龍骨、玫瑰花、麥冬、止瀉木子、草烏葉、石榴等藥味組成，用于腹脹、腸鳴、大便秘結、術后通氣等病癥，臨床效果好，但目前尚無質(zhì)量標準。為保證該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，對處方中止瀉木子、進行了薄層色譜定性鑒別研究，并對方中草烏葉進行含量測定，有望對敖勒蓋熱－13味散進行質(zhì)量控制。

1 儀器與試劑

1．1 儀器:84－2型數(shù)顯攪拌恒溫電熱套;HH－2數(shù)顯恒溫水浴鍋;AE200S電子分析天平;Agilent ll00LC型液相色譜儀，色譜工作站;R－205型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;超聲波清洗機;冷凍液槽;精密電子天平。

1．2 試劑:供試品來源:內(nèi)蒙古烏審旗蒙醫(yī)醫(yī)院，薄層板:自制硅膠G板、預制硅膠G板(煙臺化學工業(yè)研究所)。乙醇、無水乙醇(天津四友生物醫(yī)學技術有限公司，分析純);乙腈、甲醇(天津四友生物醫(yī)學技術有限公司，色譜純)。對照品購自中國藥品生物制品檢定所，烏頭堿(110720－201111)，其他試劑均為國產(chǎn)分析純，水為離子交換高純水。

2 薄層鑒別

處方中止瀉木的TLC:止瀉木為處方中主要藥味之一，具有清熱、利膽、止瀉功能。參照“中國藥典”2010年版一部“十三味榜嘎散”項下的薄層鑒別(4)方法，按處方比例折算，取本品10g，加氨水1mL，拌勻，密塞放置15min，加甲醇40mL超聲處理15min，濾過，濾液蒸干，加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。另取以相同工藝制備的陰性對照(缺止瀉木)9g，按供試品溶液的制備方法制成陰性供試液。再取止瀉木對照藥材1g，加甲醇20m L超聲處理15min，濾過，濾液蒸干，加甲醇2mL溶解，作為對照藥材溶液。分別吸取上述三種溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－三氯甲烷－二乙胺(8∶1:1)為展開劑，展開，取出，晾干(需徹底晾干，放置過夜后顯色效果更好)，噴以改良碘化鉍鉀試液，結果供試品色譜中，在與對照藥材相應的位置上，顯五個相同的橙黃色主斑點，且無陰性干擾。見圖1。

圖1 敖勒蓋－熱13味散止瀉木子TLC

3 含量測定［1－2］

3．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑C18(250mm×4．6mm，5μm);以甲醇－水－氯仿－三乙胺(70:30:2:0．1)為流動相，檢測波長為230nm，柱溫為室溫。理論板數(shù)按烏頭堿峰計算應不低于2000。

3．2 對照品溶液的制備:精密稱取烏頭堿對照品適量，加乙醇制成每1mL含80μg的溶液，即得。

3．3 供試品溶液的制備:取本品約5g，精密稱定，用氨試液潤濕，乙醚浸提14h，提取液揮棄乙醚，殘渣以二氯甲烷溶解，定容至mL，用．01mol·L－1H2SO4溶液mL 萃取等體積的二氯甲烷液，取水相，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

3．4 專屬性試驗:取草烏葉陰性對照(處方中缺草烏葉)，照測定方法中供試品溶液的制備法制成陰性對照溶液;分別吸取陰性對照溶液、烏頭堿對照品溶液、供試品溶液各10?L，分別注入液相色譜儀，試驗結果表明:陰性對照色譜中在與烏頭堿對照品和供試品色譜烏頭堿峰相對應的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，本法專屬性符合要求。高效液相色譜圖見圖1～圖3。

圖2 陰性對照色譜

圖3 供試品色譜

圖4 對照品色譜圖

3．5 線性關系試驗:精密稱定烏頭堿對照品2．2mg，置10mL量瓶中，加二氯甲烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為0．22mg·mL－1的對照品溶液。分別精密吸取μL、15μL、10μL、5μL、1μL 按上述色譜條件進行測定。以峰面積對進樣量進行回歸分析，結果 Y=1087．5x－0．5492，r=0．9996，烏頭堿在0．22μg～4．4μg范圍內(nèi)呈良好線性關系。

3．6 精密度試驗:取同一份供試品溶液，6次分別精密吸取10μl注入液相色譜儀，測定。結果RSD為1．32%(n=6)，表明儀器精密度良好。

3．7 穩(wěn)定性試驗:取同一份供試品溶液，分別于0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h 精密吸取10μL 注入液相色譜儀，測定，結果供試品在12h內(nèi)鋒面積基本穩(wěn)定，RSD為1．54%。

3．8 重現(xiàn)性試驗:取同一敖勒蓋熱 －13樣品(批號:20120106)，照含量測定方法中供試品溶液的制備，分別制得6份供試品溶液，分別照含量測定方法測定每份的含量，試驗結果見表1。

表1 重現(xiàn)性試驗結果

3．9 回收率試驗:取已知烏頭堿含量的敖勒蓋熱－13(與重現(xiàn)性試驗同批號，批號:20120106，含量為:0．712μg·g－1)內(nèi)容物，分別精密稱定6份，分別精密加入烏頭堿加標對照品溶液25mL(加標對照品溶液濃度為:43．2μg·mL－1，加標量為烏頭堿．08μg)，按含量測定方法測定每份的含量，計算回收率，試驗結果見表2。

表2 回收率試驗結果

3．10 樣品測定:按照供試品制備方法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，測定，結果見表3。

表3 樣品的含量測定結果(n=2)

4 討論

為保證該制劑的內(nèi)在質(zhì)量，對處方中玫瑰花、麥冬、石榴等藥味進行了薄層色譜定性鑒別研究，結果玫瑰花、麥冬、石榴的薄層鑒別實驗中陰性對照有干擾，未收入正文，有待下一步實驗研究。本制劑含量測定曾選用石榴中沒食子酸作為含量測定指標，但陰性溶液有干擾，因此最終選用烏頭堿，作為質(zhì)控指標。本實驗研究顯示，敖勒蓋熱－13散中烏頭堿含量極低，這和草烏葉中含烏頭堿的含量低有關，因此在今后的實驗中把測定次烏頭堿和新烏頭堿作為質(zhì)量控制指標更有科學意義。

［1］張帆，武琳哈木拉提·吾甫爾．民族藥鐵棒錘炮制前后烏頭堿和3－脫氧烏頭堿含量的HPLC分析［J］．中成藥，2011，33(3):479 －482

［2］邱振文，羅丹冬，王沛堅．HPLC法測定舒痹寧顆粒中次烏頭堿、新烏頭堿的含量［J］．中藥新藥與臨床藥理，2008，19(4):304－305