無氮飼糧法與饑餓法對測定揚(yáng)州鵝內(nèi)源性氨基酸排泄量的影響

蔣銀屏 王志躍 周春江 楊海明

(揚(yáng)州大學(xué)動物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，揚(yáng)州 225009)

家禽飼糧中氨基酸消化率的測定方法很多，目前普遍采用體內(nèi)消化率試驗(yàn)法。Sibbald的真代謝能法是目前測定家禽飼糧氨基酸消化率的主要方法。測定過程中家禽是否去盲腸以及內(nèi)源性氨基酸測定方法的不同會影響測定結(jié)果的可靠性。隨著動物氨基酸營養(yǎng)研究越來越深入，國外學(xué)者發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過內(nèi)源矯正的飼糧可消化氨基酸比總氨基酸和表觀可消化氨基酸具有更好的可加性和重復(fù)性［1－2］。家禽采用可消化氨基酸營養(yǎng)體系是必然趨勢。對于氨基酸表觀消化率和氨基酸真消化率，內(nèi)源性氨基酸的準(zhǔn)確估計(jì)是測定飼糧氨基酸消化率的關(guān)鍵。內(nèi)源性氨基酸的損失是動物生長過程中不可避免的，研究表明，一定條件下，同種動物有一相對穩(wěn)定的內(nèi)源性氨基酸基本排泄量［3－4］。目前測定鵝內(nèi)源性氨基酸排泄量的方法主要有:無氮飼糧法、饑餓法、回歸法、肌基蛋白質(zhì)法、同位素示蹤法、一次注射法和無氮飼糧+假定可100%吸收氮源法等。其中，最常用的方法是無氮飼糧法和饑餓法。根據(jù)這2種不同的方法，不同學(xué)者在不同的家禽上得出不同的結(jié)論。國外學(xué)者得出的結(jié)論表明，2種方法測定的內(nèi)源性氨基酸排泄量差異不顯著［5－6］;而國內(nèi)的學(xué)者得出用無氮飼糧法測定的內(nèi)源性氨基酸排泄量顯著高于饑餓法的結(jié)論［7－8］。另外，對于是否應(yīng)該將盲腸切除，有些研究者認(rèn)為盲腸切除后，試驗(yàn)禽處于一種非正常生理狀態(tài)，所以主張不切除盲腸。但是由于禽類盲腸內(nèi)棲居著大量微生物，為減少盲腸內(nèi)微生物對氨基酸消化率的干擾，提出了測定飼糧氨基酸消化率時(shí)應(yīng)切除盲腸的觀點(diǎn)［9－10］。因此，為了使可消化氨基酸營養(yǎng)體系盡早為我國家禽飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)所采用，本試驗(yàn)旨在通過無氮飼糧法和饑餓法測定正常鵝與去盲腸鵝內(nèi)源性氨基酸排泄量，就2種方法測定值的差異作一比較，為合理配制鵝飼糧提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)飼糧為無氮飼糧，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 試驗(yàn)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the experimental diet(air-dry basis) %

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

選擇體況良好、體重基本一致的成年揚(yáng)州鵝公鵝12只，隨機(jī)分成2組，飼養(yǎng)于不銹鋼代謝籠中，每籠1只。其中1組已施行盲腸切除手術(shù)，術(shù)后恢復(fù)4周，且恢復(fù)良好。試驗(yàn)前2周驅(qū)蟲，每2天環(huán)境消毒1次。

試驗(yàn)分2期，分別用無氮飼糧法與饑餓法測定內(nèi)源性氨基酸排泄量，第1期試驗(yàn)結(jié)束后，試驗(yàn)鵝休整9 d，試驗(yàn)前與試驗(yàn)結(jié)束后將每只鵝的體重都進(jìn)行稱量并記錄，當(dāng)體重達(dá)到試驗(yàn)前水平即可進(jìn)行第2期試驗(yàn)。

代謝試驗(yàn)采用24 h禁食+24 h全收糞法。無氮飼糧法是在正式試驗(yàn)前，試驗(yàn)鵝禁食24 h，自由飲水。隨后，每只鵝用漏斗與PVC管做成的強(qiáng)飼器強(qiáng)飼無氮飼糧60 g/只，收集24 h內(nèi)試驗(yàn)鵝的排泄物，期間正常供水。饑餓法是在試驗(yàn)鵝禁食24 h之后，繼續(xù)禁食24 h，收取后24 h的排泄物，期間試驗(yàn)鵝正常飲水。收集好的排泄物置于直徑20 cm玻璃皿中，60℃鼓風(fēng)干燥至恒重，自然狀態(tài)下回潮24 h后稱重，粉碎，裝入樣品袋密封后，于－20℃保存，待測。

1.3 樣品分析

風(fēng)干糞樣經(jīng)過酸水解初處理后，采用PITC柱前衍生高效液相色譜法(日本島津LC－15C高效液相色譜儀)測定氨基酸(不包括色氨酸)含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用 Excel 2007進(jìn)行整理，SPSS 13.0軟件one-way ANOVA程序進(jìn)行方差分析和t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 無氮飼糧法與饑餓法對正常鵝與去盲腸鵝24 h內(nèi)源物排泄量的影響

從表2可以看出，無氮飼糧法測得的內(nèi)源物排泄量去盲腸組高于正常組(P＞0.05)，饑餓法測得的內(nèi)源物排泄量去盲腸組略低于正常組(P＞0.05);2種測定方法測得的內(nèi)源物排泄量，無論是在正常組間還是去盲腸組間，差異均不顯著(P＞0.05)。

2.2 無氮飼糧法與饑餓法測定正常鵝與去盲腸鵝24 h內(nèi)源性氨基酸排泄量

從表3可以看出，同一測定方法的組間比較，饑餓法測定內(nèi)源性氨基酸排泄量時(shí)，除天冬氨酸和纈氨酸在正常組和去盲腸組間差異顯著(P＜0.05)外，其他各氨基酸組間差異均不顯著(P＞0.05)。無氮飼糧法測定內(nèi)源性氨基酸排泄量時(shí)，正常組的精氨酸極顯著低于去盲腸組(P＜0.01)，絲氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸顯著高于去盲腸組(P＜0.05)，其他氨基酸組間差異不顯著(P＞0.05)。

饑餓法與無氮飼糧法之間的比較，在正常組，無氮飼糧法測定的內(nèi)源性氨基酸排泄量中，除組氨酸(P＞0.05)外，其他氨基酸均極顯著高于饑餓法(P＜0.01)。在去盲腸組，無氮飼糧法測得的內(nèi)源性氨基酸排泄量中，除胱氨酸(P＞0.05)外，其他氨基酸均極顯著高于饑餓法(P＜0.01)。

表2 無氮飼糧法與饑餓法測定正常鵝與去盲腸鵝24 h內(nèi)源物排泄量的比較Table 2 Comparison of the amount of endogenous excreta in 24 h in intact and caecectomized geese determined by nitrogen-free diet method and fasting method g/bird

表3 無氮飼糧法與饑餓法測定正常鵝與去盲腸鵝24 h內(nèi)源性氨基酸排泄量Table 3 Endogenous amino acid losses in 24 h in intact and caecectomized geese determined by nitrogen-free diet method and fasting method mg/bird

3 討論

3.1 無氮飼糧法與饑餓法測定正常鵝與去盲腸鵝內(nèi)源性氨基酸排泄量的比較

無氮飼糧法與饑餓法較其他測定家禽內(nèi)源性氨基酸排泄量的方法有明顯的優(yōu)勢:操作簡單、成本較低，目前仍是測定家禽內(nèi)源性氨基酸排泄量的經(jīng)典和常用方法。但是關(guān)于這2種方法的報(bào)道并不一致。Likuski等［5］報(bào)道，采食玉米淀粉的無氮飼糧法和饑餓法，公雞內(nèi)源性氨基酸排泄量無顯著差異;Sibbald［11］也得出相似結(jié)論，認(rèn)為2種方法都可用于飼糧真氨基酸消化率的測定;Green等［6］研究了公雞對玉米、小麥、大麥中氨基酸的消化率，無氮飼糧法測得的原料中氨基酸的表觀利用率和真利用率在去盲腸組和正常組之間差異不顯著。李峰娟等［12］發(fā)現(xiàn)，無氮飼糧法和饑餓法測定的多種內(nèi)源性氨基酸排泄量存在顯著或極顯著差異，無氮飼糧法測定的內(nèi)源性氨基酸排泄量顯著高于饑餓法，試驗(yàn)結(jié)果與望丕縣等［13］、Parsons［14］、秦學(xué)忠等［15］研究結(jié)果相似。

Ravindran等［16］研究表明，無氮飼糧法測定內(nèi)源性氨基酸排泄量具有一定優(yōu)勢。首先，饑餓法測定時(shí)，由于試驗(yàn)動物缺乏食物，加重了消化道及胃黏膜表層的脫落，加上試驗(yàn)動物在饑餓過程中內(nèi)分泌重吸收增加，低估了內(nèi)源性氨基酸的損失量。其次，無氮飼糧提供一定采食量并含有纖維素，纖維素具有很強(qiáng)的持水能力，強(qiáng)飼后試驗(yàn)動物飲水就會增加，這可以加快飼糧通過腸道，從而降低養(yǎng)分的消化、吸收;另一方面纖維素能包裹住氨基酸及肽，進(jìn)而阻止了氨基酸的重吸收［17］。纖維素還有一定的摩擦作用，增加腸壁細(xì)胞的脫落和消化酶的分泌，從而使試驗(yàn)動物的內(nèi)源性氨基酸排泄量增加。另外，纖維素和無氮飼糧提供的碳水化合物能一起促進(jìn)細(xì)菌氨基酸的合成［18］。因此，試驗(yàn)動物采食無氮飼糧后，內(nèi)源性氨基酸排泄量加大。

在本試驗(yàn)中，無論去盲腸與否，饑餓法得到的所有內(nèi)源性氨基酸排泄量都小于無氮飼糧法。本試驗(yàn)結(jié)果表明，對于鵝來說，饑餓法比較好，這是由于以下3點(diǎn)原因:1)本試驗(yàn)中無氮飼糧法測定的內(nèi)源性氨基酸排泄量測值標(biāo)準(zhǔn)差較大，這說明使用無氮飼糧法時(shí)，試驗(yàn)鵝個體間內(nèi)源性氨基酸排泄量測值變異較大。2)無氮飼糧法測得的內(nèi)源性氨基酸的排泄量受飼糧中纖維類型、纖維結(jié)構(gòu)、纖維水平等諸多因素的影響。3)無氮飼糧配方使用的原料因?yàn)楹繕O低，被認(rèn)為“無氮”，并非絕對不含氮，檢測無氮飼糧會發(fā)現(xiàn)其中有不到0.01%的粗蛋白質(zhì)，但這些微量蛋白質(zhì)很可能并未被機(jī)體吸收而全部進(jìn)入排泄物中成為測定的內(nèi)源性氨基酸的組成。所以，采食無氮飼糧后，機(jī)體內(nèi)源性氨基酸損失加大，測定結(jié)果較高。

本試驗(yàn)結(jié)果與史永軍［19］試驗(yàn)結(jié)果不完全相同，除了試驗(yàn)鵝年齡、環(huán)境等因素外，最重要的一點(diǎn)在于無氮飼糧配方中，史永軍［19］使用的纖維源為纖維素粉，本試驗(yàn)使用了羧甲基纖維素鈉，纖維的結(jié)構(gòu)不完全相同，所以導(dǎo)致了試驗(yàn)結(jié)果的差異。

3.2 鵝盲腸的作用及盲腸切除對內(nèi)源性氨基酸排泄量的影響

禽盲腸在物質(zhì)代謝中有一定的作用。每克禽類盲腸食糜中大約有1011個專性厭氧菌［20］，這些微生物能夠?qū)M(jìn)入盲腸或大腸中的氨基酸或非蛋白氮等含氮類物質(zhì)進(jìn)行分解和合成作用［21］，改變食糜中氨基酸的組成［22］。進(jìn)入后段腸道中的食糜有相當(dāng)數(shù)量的未被消化的氨基酸被盲腸中的微生物利用［23］，影響了氨基酸消化率測定值［6，24］。這也是在本試驗(yàn)中有部分氨基酸在正常組和去盲腸組間表現(xiàn)出了顯著性差異的原因之一。

4 結(jié)論

① 采用饑餓法時(shí)，除絲氨酸、精氨酸、胱氨酸、脯氨酸外，其他內(nèi)源性氨基酸排泄量去盲腸組低于正常組;采用無氮飼糧法時(shí)，除天冬氨酸、組氨酸、精氨酸、脯氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、蛋氨酸和異亮氨酸外，正常組內(nèi)源性氨基酸排泄量高于去盲腸組。

②采用饑餓法和無氮飼糧法測定鵝內(nèi)源性氨基酸排泄量時(shí)，除了組氨酸與胱氨酸，其余氨基酸的內(nèi)源性排泄量在2種方法間差異極顯著，饑餓法測定的多數(shù)內(nèi)源性氨基酸排泄量低于無氮飼糧法。

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