板藍(lán)根與抗內(nèi)毒素藥效作用及化學(xué)基礎(chǔ)研究

常曉波（漢中三二0一醫(yī)院，陜西 漢中 723000）

板藍(lán)根是十字花科植物菘藍(lán)的根，是臨床上常用的清熱解毒的中藥，具有抗菌、抗病毒、抗癌、增強(qiáng)免疫力、抗細(xì)菌內(nèi)毒素等多種功能[1]。腫瘤壞死因子TNF-α、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，進(jìn)而引起機(jī)體發(fā)熱、休克、血管內(nèi)彌散性凝血等反應(yīng)，對患者造成嚴(yán)重的損傷，甚至死亡。以小鼠腹腔巨噬細(xì)胞作為對象，研究板藍(lán)根對LPS刺激產(chǎn)生TNF-α和IL-6的作用，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：①試劑：板藍(lán)根購于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中藥房，LPS（湛江安度斯生物有限公司，010203），小鼠TNF-αELISA試劑盒（江萊生物科技有限公司，貨號：ELISA2266），小鼠IL-6 ELISA試劑盒（上海滬鼎生物科技有限公司，HD-30163k）。②實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：周齡4周的昆明小鼠，20 g左右，雌雄各15只，均購于北京維通利華有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的制備：給予昆明小鼠腹腔注射2 mg/只BCG，4 d后經(jīng)過脫頸椎處死小鼠，給小鼠腹腔注射5 ml含有100 U/ml青霉素、100 μg/ml鏈霉素和10 U/ml肝素的RPMI160（GIBCO）培養(yǎng)液，輕柔腹部，抽取腹腔液體，1 500 r/min，5 min，用RPMI160洗滌細(xì)胞兩次，接種于含10%胎牛血清（Hyclone）的RPMI160培養(yǎng)液，于37℃，5% O2，95% CO2的培養(yǎng)箱（Thermo）中進(jìn)行培養(yǎng)2 h，洗去未貼壁的細(xì)胞，剩下的貼壁細(xì)胞即為巨噬細(xì)胞。

1.2.2 板藍(lán)根溶液的配置：取100 g板藍(lán)根置于700 ml蒸餾水煎煮1.5 h，濾渣加500 ml蒸餾水繼續(xù)煎煮1 h，過濾，將所有濾液濃縮至100 ml。

1.2.3 分組處理：取2×106個(gè)細(xì)胞/ml至于24孔板，隨機(jī)分為兩組，5孔/組，其中板藍(lán)根組每孔加1 ml板藍(lán)根處理細(xì)胞1 h，然后加LPS至終濃度50 ng/ml，對照組不加板藍(lán)根預(yù)處理，直接加LPS處理，24 h后，取上清液用ELISA檢測TNF-α和IL-6的含量，抑制率=（1－板藍(lán)根處理組含量/對照組含量）×100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：使用SPSS 17.0對各項(xiàng)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)、分析，各項(xiàng)參數(shù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t和χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

板藍(lán)根對LPS致鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α和IL-6的影響見表1。與對照組相比，板藍(lán)根處理組的TNF-α的量明顯下降（t=5.818，P=0.000）；與對照組相比，板藍(lán)根處理組的IL-6的量明顯下降（t=26.464，P=0.001）。

表1 板藍(lán)根對LPS致鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α和IL-6的影響

3 討論

板藍(lán)根可治療感染性熱疾病，因其藥理作用可能為抗炎、抗病毒、抗微生物感染等，近些年有人對中醫(yī)的熱毒進(jìn)行了新的詮釋，認(rèn)為內(nèi)毒素是一種熱毒，抗內(nèi)毒素可能是板藍(lán)根解熱的一種機(jī)制。

據(jù)報(bào)道細(xì)菌內(nèi)毒素對人體的危害很大，其作用于靶細(xì)胞引起機(jī)體廣泛的病理生理反應(yīng)，如發(fā)熱、炎性反應(yīng)、休克等，主要機(jī)制是脂多糖與其受體結(jié)合，通過蛋白激酶的活化，刺激單核巨噬細(xì)胞釋放多種炎性因子，如TNF-α、IL-6和NO等。臨床上內(nèi)毒素導(dǎo)致疾病的主要途徑就是誘導(dǎo)細(xì)胞因子和炎性反應(yīng)介質(zhì)的釋放，因此對炎性反應(yīng)因子的檢測可以作為內(nèi)毒素性疾病治療的指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)中，給予昆明小鼠腹腔注射BCG，促使T細(xì)胞活化后激活巨噬細(xì)胞，進(jìn)而對對LPS的敏感性增強(qiáng)，使其能過產(chǎn)生足夠高水平的TNF-α和IL-6，然后使用板藍(lán)根溶液對其進(jìn)行預(yù)處理，再給與LPS刺激，24 h后檢測TNF-α、IL-6的含量，顯示與對照組相比，板藍(lán)根處理組的TNF-α、IL-6的含量明顯降低（P＜0.05），抑制率分別為63.67%和74.12%，與以前的報(bào)道相仿。板藍(lán)根抗內(nèi)毒素作用效果明顯。

[1] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中國藥典[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005：143.