三種非液態(tài)眼用制劑對(duì)豚鼠眼瞼及淚囊周圍組織的不良反應(yīng)觀察

高建偉，楊旭東，王西良，景善雨，張阿芳

(焦作市五官醫(yī)院，河南焦作 454000)

近年來，眼膏和凝膠制劑在眼科疾病的治療方面出現(xiàn)一些新用法，如淚道手術(shù)后在淚道內(nèi)注入各種眼膏和凝膠制劑，以期在淚道保留較長時(shí)間，防止再次粘連［1～5］。但臨床上可見到淚道術(shù)后和眼科術(shù)后眼膏進(jìn)入眼周圍軟組織引起嚴(yán)重不良反應(yīng)的患者，治療比較棘手。2012年6月～2013年1月，本研究將三種眼用非液態(tài)制劑分別注射于豚鼠下眼瞼和淚囊周圍皮下輪匝肌組織中，觀察該三種眼用非液態(tài)制劑對(duì)豚鼠眼瞼和淚囊周圍組織的不良反應(yīng)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組與模型制作 清潔級(jí)豚鼠72只，2～4周齡，體質(zhì)量120～150 g。隨機(jī)分為A、B、C組，每組各24只。豚鼠以速眠新0.1 mL/kg進(jìn)行腹腔麻醉。剪去下眼瞼及周圍毛發(fā)，暴露皮膚。眼周吉爾碘消毒。顯微鏡下用1 mL注射器加5 mL注射器針頭，在下瞼緣下3 mm平行于下瞼緣進(jìn)針2 mm。A、B、C組分別于眼瞼輪匝肌及淚囊周圍注射以凡士林、液體石蠟和羊毛脂為基質(zhì)的紅霉素眼膏，以玻璃酸鈉為基質(zhì)的左氧氟沙星眼用凝膠，以及甲基纖維素各0.5 mL，在下瞼和淚囊周圍形成直徑15 mm的皮丘。

1.2 觀察指標(biāo) 分別于第1、3、7天測(cè)量三組眼瞼充血腫脹的直徑，于第 1、3、7、14、21、28 天測(cè)量各組豚鼠注射眼下瞼注射點(diǎn)為中心結(jié)節(jié)形成的直徑。上述6個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組分別處死4只豚鼠，平行于下瞼緣切開皮膚，從皮下向周圍分離，完全掀起注射區(qū)皮膚，在手術(shù)顯微鏡下觀察皮下組織內(nèi)藥物的擴(kuò)散情況，并測(cè)量組織內(nèi)擴(kuò)散的直徑的大小。取組織標(biāo)本切片做HE染色，觀察組織病理學(xué)改變。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包。計(jì)量資料比較采用單因素方差分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 眼瞼充血腫脹情況 A組注射后第1天眼瞼充血腫脹最重，直徑超過20 mm，甚至表面壞死形成潰瘍，第14天才完全消退。B組第1天全部充血腫脹，第3天有14只眼充血腫脹消退，第7天僅有2只眼還有紅腫;C組第1天眼瞼輕度充血腫脹，第3天完全消退。A組第1、3、7天眼瞼腫脹直徑均高于B、C 組(P 均 ＜0.05)。見表1。

表1 三組注射后第1、3、7天眼瞼腫脹直徑比較()

表1 三組注射后第1、3、7天眼瞼腫脹直徑比較()

注:與 A組比較，*P ＜0.05

組別 腫脹直徑第1天 第3天 第7天A組21.20 ±1.26 15.93 ±1.02 5.74 ±0.52 B 組 12.40 ±1.02* 4.50 ±1.29* 0.74 ±1.32*C 組 6.67 ±2.44* 2.50 ±0.93* 0.09 ±0.38*

2.2 結(jié)節(jié)形成情況 A組注射第1天注射點(diǎn)周圍均有結(jié)節(jié)形成，觸診結(jié)節(jié)略小于紅腫邊界，第3天結(jié)節(jié)與腫脹直徑相似，第14天后充血水腫消退，結(jié)節(jié)直徑仍有10 mm，第21、28天結(jié)節(jié)直徑減少不明顯;B組注射后第1天結(jié)節(jié)直徑(6.38±0.48)mm，消退較快，第21、28天各有2只眼結(jié)節(jié)未消退;C組第1天有3只眼有較小結(jié)節(jié)形成，余眼瞼均正常，第3天僅有1只眼可觸到結(jié)節(jié)，一直持續(xù)到第28天，一直未消退。A組各時(shí)間點(diǎn)注射點(diǎn)周圍結(jié)節(jié)直徑均高于B、C組(P均 ＜0.05)，B、C 組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

表2 三組各時(shí)點(diǎn)注射點(diǎn)周圍結(jié)節(jié)直徑比較()

注:與 C 組比較，*P ＜0.05

組別 n結(jié)節(jié)直徑(mm)第1天 第3天 第7天 第14天 第21天 第28天A 組 24 16.90 ±0.79* 13.90 ±0.90* 14.00 ±1.02* 10.60 ±0.74* 10.60 ±0.74* 8.85 ±0.26*B 組 24 6.38 ±0.48* 1.73 ±1.78* 0.83 ±0.89* 0.52 ±0.77 0.33 ±0.63 0.25 ±0.5 C 組 24 0.15 ±0.41 0.12 ±0.37 0.14 ±0.38 0.18 ±0.41 0.13 ±0.35 0.25 ±0.5

2.3 眼用制劑擴(kuò)散程度 A組第1天藥物擴(kuò)散直徑明顯大于注射時(shí)的15 mm，周圍組織間隙可見眼膏浸潤，第3天直徑縮小，第7天被纖維組織所包裹，第14天后伴隨纖維組織收縮，直徑為(13.42±0.74)mm;B組第1天4只眼中，有3只有少量藥物存在于組織間隙，直徑明顯小于注射時(shí)的15 mm，第3天4只眼有3只完全吸收，第28天藥物完全吸收;C組第1天4只眼中，有2只殘存未吸收的甲基纖維素，第3天藥物完全吸收。A組各時(shí)點(diǎn)藥物擴(kuò)散直徑均高于B、C組，B組第1、3、7天藥物擴(kuò)散直徑高于C組(P均＜0.05)。見表3。

2.4 組織病理學(xué)觀察結(jié)果 A組注射后第1天可見眼膏滲入組織間隙，周圍血管擴(kuò)張，可見紅細(xì)胞、炎癥細(xì)胞浸潤和壞死組織;第3天周圍壞死更明顯，中性粒細(xì)胞減少，嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞逐漸增多，可見單核巨噬細(xì)胞，周圍可見少量纖維組織增生;第7天炎癥細(xì)胞減少，壞死組織吸收，周圍成纖維細(xì)胞增生明顯，將病灶包裹;第14天增生的纖維組織將病灶包繞，炎癥細(xì)胞基本消失，成纖維細(xì)胞增生活躍;第21、28天纖維組織炎癥細(xì)胞消失，注射區(qū)可見瘢痕組織。B組注射后第1天未見明顯腔隙，注射區(qū)少量炎癥細(xì)胞浸潤，主要為中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞，周圍血管擴(kuò)張，壞死不明顯;第3天炎癥細(xì)胞基本消退，少量纖維組織增生;第7天少量瘢痕組織形成，結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常。C組注射后第1天僅有少量炎癥細(xì)胞浸潤，以中性粒細(xì)胞為主，可見少量嗜酸性粒細(xì)胞，未見明顯壞死;第3天炎癥細(xì)胞消失，未見纖維組織增生，眼瞼結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常。

表3 三組各時(shí)點(diǎn)藥物擴(kuò)散直徑比較()

表3 三組各時(shí)點(diǎn)藥物擴(kuò)散直徑比較()

注:與 C 組比較，*P ＜0.05

組別 n藥物擴(kuò)散直徑(mm)第1天 第3天 第7天 第14天 第21天 第28天A 組 24 18.00 ±0.71* 15.20 ±0.81 15.20 ±0.81 10.10 ±0.94* 9.34 ±0.50* 8.85 ±0.26*B 組 24 6.03 ±0.62 4.83 ±0.33* 3.42 ±0.79* 0.75 ±1.50 0.50 ±1.00 －C組24 3.65 ±0.48 － － － － －

3 討論

研究表明，以凡士林、羊毛脂和液體石蠟為基質(zhì)的紅霉素眼膏［6，7］。注入眼瞼后，可在輪匝肌層之間形成藥物腔隙，在表面形成一直徑15 mm的皮丘。A組注射后第1天眼瞼周圍血管擴(kuò)張，局部充血腫脹，壓力增高，炎癥細(xì)胞浸潤破裂，釋放溶酶體和炎癥介質(zhì)，局部缺血甚至壞死形成潰瘍。眼膏在體溫下，溶解形成稀薄的液狀，進(jìn)入周圍組織間隙，引起炎癥細(xì)胞浸潤、血管擴(kuò)張，眼瞼充血腫脹直徑明顯大于注射時(shí)的范圍。而隨著局部炎癥消退，充血腫脹逐漸減退，纖維母細(xì)胞增生，產(chǎn)生大量纖維組織包裹眼膏，在局部形成結(jié)節(jié)，眼膏的擴(kuò)散受到局限。A組充血腫脹、結(jié)節(jié)形成直徑均高于B、C組，說明紅霉素眼膏進(jìn)入組織間引起的炎癥反應(yīng)明顯，纖維組織增生，將眼膏機(jī)化包裹，難以被組織降解吸收。

玻璃酸鈉是眼科手術(shù)常用的黏彈劑，注入組織后，在局部的代謝量很少，主要擴(kuò)散至血中，在肝臟降解成小分子產(chǎn)物而排泄［8］。玻璃酸鈉可保護(hù)組織免受蛋白溶解酶的降解，減輕炎癥介質(zhì)對(duì)痛覺受體的刺激作用，減輕多形核白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞的趨化作用，抑制巨噬細(xì)胞吞噬，清除自由基等。由于玻璃酸鈉是一種高分子物質(zhì)，經(jīng)過血管壁吸收困難，在局部停留時(shí)間較長，本研究發(fā)現(xiàn)，B組應(yīng)用以玻璃酸鈉為基質(zhì)的左氧氟沙星眼用凝膠后3 d左右藥物吸收，且藥物在局部引起的炎癥反應(yīng)甚微，組織結(jié)構(gòu)能夠恢復(fù)正常。另外，玻璃酸鈉還能促進(jìn)組織損傷修復(fù)，在損傷初期，依靠本身的氨基葡聚糖成分停留于創(chuàng)面，與血纖維蛋白結(jié)合，構(gòu)成細(xì)胞間基質(zhì)的支架，由此來調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞增生和肉芽組織形成。所以玻璃酸鈉注入組織后雖然局部停留時(shí)間較長，但不會(huì)引起嚴(yán)重不良反應(yīng)。

甲基纖維素與玻璃酸鈉一樣，是眼科手術(shù)所使用的黏彈劑，具有無毒、無菌、無致免疫反應(yīng)，不含致熱源和蛋白質(zhì)。其無生物活性，組織相容性好，不易引起炎癥反應(yīng)和組織增生、粘連，容易在組織內(nèi)代謝［9～11］。本研究發(fā)現(xiàn)，C組應(yīng)用甲基纖維素注入眼瞼組織后被迅速吸收，幾乎不引起炎癥反應(yīng)。與玻璃酸鈉相比，甲基纖維素黏稠度更低，分子量更小，具有親水性，易被稀釋，能迅速進(jìn)入血液循環(huán)而被降解。故C組第1、3、7天藥物擴(kuò)散直徑小于B組。

本研究結(jié)果表明，以凡士林、羊毛脂和液體石蠟為基質(zhì)的紅霉素眼膏進(jìn)入豚鼠眼瞼組織難以被吸收降解，注射第1天即可引起嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，引起多種炎癥細(xì)胞浸潤和組織壞死。故不建議注入到組織內(nèi)，以免引起嚴(yán)重不良反應(yīng)。玻璃酸鈉和甲基纖維素對(duì)眼瞼組織相對(duì)無害，能夠被較快吸收，致免疫反應(yīng)作用較輕，可在淚道手術(shù)后注入，起到軟性支撐的作用。

［1］劉雁，封衛(wèi)亞，董梅.人工鼻淚管植入聯(lián)合典必殊眼膏留置在淚道疾病中的應(yīng)用［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2010，39(7):40-41.

［2］陳洪.淚道探通后玻璃酸鈉與典必殊眼膏聯(lián)合應(yīng)用治療慢性淚囊炎的療效分析［J］.中國創(chuàng)新醫(yī)學(xué)，2011，8(27):32-33.

［3］嚴(yán)呂霞，嚴(yán)錦云.淚道探通聯(lián)合眼膏注入治療慢性淚囊炎284例臨床分析［J］.國際眼科雜志，2010，10(8):68.

［4］楊效群，曹彥華，張俊萍.玻璃酸鈉在先天性淚道阻塞探通術(shù)后的應(yīng)用［J］.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2010，32(11):56-57.

［5］石佳，羊薇，謝敏.淚道成形術(shù)聯(lián)合淚道擴(kuò)張和典必殊眼膏治療淚道阻塞療效觀察［J］.海南醫(yī)學(xué)，2012，23(12);29-30.

［6］陳祖基.眼科臨床藥理學(xué)［M］.北京:化工工業(yè)出版社，2002:35-36.

［7］Greaves JL，Wilson CG，Birmingham AT.Assessment of the precorneal residence of an ophthalmic ointment in healthy subjects［J］.Clin Pharmacol，1993，35(2):188-192.

［8］Schoenwald RD，Zimmerman TJ.Ocular pharmacokinetics［M］.Philadelphia:Lippincott-Raven，1997:119.

［9］Malhotra M，Majumdar DK.Aqueous，oil，and ointment formulations o ketorolac:efficacy against prostaglandin E2-induced ocular inflammation and safety:a technical not［J］.AAPS Pharm，2006，7(4):96.

［10］Chirkov AI，Sobolenko AK，Li VN，et al.Ways to improve the technologyfor preparing ointments under field conditions［J］.Voen Med Zh，1991，10(6):63-65.

［11］Hoenwald RD，Deahpande GS，Rethwisch DG.Penetration into the anterior chanber via the conjunctival/scleral pathway［J］.Ocular Pharmacol Therapeut，1997，13(8):41-59.