腸致病性大腸埃希菌病原學(xué)檢驗(yàn)探析

張 敏

（四川省資陽市雁江區(qū)疾病預(yù)防控制中心 四川 資陽 641300）

大腸桿菌，即Escherichiacoli，屬于埃希菌屬，為腸桿菌科［1］，是人體以及動(dòng)物體的腸道中存在的正常菌群，若大腸桿菌與患者發(fā)生疾病有關(guān)，則統(tǒng)稱為致瀉性大腸桿菌，簡(jiǎn)稱致病性大腸埃希菌，包括粘附性大腸桿菌、腸侵襲性大腸埃希菌、腸毒素性大腸埃希菌、腸出血性大腸埃希菌、腸致病性大腸埃希菌等五類。腸致病性大腸埃希菌，即Enteropathogenic Escherichia Coli，簡(jiǎn)稱EPEC［2］，研究表明，腸致病性大腸埃希菌致病性與菌體本身的侵襲力具有重要關(guān)聯(lián)，是嬰幼兒發(fā)生腹瀉的重要因素之一［3］。本文將對(duì)我區(qū)某某婦幼保健院自2012年1月1日至2012年12月31日前來就診的231例腹瀉患兒進(jìn)行腸致病性大腸埃希菌病原學(xué)檢驗(yàn)，從而探討腸致病性大腸埃希菌的病原學(xué)特點(diǎn)，現(xiàn)結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：本文將對(duì)我區(qū)某某婦幼保健院自2012年1月1日至2012年12月31日前來就診的231例腹瀉患兒進(jìn)行腸致病性大腸埃希菌病原學(xué)檢驗(yàn)，其中男性患兒為117例、女性患兒為114例，年齡在3個(gè)月至2歲之間，平均年齡在0.9±0.4歲。

1.2 方法：對(duì)所有腹瀉患者進(jìn)行糞便采集樣本，之后應(yīng)用病原學(xué)檢驗(yàn)方法對(duì)樣本中腸致病性大腸埃希菌進(jìn)行分離，給予病原學(xué)檢查，包括形態(tài)特征分析、培養(yǎng)特征分析以及生化反應(yīng)特征分析等，得出結(jié)論。

1.2.1 試驗(yàn)試劑及器械：營養(yǎng)肉湯、乳糖膽鹽發(fā)酵管、三糖鐵瓊脂、腸道增菌肉湯、伊紅美藍(lán)瓊脂、普通瓊脂、快速革蘭氏染色液、微量生化管、腸道致病性大腸埃希菌診斷所需血清、光學(xué)顯微鏡、隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱。

1.2.2 病原學(xué)檢驗(yàn)方法：將患者糞便樣本應(yīng)用無菌棉蘸取后接種至瓊脂平板培養(yǎng)基中，放置于三十五攝氏度恒溫培養(yǎng)十八至二十四小時(shí)，之后將疑似大腸埃希菌分解乳糖以及不分解乳糖的紅色菌落挑起，將其接種于半固體培養(yǎng)基中進(jìn)行十八至二十四小時(shí)培養(yǎng)，觀察其動(dòng)力情況，并使用腸道致病性大腸埃希菌診斷血清進(jìn)行玻片凝集試驗(yàn)，對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行確診。之后進(jìn)行形態(tài)與培養(yǎng)特性研究，觀察其生長(zhǎng)狀態(tài)，并進(jìn)行革蘭氏染色以及芽孢染色措施。

2 結(jié)果

231例腹瀉患兒糞便樣本中均檢測(cè)出腸道致病性大腸埃希菌，檢出率為100.00%。腸道致病性大腸埃希菌形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生化特征分析結(jié)果如下：

2.1 形態(tài)與培養(yǎng)特性分析：（1）腸道致病性大腸埃希菌在三十七攝氏度恒溫狀態(tài)下進(jìn)行二十四小時(shí)培養(yǎng)后，菌落呈現(xiàn)出灰色，可略帶白色，菌落具有整齊的邊緣以及光澤表面；（2）對(duì)腸道致病性大腸埃希菌菌落進(jìn)行斜面培養(yǎng)二十四小時(shí)后，菌落長(zhǎng)滿整個(gè)斜面；（3）將腸道致病性大腸埃希菌接種于伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基中，在三十七攝氏度恒溫條件下進(jìn)行二十四小時(shí)培養(yǎng)后，菌落出現(xiàn)黑色中心，且呈現(xiàn)出明顯的金屬光澤；（4）將腸道致病性大腸埃希菌接種于三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)后觀察可知，試管底部以及中部出現(xiàn)氣泡，變黃，但無硫化氫物質(zhì)產(chǎn)生；（5）對(duì)腸致病性大腸埃希菌進(jìn)行革蘭氏染色可知，其結(jié)果為陰性，無芽孢出現(xiàn)，但出現(xiàn)鞭毛，屬于短小桿菌，兩端呈現(xiàn)出圓頓形。

2.2 生化特征分析：對(duì)腸道致病性大腸埃希菌進(jìn)行生化反應(yīng)，其具體結(jié)果見表1。

表1 腸道致病性大腸埃希菌生化反應(yīng)結(jié)果分析

3 討論

大腸埃希菌，即大腸桿菌，是人體中常見菌群，在正常情況下，大腸埃希菌不但對(duì)人體無害反而有益，但特殊的大腸埃希菌能夠引起患者腹瀉等疾病，威脅人類身體健康。臨床研究表明，引起腹瀉的大腸埃希菌主要有五種：（1）粘附性大腸桿菌，即EAEC；（2）腸侵襲性大腸埃希菌，即EIEC，可對(duì)人體中結(jié)腸粘膜上皮進(jìn)行侵入，從而使患者發(fā)生志賀樣腹瀉，出現(xiàn)粘液膿血便；（3）腸毒素性大腸埃希菌，即ETEC，能夠使患者發(fā)生霍亂樣腸毒素腹瀉情況，出現(xiàn)水瀉；（4）腸出血性大腸埃希菌，即EHEC，臨床又可將其稱為產(chǎn)志賀毒素大腸埃希菌，可使患者發(fā)生出血性大腸炎以及溶血性尿毒綜合癥等嚴(yán)重疾??；（5）腸致病性大腸埃希菌，即EPEC，是臨床上導(dǎo)致嬰幼兒腹瀉的主要原因。

腸道致病性大腸埃希菌引起的嬰幼兒腹瀉疾病，若患兒未得到及時(shí)的確診及治療，易使病情加重，甚至導(dǎo)致患兒死亡，對(duì)患兒的生活質(zhì)量與生命安全均造成一定威脅［4］。由于腸道致病性大腸埃希菌的表型以及生化特征與人體中正常的大腸埃希菌相差不大，臨床常用血清作為檢出腸致病性大腸埃希菌的有效方法，因此研究腸致病性大腸埃希菌的病原學(xué)特點(diǎn)對(duì)臨床診斷此類患者具有重要意義，能夠有效提高腸道致病性大腸埃希菌引發(fā)腹瀉等疾病的確診率，使患者及時(shí)得到具有針對(duì)性的治療措施，提高患者治療效果。

［1］儲(chǔ)從家.31株腸致病性大腸埃希菌血清型分布和藥敏實(shí)驗(yàn)［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2011，20（1）：17－18

［2］李向陽，楊錦紅，陶紅群，等.腸致病性大腸埃希菌的直接基因鑒定［J］.中國公共衛(wèi)生，2009，18（7）：788－789

［3］畢振強(qiáng)，永山憲市，本田武司.致病性大腸桿茁致病因子的研究［J］.中國公井衛(wèi)生學(xué)報(bào)，2008，17（4）：209－211

［4］陳重坡致病性大腸埃希氏菌（EPEC）的檢測(cè)與注意點(diǎn)［J］.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010，10（2）：235－234