末稍血靜置時(shí)間對(duì)血小板檢測(cè)結(jié)果的影響

孫家祥 李艷

末稍血靜置時(shí)間對(duì)血小板檢測(cè)結(jié)果的影響

孫家祥 李艷

目的 探討末稍血采集后靜置時(shí)間對(duì)血小板檢測(cè)結(jié)果的影響。 方法 隨機(jī)選取60例健康體檢者采集末稍血加入EDTA-K2抗凝管混勻后分別在0 min、5 min、10 min、15 min、30 min上機(jī)進(jìn)行血細(xì)胞分析, 觀察血小板變化。同時(shí)取末稍用草酸胺血小板稀釋液行顯微鏡人工計(jì)數(shù), 并以此作為血小板計(jì)數(shù)的參考。結(jié)果 ①60例中有41例各時(shí)間段血小板結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；有18例0 min與5 min血小板計(jì)數(shù)結(jié)果明顯減少(P＜0.01), 10 min以后才趨穩(wěn)定；有1例在15 min以后才趨穩(wěn)定。②與手工計(jì)數(shù)結(jié)果比較, 0 min與5 min血小板計(jì)數(shù)結(jié)果明顯降低, 差異非常顯著(P＜0.01)；10 min以后血小板計(jì)數(shù)結(jié)果趨于穩(wěn)定, 10 min、15 min、30 min計(jì)數(shù)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 分別與手工計(jì)數(shù)結(jié)果比較差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 末稍血采取后至少應(yīng)放置10 min方能進(jìn)行血小板計(jì)數(shù), 放置15 min以后則更穩(wěn)定。

末稍血；靜置時(shí)間；血小板計(jì)數(shù)；準(zhǔn)確性

血細(xì)胞分析是目前臨床應(yīng)用最重要的常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目之一, 國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室普遍使用EDTA-K2抗凝靜脈血分析。但對(duì)于部分靜脈抽取有困難的特殊病人有時(shí)仍會(huì)采集末稍血進(jìn)行檢測(cè), 在門急診檢驗(yàn)中更為普遍。實(shí)際工作中, 末稍血采取后在不同時(shí)間檢測(cè)血小板結(jié)果有時(shí)會(huì)有差異, 甚至?xí)斐蓢?yán)重誤差, 因此檢測(cè)時(shí)間的規(guī)范尤為重要。但目前國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)道不一, 也暫無(wú)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)出臺(tái)。作者隨機(jī)選擇了60例健康體檢者采集末稍血后在不同時(shí)間進(jìn)行血細(xì)胞分析, 以觀察血小板結(jié)果變化, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選取來(lái)本院健康體檢需行血細(xì)胞分析的60例個(gè)體采集末稍血, 均排出心、腦、肝、腎、肺等臟器的器質(zhì)性及免疫性疾病。其中男35例,女25例, 年齡16~62歲,平均(32.5±13.3)歲。

1.2 儀器與材料 Sysmex-800i血細(xì)胞分析儀及配套試劑；Olympus雙目顯微鏡；EDTA-K2抗凝管；牛鮑氏血小板計(jì)數(shù)池；微型混勻振蕩器；草酸胺血小板稀釋液［1］；瑞一姬染色液。

1.3 檢測(cè)與分析 由臨床經(jīng)驗(yàn)豐富的高年資檢驗(yàn)技師用BD一次性無(wú)痛采血針采集無(wú)名指末稍血約350 μl加入EDTA-K2抗凝管, 立即用微型混勻振蕩器混均。采集過(guò)程中盡可能避免過(guò)度擠壓造成組織液的混入。血液混勻后在0 min(即刻)、5 min、10 min、15 min、30 min上機(jī)進(jìn)行血細(xì)胞檢測(cè)分析。同時(shí)取血20 μl加入0.38 ml草酸胺血小板稀釋液,按操作規(guī)程行顯微鏡人工計(jì)數(shù), 并以此作為血小板計(jì)數(shù)的參考。

各時(shí)間段分別涂血片一張經(jīng)瑞-姬染色觀察血小板分布情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)取兩次平行計(jì)數(shù)均值。采用SPSS 11.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 組間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析, 以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn), P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同時(shí)間血小板檢測(cè)結(jié)果 與手工計(jì)數(shù)結(jié)果比較, 0 min與5 min血小板計(jì)數(shù)結(jié)果明顯減少, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；10 min以后血小板計(jì)數(shù)結(jié)果趨于穩(wěn)定, 10 min、15 min、30 min計(jì)數(shù)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 分別與手工計(jì)數(shù)結(jié)果比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 見(jiàn)表1。

表1 60例末稍血靜置不同時(shí)間及人工計(jì)數(shù)血小板檢測(cè)結(jié)果( x-±s, ×109/L)

2.2 不同時(shí)間血小板檢測(cè)結(jié)果差異所占比例 60例個(gè)體中, 有41例各時(shí)間段血小板結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),占68.3%；有18例0 min與5 min血小板計(jì)數(shù)結(jié)果明顯降低(P＜0.01), 10 min以后才趨穩(wěn)定, 占30%；有1例在15 min以后才趨穩(wěn)定占1.7%。

2.3 血涂片血小板分布情況 經(jīng)瑞-姬染色觀察,凡血小板計(jì)數(shù)結(jié)果偏低者,血涂片均顯示有血小板聚集或衛(wèi)星現(xiàn)象；結(jié)果越低,聚集越明顯, 10 min以后這種聚集或衛(wèi)星現(xiàn)象基本消失。

3 討論

發(fā)揮止血與凝血重要功能的血小板及其相關(guān)參數(shù)越來(lái)越受到廣泛關(guān)注,目前已有報(bào)道血小板參數(shù)與多種疾病相關(guān),因此血小板在機(jī)體的作用已大大超出了傳統(tǒng)概念。但血小板參數(shù)的分析首先是建立在血小板計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性之上, 保證計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確是其他參數(shù)的關(guān)鍵。一直以來(lái), 檢驗(yàn)工作者基本達(dá)成共識(shí), 末稍血采取以后必須放置一段時(shí)間才能進(jìn)行血小板計(jì)數(shù), 但放置多長(zhǎng)時(shí)間文獻(xiàn)報(bào)道不一。有認(rèn)為放置5 min者,有認(rèn)為放置15~30 min者, 還有認(rèn)為測(cè)定最佳時(shí)間為采血后30~60 min［2-5］。而作者的研究結(jié)果表明, 并不是每個(gè)患者在采血后立即檢測(cè)都會(huì)造成血小板降低, 這種發(fā)生率為30%左右, 有98.3%的人在采血后10 min測(cè)定血小板即可獲得準(zhǔn)確結(jié)果, 這與孫良宏的報(bào)道基本一致［6］, 15 min后檢測(cè)則更為穩(wěn)定。在門急診工作中, 由于一般末稍血采取后, 均能在30 min內(nèi)出具報(bào)告, 所以作者只研究了30 min內(nèi)血小板變化情況。實(shí)際上, 血液采集后, 標(biāo)本也不能放置太長(zhǎng), 否則會(huì)造成血小板變形自溶或產(chǎn)生構(gòu)型改變, 導(dǎo)致儀器不正常識(shí)別,再次造成血小板計(jì)數(shù)假性降低。

在采血后立即檢測(cè)會(huì)造成血小板假性降低,多數(shù)學(xué)者認(rèn)為血小板膜內(nèi)附著許多微絲, 其主要成分為肌動(dòng)蛋白和肌凝蛋白, 與微管環(huán)周束共同支持偽足的形成。當(dāng)采集末梢全血時(shí), 標(biāo)本中或多或少混入少量組織液, 加之EDTA抗凝劑的存在, 促使血小板的形態(tài)立即發(fā)生變化, 這時(shí)血小板外膜形成的微小管游離端向外伸展與膜內(nèi)的微絲共同作用,在血小板周圍形成絲狀偽足, 數(shù)個(gè)這樣的血小板偽足相互纏繞形成血小板假性聚集體, 在應(yīng)用血液分析儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí), 儀器誤認(rèn)為是小紅細(xì)胞或小白細(xì)胞而不納入血小板計(jì)數(shù)范圍, 造成血小板計(jì)數(shù)假性降低。隨著時(shí)間延長(zhǎng), EDTA能使血小板由盤狀變?yōu)榍驙? 血小板偽足回縮到胞質(zhì)內(nèi), 相互纏繞的血小板解散, 再次回到自然姿態(tài)［7］, 從而血小板計(jì)數(shù)恢復(fù)正常。

因此,在門急診檢驗(yàn)進(jìn)行血細(xì)胞分析時(shí),我們不能盲目求快,僅強(qiáng)調(diào)檢驗(yàn)報(bào)告的及時(shí)性,而忽略報(bào)告本身帶來(lái)的誤差。建議末稍血采集后至少應(yīng)放置10 min才能進(jìn)行血小板計(jì)數(shù), 這樣方能獲得準(zhǔn)確結(jié)果, 放置15 min以后檢測(cè)則更穩(wěn)定。

［1］ 葉應(yīng)嫵, 王毓三, 申子瑜．全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程．第3版．南京：東南大學(xué)出版社, 2006:136．

［2］ 馬雨?yáng)|.血細(xì)胞分析儀測(cè)定血小板時(shí)抗凝劑等影響因素分析.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床, 2010,7(11):1078-1080.

［3］ 申蕙蕓, 崔靜.血液分析儀計(jì)數(shù)血小板假性異常的影響因素分析.實(shí)用醫(yī)技雜志, 2008,15(28):3863-3864.

［4］ 鄧宗奎.血液分析儀血小板計(jì)數(shù)的影響因素與全程質(zhì)量控制.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床, 2009,6(19):1688.

［5］ 程暉,劉更夫,袁桂榮.血小板計(jì)數(shù)偏低誤差實(shí)驗(yàn)探討及對(duì)策.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2006,21(5):91-92.

［6］ 孫良宏.末梢全血待測(cè)時(shí)間對(duì)白細(xì)胞及血小板計(jì)數(shù)的影響.中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用, 2010,4(3):59-60.

［7］ 汪玄文.血液分析儀血小板計(jì)數(shù)影響因素的探討.工企醫(yī)刊, 2010, 23(1):75-76.

Influence of standing time of peripheral blood to the results of platelets count

SUN Jia-xiang, LI Yan.
Department of clinical laboratory,The People's Hospital of Deyang City, Deyang 618000, China

Objective To explore the influence of standing time of peripheral blood after taking to the results of platelets count .Methods Randomly selected 60 cases of healthy check-up people and taken the peripheral blood to anticoagulant EDTA-K2 tube,which was detected at 0 minute, 5 minutes, 10 minutes, 15 minutes and 30 minutes after blending by automatic hematology analyzer.Observed changes in platelets .At the same time, the peripheral blood platelets diluented with oxalic acid amine diluent were counted through microscope by artificial,which platelets count as reference.Results ①of the 60 cases, 41 cases each time period showed no significant difference in platelets count (P＞ 0.05); 18 cases at 0 minute and 5 minute platelets significantly reduced (P<0.01), 10 minutes later it stabilized; there was one case platelets stabilized only after 15 minutes.②Comparison of results with the manual counting, platelets significantly reduced at 0 minutes and 5 minutes, the difference was significant (P<0.01); 10 minutes later the platelets count result tended to be stable, 10 minutes, 15 minutes, 30 minutes count results were not significantly different (P＞0.05), respectively, compared with manual counting results had no statistical significance (P>0.05).Conclusions Peripheral blood after taking should be placed at least 10 minutes for platelets count, after 15 minutes platelets are more stable.

Peripheral blood; Standing time; Platelets count; Accuracy

618000 四川德陽(yáng)市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科