川芎嗪聚乳酸納米粒的制備和質(zhì)量研究

曾 莉， 毛春芹， 陸兔林， 錢 麗， 李爭艷， 蘇 桃

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)圖書館，江蘇南京 210046;2.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南京 210046;3.南京中醫(yī)藥大學(xué)科技處，江蘇南京 210046)

川芎為傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiongHort.的干燥根莖。具有活血行氣，祛風(fēng)止痛之功效［1-2］。川芎嗪是中藥川芎的有效成分之一，屬酰胺類生物堿，臨床多用于缺血性心、腦血管疾病的治療［3-4］。由于川芎嗪為脂溶性藥物，水中溶解度小，口服吸收較差且生物利用度低，影響了其臨床療效。納米粒載藥系統(tǒng)具有增加藥物的吸收和生物利用度，控制藥物的釋放，提高藥物的穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn)［5-7］。腹部手術(shù)后腹腔黏連、尤其是黏連性腸梗阻的問題，長期以來困擾著腹部外科醫(yī)生。據(jù)資料顯示，腹部手術(shù)后發(fā)生腹腔黏連者達(dá)90%以上［8-10］。川芎為活血化瘀類中藥，近來實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，川芎嗪在抗術(shù)后腹腔黏連方面有顯著而獨(dú)特的作用［11］。聚乳酸作為載體材料的納米控釋系統(tǒng)的研究越來越受到廣泛關(guān)注［12-13］，本實(shí)驗(yàn)選用具有良好生物相容性的可降解材料聚乳酸作為載體，采用自乳化法制備川芎嗪聚乳酸納米粒，優(yōu)化了其制備工藝，為開發(fā)臨床可供選擇的川芎嗪新型給藥系統(tǒng)提供參考。在后續(xù)研究中采用噴霧劑的形式術(shù)后腹腔內(nèi)一次性靶向給藥，最大限度減輕或者消滅術(shù)后可能存在的點(diǎn)狀、成角、索帶樣病理性黏連。

1 儀器與材料

電子分析天平 (FA1104N)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)，電子天平 (Mettler Toledo AG285)，Agilent1100高效液相色譜儀 (美國安捷倫科技有限公司)，GC—14B氣相色譜儀 (日本島津公司)，UV—2401紫外掃描分光光度儀 (日本島津公司)，KQ—500E型醫(yī)用超聲清洗器 (昆山超聲儀器有限公司)，85—2型恒溫磁力攪拌器 (江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)，HITACHI—55P—7高速冷凍離心機(jī) (日本日立公司)，H—600型透射電鏡 (日本Hiacthi公司)，Zeta sizer納米激光粒度分析儀 (Nano-ZS90，馬爾文)，自動雙重純水蒸餾器，透析袋(8 000～10 000，上海博亞生物科技有限公司)。

川芎嗪對照品 (經(jīng)歸一化法測得純度為98.64%，可用于定量測定，南京澤郎醫(yī)藥科技有限公司)，泊洛沙姆188(美國Sigma公司)，聚乳酸 (MW=20 000，濟(jì)南岱罡生物科技有限公司)，甲醇為色譜純，水為重蒸水 (自制)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 納米粒的制備

以投料比1∶4的比例取川芎嗪和聚乳酸溶于丙酮溶液，使得丙酮溶液中聚乳酸的質(zhì)量濃度為20 mg/mL，此溶液作為油相;取體積為油相體積4倍量的0.25%泊洛沙姆溶液作為水相，將油相在高速磁力攪拌的條件下注入水相之中，在恒溫30℃的條件下繼續(xù)高速攪拌70 min，揮盡丙酮，即得。

2.2 形態(tài)觀察

取川芎嗪聚乳酸納米?；鞈乙哼m量，在透射電鏡 (transmission electron microscopy，TEM)下進(jìn)行形態(tài)觀察并拍照，從TEM照片可見，納米粒呈圓整球形，表面圓滑，粒徑均一性良好，納米粒之間未見黏連，分散性良好。其透射電子顯微鏡照片見圖1。

圖1 川芎嗪納米粒電鏡圖Fig.1 Transmission electron micrograph of TMP-NP

2.3 粒徑分布

室溫條件下，取少量川芎嗪聚乳酸納米粒混懸液用適量蒸餾水稀釋后置于納米激光粒度分析儀的樣品管中，測定納米粒的粒徑及分布。由測定結(jié)果可知，納米粒的平均粒徑為210 nm，分散系數(shù)(PDI)為0.09左右。結(jié)果見圖2。

圖2 川芎嗪納米粒粒徑分布Fig.2 Size distribution graph of TMP-NP

2.4 包封率和載藥量

取適量川芎嗪聚乳酸納米粒溶液，在4℃的溫度下，以25 000 r/min的速度離心60 min，對川芎嗪納米粒溶液進(jìn)行游離藥物和納米粒的分離，精密量取上清液0.2 mL，置于5 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得，將溶液注入液相色譜儀中進(jìn)行測定，測得上清液中藥物的含量。

精密量取0.2 mL川芎嗪聚乳酸納米粒溶液，置于5 mL量瓶中，加入0.5 mLN，N-二甲基甲酰胺，振搖2 min，加甲醇稀釋至刻度，即得，將溶液在注入液相色譜儀中進(jìn)行測定，測得納米粒溶液中總藥物的含量。

按照以下公式進(jìn)行計算，得出包封率和載藥量，結(jié)果見表1。

表1 3批川芎嗪納米粒包封率和載藥量Tab.1 Encapsulation efficiency and drug loadings of TMP-NP

包封率 (EE%)=(W藥-W游)/W藥×100%

載藥量 (DL%)=(W藥-W游)/W總×100%

式中W藥表示總藥物量，W游表示未包封于納米粒中游離的藥量，W總表示含藥納米粒的總質(zhì)量。

2.5 藥物滲漏率測定

根據(jù)《中國藥典》2010版二部附錄ⅩⅨE“微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則”中規(guī)定，進(jìn)行滲漏率的檢查，由以下公式計算:

滲漏率=產(chǎn)品在貯藏一定時間后滲漏到介質(zhì)中的藥量/產(chǎn)品在貯藏前包封的藥量×100%

每隔10 d測定一次滲漏率，共測定了60 d內(nèi)的川芎嗪納米粒的滲漏率，第60天的平均滲漏率為4.80%。

2.6 體外釋藥性

2.6.1 釋放介質(zhì) 在研究納米粒體外釋放時，為了模擬體內(nèi)環(huán)境，選擇生理鹽水或磷酸鹽緩沖液作為釋放介質(zhì)。川芎嗪為脂溶性藥物，水中溶解度小。根據(jù)文獻(xiàn)報道和川芎嗪溶解性試驗(yàn)，采用pH7.4的磷酸緩沖液 (取磷酸二氫鉀1.36 g，加0.1 mol/L氫氧化鈉溶液79 mL，用水稀釋至200 mL，即得)+0.25%泊洛沙姆溶液作為釋放介質(zhì)。

2.6.2 釋放介質(zhì)體積 根據(jù)川芎嗪在0.25%泊洛沙姆溶液的溶解度，選擇30 mL的釋放介質(zhì)。

2.6.3 體外釋藥方法 采用動態(tài)透析法測定川芎嗪納米粒的釋放度。首先將透析袋預(yù)先置于釋放介質(zhì)中浸泡12 h，將透析袋一端扎緊，備用。分別精密量取川芎嗪原料藥溶液和川芎嗪納米粒溶液1 mL裝入預(yù)先處理好的透析袋中，扎緊另一端，置于30 mL釋放介質(zhì)中，溫度為37℃，轉(zhuǎn)速適當(dāng)，分別在不同時間點(diǎn)取樣1 mL，同時補(bǔ)充等溫等體積的釋放介質(zhì)。分別測定川芎嗪原料藥與川芎嗪納米粒藥物釋放量，計算累積釋放度。以時間 (min)為X軸，累積釋放率 (%)為Y軸繪制釋放曲線，結(jié)果見圖3。

圖3 川芎嗪和納米粒溶液釋藥曲線Fig.3 Curve of TMP-NP drug release

3 討論

3.1 川芎嗪納米粒的各項(xiàng)評價指標(biāo)均顯示該納米粒的質(zhì)量良好。工藝簡便，體外釋藥緩慢，穩(wěn)定性好。包封率為41%左右，不及藥典規(guī)定的80%，出現(xiàn)此現(xiàn)象是由于本研究中未將溶液中的川芎嗪納米粒單獨(dú)分離之后計算納米粒固體的包封率，而計算的是整個川芎嗪納米粒溶液的包封率。

3.2 川芎嗪在30 min內(nèi)即釋放完全 (累積釋放率＞90%)，納米粒在1 000 min時釋放完全。比較川芎嗪溶液和川芎嗪納米粒溶液的釋藥結(jié)果可以看出，川芎嗪納米粒溶液相比川芎嗪原料藥具有明顯的緩釋作用。

3.3 由于未將游離藥物分離，所以在考察納米粒體外釋藥性的時候，在最初的一段時間內(nèi)藥物釋放的速率比較快，但是在之后的考察時間里納米粒表現(xiàn)出明顯的緩釋性。

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