溶血標(biāo)本對生化檢驗(yàn)指標(biāo)的影響研究

李 植

云南省耿馬縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，云南耿馬677500

1 溶血及血紅細(xì)胞

溶血是指血液中的紅細(xì)胞破裂，紅細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)混入血漿的現(xiàn)象。由于血紅細(xì)胞含紅色的血紅蛋白，而血清的主要成分為抗體蛋白，白蛋白，膽紅素等，正常情況下呈淡黃色，發(fā)生溶血時(shí)，血清會(huì)被污染，在表觀上看便是樣品變紅色。

血液中成分復(fù)雜，一般不能直接生化檢測，而是檢測血清。血液樣品通過離心，分離血液中的紅細(xì)胞等，得到血清，多為淡黃色的澄清溶液。而溶血樣品離心后，由于紅色的血紅蛋白外逸，血清帶紅色。

紅細(xì)胞無細(xì)胞核，細(xì)胞膜成分為磷脂，脆性強(qiáng)，容易破碎，無細(xì)胞器，通過糖酵解途徑合成能量。細(xì)胞內(nèi)主要成分是血紅蛋白，含少量多糖，糖酵解中間物，氨基酸，脂肪，維生素和多種酶。多種因素能引起紅細(xì)胞破碎，產(chǎn)生溶血，例如：低滲溶液，機(jī)械強(qiáng)力震蕩、突然低溫冷凍、突然解凍、過酸過堿、有機(jī)溶劑等。

2 溶血標(biāo)本對生化檢驗(yàn)指標(biāo)的影響

大量實(shí)驗(yàn)證明溶血標(biāo)本與非溶血標(biāo)本在多個(gè)生化檢驗(yàn)指標(biāo)上有顯著性差別。包括AST（天門冬氨基酸轉(zhuǎn)移酶）、TP（總蛋白）、GLU（血糖） 、TBIL（總膽紅素）、 ALB（白蛋白）等，溶血前后，這些物質(zhì)的含量變化明顯。而BUN尿素氮、Ca（鈣）、Cr（肌酐）等含量則無明顯變化。見表1。其他一些指標(biāo)如ALT（丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）等則不確定，有些實(shí)驗(yàn)這些指標(biāo)呈顯著性差異，如何曉麗等人的實(shí)驗(yàn)[1]。有些實(shí)驗(yàn)中，這些指標(biāo)無明顯差異。如河南省長葛市人民醫(yī)院的謝寧芳等人的實(shí)驗(yàn)[2]。

樣本溶血影響生化檢驗(yàn)結(jié)果的主要原因有以下幾點(diǎn)：①細(xì)胞(主要是紅細(xì)胞)內(nèi)外液的濃度差。正常的血清樣品，經(jīng)離心處理后，紅細(xì)胞沉淀分離，血清成分不受紅細(xì)胞影響。溶血樣品則由于紅細(xì)胞成分溶入血清中，使血清中成分發(fā)生變化。有學(xué)者研究，人紅細(xì)胞中所含的AST是血清中的38倍，LDH （乳酸脫氫酶）紅細(xì)胞內(nèi)外相差180倍。紅細(xì)胞中TP（總蛋白）濃度也比血清中高，這是溶血樣品中這3種物質(zhì)含量變高的原因。另外，溶血也會(huì)稀釋的血清中特有成分的，造成其含量降低。②樣本發(fā)生溶血時(shí)，細(xì)胞內(nèi)外液之間的一些物質(zhì)發(fā)生各種反應(yīng),導(dǎo)致檢測結(jié)果改變。溶血標(biāo)本GLU的含量測定降低，可能是糖酵解的中間物滲入血清中，繼續(xù)反應(yīng)，GLU被代謝分解，造成GLU含量降低。③紅細(xì)胞中的物質(zhì)造成儀器檢測時(shí)，吸光度的干擾。例如血紅蛋白中血紅素在短波長段（300～500 mm）的吸光度較高，會(huì)對血清中用相似吸光波長物質(zhì)的檢測產(chǎn)生影響。事實(shí)上各個(gè)試驗(yàn)項(xiàng)目均受到這些因素的干擾和影響，只是影響的側(cè)重點(diǎn)不同而已[3]。

3 溶血樣品生化指標(biāo)的變化對臨床疾病診斷上的幾個(gè)影響

血液成分的檢測，是診斷多種疾病的必要步驟，如肝臟疾病，腎臟疾病，癌癥，艾滋病，糖尿病、貧血、白血病等。溶血樣品導(dǎo)致血清成分發(fā)生變化，會(huì)對多種疾病的診斷產(chǎn)生影響。

表1 溶血前后一些生化檢測指標(biāo)的變化

3.1 對乙肝檢測的影響

目前醫(yī)院檢測乙肝主要有免疫學(xué)方法和大型生化儀器檢測兩種。溶血對兩種檢測方法均會(huì)產(chǎn)生影響。

免疫學(xué)方法主要檢測乙肝五項(xiàng)，即乙肝表面抗原（HBASg）、乙肝表面抗體（抗-HBS）、 e抗原（ HBeAg）、e抗體（抗-HBe）、核心抗體（抗-HBc）。臨床檢測中用ELISA法檢測5項(xiàng)指標(biāo)，其中所用的結(jié)合酶為辣根過氧化物酶，而紅細(xì)胞中有些蛋白具有類氧化物酶活性，其作用與辣根過氧化物酶相似，當(dāng)樣本溶化時(shí)，釋放到血清中，顯色反應(yīng)時(shí)，使OD值升高，造成結(jié)果假陽性。最后造成對疾病的誤判。

生化儀器檢測法中，ALT（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）是檢驗(yàn)肝臟功能，了解肝細(xì)胞破壞程度、肝細(xì)胞通透性變化或膽道系統(tǒng)阻塞等較靈敏的指標(biāo)。一般情況下，乙肝感染2～6個(gè)月后，血清轉(zhuǎn)氨酶會(huì)明顯上升。溶血樣品會(huì)對ALT的含量的檢測造成影響，也會(huì)影響疾病的診斷結(jié)果。

3.2 對腎功能檢測的影響

BUN（尿素氮）是血漿蛋白質(zhì)以外的含氮化合物之一，是體內(nèi)氨基酸分解代謝的最終產(chǎn)物。測定尿素氮可作為腎功能的一個(gè)指標(biāo)，尤其可反應(yīng)腎小球?yàn)V過功能。Cr（肌酐）是肌酸代謝的終產(chǎn)物，肌酸主要存在于肌肉中。測量肌酐主要用于評價(jià)腎功能。表一中，這兩個(gè)指標(biāo)的生化檢測在溶血前后均無明顯變化，可見溶血標(biāo)本對腎功能檢測的影響不大[4]。

3.3 對糖尿病等疾病的檢測結(jié)果的影響

GLU（血糖）的高低是糖尿病檢測中的重要指標(biāo)，臨床上測定血糖主要是了解病人體內(nèi)神經(jīng)激素的調(diào)節(jié)是否相對平衡。溶血樣品的血糖濃度比正常樣品的低，這對疾病的檢測會(huì)產(chǎn)生影響。

3.4 對貧血等血液疾病檢測結(jié)果的影響

血常規(guī)標(biāo)本溶血可影響紅細(xì)胞、血小板的計(jì)數(shù)，白細(xì)胞的分類等。溶血樣品中由于血細(xì)胞的破碎，數(shù)量減少，紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)減少。而且細(xì)胞破碎后的溶出物會(huì)影響血小板和白細(xì)胞的數(shù)量。最終會(huì)導(dǎo)致貧血等血液疾病的誤判。

4 防止樣品溶血的措施以及處理溶血樣品的對策

引起樣本溶血的常見原因有：（1）采血技術(shù)欠佳；（2）試管不潔；（3）強(qiáng)力振蕩血液或剝離血凝塊；（4）冷凍時(shí)間過短；（5）解凍時(shí)間過短；（6）抗凝劑不當(dāng)；（7）抽血后未卸下針頭就將血液強(qiáng)行通過微孔注入試管中等。因此，在采血、檢驗(yàn)過程中必須注意：①對注射器和試管要嚴(yán)格要求,保持注射器、針頭、盛血試管(器皿)干燥清潔。注射器針頭不能用酒精消毒，因?yàn)榫凭芍氯苎?。②采集血樣本的方法要正確,采血時(shí)止血帶不可縛扎過緊、時(shí)間過長。采血部位皮膚必須干燥清潔，抽血時(shí)不可使局部組織損傷過多，否則易發(fā)生溶血現(xiàn)象。抽血時(shí)不可過快，以免空針內(nèi)血泡甚多血細(xì)胞破裂，抽得血樣后，去掉針頭將血液沿管壁徐徐推入管內(nèi)，不宜過快,以免血泡過多引起血細(xì)胞破裂[5]。

若由于特殊原因無法重新采集新標(biāo)本，應(yīng)利用未溶血標(biāo)本對比做空白對照實(shí)驗(yàn)，在無空白對照樣品的情況下，應(yīng)參考已有的研究成果，利用已有的數(shù)據(jù)，扣除本底值，獲得盡量準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)。或放棄某些指標(biāo)的測量。另一方面是從方法學(xué)上克服或減少溶血的干擾，如Hb對吸光度的干擾，可改用雙波長比色，導(dǎo)數(shù)分光光度法和動(dòng)力學(xué)法等措施；屬于參與某一分析法化學(xué)反應(yīng)的溶血干擾，只能是改變所用試劑類型。

綜上所述，溶血會(huì)引起一些生化項(xiàng)目結(jié)果假性升高或降低。隨著全自動(dòng)生化分析儀的普及，檢查血清標(biāo)本是否溶血，已成為試驗(yàn)過程中質(zhì)控的重要環(huán)節(jié)。樣品檢驗(yàn)時(shí)，考慮溶血對生化檢測的影響，可以讓檢測人員減少失誤，提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。在臨床工作中，應(yīng)避免操作不當(dāng)，引起樣品溶血?？s短樣品采集到樣品檢測之間的時(shí)間，以最少的步驟準(zhǔn)備檢測樣品。一旦發(fā)現(xiàn)明顯的標(biāo)本溶血，應(yīng)立即采取相應(yīng)的措施，如對溶血程度較輕的標(biāo)本結(jié)果進(jìn)行校正或重新采集標(biāo)本?？傊?，檢查血清標(biāo)本外觀有否溶血是試驗(yàn)過程中質(zhì)控的必要步驟。

[1] 何曉麗.淺談標(biāo)本溶血對臨床常規(guī)生化檢驗(yàn)結(jié)果的影響及對策[J].醫(yī)學(xué)新知·綜合版,2012(3)：64.

[2] 謝寧芳.溶血標(biāo)本對生化檢驗(yàn)指標(biāo)結(jié)果影響分析[J].臨床合理用藥,2012(3)：103.

[3] 詹燕華,周世鋒.標(biāo)本溶血對生化分析儀測定結(jié)果的影響[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2011(18)：69-70.

[4] 王莉.血標(biāo)本放置時(shí)間對血液生化指標(biāo)的影響[J].中國中醫(yī)藥咨訊,2011(7)：56.