奶牛隱性乳房炎診斷方法的對(duì)比試驗(yàn)

文 / 周慶民 馮萬(wàn)宇 侯美如 徐 馨 秦 博 黃 健

（黑龍江省獸醫(yī)科學(xué)研究所）

奶牛隱性乳房炎是奶牛生產(chǎn)中最常見、最多發(fā)的疾病之一，給牧場(chǎng)帶來(lái)的經(jīng)濟(jì)損失巨大。奶牛發(fā)生隱性乳房炎時(shí)，從外觀上不能診斷，但乳汁中體細(xì)胞數(shù)量增多，因此，檢測(cè)牛乳中的體細(xì)胞數(shù)是判斷奶牛隱性乳房炎發(fā)生的主要依據(jù)。本試驗(yàn)分別采用凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法和體細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀檢測(cè)法對(duì)牛乳體細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行檢測(cè)，并以體細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀檢測(cè)的牛乳體細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，用凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法檢測(cè)的牛乳體細(xì)胞數(shù)與其對(duì)比，確定凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法檢測(cè)牛乳體細(xì)胞數(shù)的準(zhǔn)確性。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)牛只

黑龍江省齊齊哈爾市郊區(qū)一大型奶牛場(chǎng)，選擇496 頭無(wú)乳房炎臨床癥狀的中國(guó)荷斯坦泌乳牛，年齡、胎次、體重、泌乳月、產(chǎn)奶量等不限，時(shí)間為2010年8月23日。

1.2 診斷液及體細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀

凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法診斷液由本研究室研制。體細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀為FossMatic 5000。

1.3 日糧與飼養(yǎng)管理

一切按原生產(chǎn)管理方法和飼養(yǎng)方式進(jìn)行。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法

取每頭牛的混合奶樣，同時(shí)用凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法和體細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀進(jìn)行檢測(cè)，然后統(tǒng)計(jì)、對(duì)比檢測(cè)結(jié)果。

1.4.1 奶樣的采集

擦洗乳房后，每個(gè)乳頭棄去頭二把奶，然后各擠出5 mL奶，混合均勻，每頭牛的奶樣為20 mL，檢測(cè)之前低溫保存。

1.4.2 凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法

取混合奶樣2 mL放入檢驗(yàn)盤中，加入2 mL診斷液（用定量加液器或刻度吸管），輕輕旋轉(zhuǎn)檢驗(yàn)盤，隨著搖動(dòng)進(jìn)行判定（在奶與診斷液混合10～25 s內(nèi)判定），記錄判定結(jié)果。

判定標(biāo)準(zhǔn)如下：“－”，混合物呈液狀，杯底無(wú)沉淀物可見；“±”，混合物呈液狀，杯底可出現(xiàn)微量沉淀，繼續(xù)搖晃即消失?！?”，杯底出現(xiàn)少量粘性沉淀，但不成膠狀，流動(dòng)性大，搖動(dòng)時(shí)，沉淀物散布于杯底，并有一定的粘附性?！?+”，杯底出現(xiàn)較多粘稠沉淀，呈膠狀，傾斜檢驗(yàn)杯時(shí)，沉淀物有明顯粘附于杯底面，并難以流動(dòng)，旋轉(zhuǎn)檢驗(yàn)盤時(shí)，膠狀物有聚中心傾向?！?++”，混合物幾乎完全形成膠狀物，并粘附于杯底、旋轉(zhuǎn)檢驗(yàn)盤時(shí)難以散開。“++++”，混合物立即呈膠狀物，牛奶尚未與診斷液完全混合就已凝成膠狀，牛奶出現(xiàn)夾心現(xiàn)象。

1.4.3 體細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀檢測(cè)法

按照FossMatic 5000體細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀檢測(cè)方法分別對(duì)每份奶樣進(jìn)行體細(xì)胞數(shù)檢測(cè)，記錄檢測(cè)結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 FossMatic 5000檢測(cè)情況

從表1可以看出，在檢測(cè)的496 頭奶牛中，體細(xì)胞數(shù)在50 萬(wàn)個(gè)/mL以上的有167 頭，占33.67%。

2.2 凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法檢測(cè)情況

從表2可以看出，在檢測(cè)的496頭奶牛中，體細(xì)胞數(shù)在“+”以上的176 頭，占35.48%。

2.3 凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法檢測(cè)與FossMatic 5000檢測(cè)結(jié)果的比較

從表3可以看出，在FossMatic 5000檢測(cè)體細(xì)胞數(shù)0～49 萬(wàn)個(gè)/mL的329 頭奶牛中，凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法檢測(cè)“-”或“±”的奶牛為317 頭，相符率為96.35%；FossMatic 5000檢測(cè)體細(xì)胞數(shù)在50 萬(wàn)個(gè)/mL以上的167 頭奶牛中，凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法檢測(cè)一個(gè)“+”以上的奶牛為161 頭，相符率為96.41%。

從表4可以看出，體細(xì)胞數(shù)在29 萬(wàn)個(gè)/mL以上，凝乳試驗(yàn)無(wú)反應(yīng)，可判斷為“-”；體細(xì)胞數(shù)在30 萬(wàn)～49 萬(wàn)個(gè)/mL，凝乳試驗(yàn)略有變化，可判斷為“±”；體細(xì)胞數(shù)在50 萬(wàn)～79 萬(wàn)個(gè)/mL，凝乳試驗(yàn)反應(yīng)輕微，反應(yīng)緩慢，可判斷為“+”；體細(xì)胞數(shù)在80 萬(wàn)～149 萬(wàn)個(gè)/mL，凝乳試驗(yàn)反應(yīng)明顯，反應(yīng)速度較快，可判斷為“++”；體細(xì)胞數(shù)在150 萬(wàn)～499 萬(wàn)個(gè)/mL，凝乳試驗(yàn)反應(yīng)較重，反應(yīng)速度快，可判斷為“+++”；體細(xì)胞數(shù)在500 萬(wàn)個(gè)/mL以上，凝乳試驗(yàn)反應(yīng)嚴(yán)重，反應(yīng)瞬間完成，可判斷為“++++”。

表1 FossMatic 5000檢測(cè)牛乳體細(xì)胞數(shù)情況

表2 凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法檢測(cè)牛乳體細(xì)胞數(shù)情況

表3 凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法與FossMatic 5000檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

3 討論與結(jié)論

3.1 牛奶中體細(xì)胞的主要成分是白細(xì)胞，健康乳腺奶中不同類型的體細(xì)胞百分比不同，其中巨噬細(xì)胞占60%，淋巴細(xì)胞占25%，嗜中性或多型核嗜中性白細(xì)胞占15%，國(guó)際上通常用每毫升奶中體細(xì)胞數(shù)（SCC/mL）來(lái)表示。奶牛的免疫系統(tǒng)通過(guò)釋放中性粒細(xì)胞吞噬和破壞細(xì)菌，幫助修復(fù)由于感染而受損的乳腺分泌組織，乳房感染發(fā)炎后，大量白細(xì)胞進(jìn)入乳腺，部分上皮細(xì)胞脫落，使乳汁中體細(xì)胞數(shù)顯著升高，因此，在被感染的乳腺中體細(xì)胞的數(shù)量增多。本次試驗(yàn)中隨著乳中體細(xì)胞數(shù)量的增加，凝乳試驗(yàn)反應(yīng)程度增強(qiáng)，表明凝乳試驗(yàn)判斷隱性乳房炎的可靠性、準(zhǔn)確性和可行性。

3.2 正常情況下，牛奶中含體細(xì)胞數(shù)為2 萬(wàn)～20 萬(wàn)個(gè)/mL，國(guó)際上將每毫升50 萬(wàn)個(gè)體細(xì)胞數(shù)定為乳房炎的基準(zhǔn)。根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果，采用FossMatic 5000檢測(cè)法，得到的隱性乳房炎診斷率是33.67%，凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法診斷率是35.48 %，兩種方法診斷率接近，差異不顯著，而且體細(xì)胞數(shù)量的變化與凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法的奶樣變化程度基本相符，都能準(zhǔn)確地反映出奶牛隱性乳房炎的發(fā)病率。其數(shù)據(jù)的差異可能是凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法存在眼觀判斷誤差造成的。

3.3 以FossMatic 5000檢測(cè)的體細(xì)胞數(shù)為基準(zhǔn)，凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法隱性乳房炎陰性診斷相符率為96.35%，隱性乳房炎陽(yáng)性診斷相符率為96.41%，由此可以確定凝乳試驗(yàn)反應(yīng)法診斷準(zhǔn)確率在96%以上。