可舒膠囊對(duì)酒精性肝損傷大鼠血清中NF-κB和TNF-α的影響

曾 明，王金萍，丁媛媛，王占慶，邸曉輝

(本文編輯:張仲書; 英文編輯:王建東)

可舒膠囊是以李東垣《脾胃論》中的葛花解酲湯為基礎(chǔ)方，由我院研制的中藥復(fù)方制劑，具有解酒、降脂、保肝等作用，臨床應(yīng)用效果確定。前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，可舒膠囊可通過(guò)抗脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)防治酒精性肝損傷［1-2］，但其作用機(jī)制尚不明確。核轉(zhuǎn)錄因子 NF-κB(nuclear transcription factor-Kappa B，NF-κB)是一種核細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄中重要的調(diào)控因子，是應(yīng)激與炎性反應(yīng)的中樞調(diào)節(jié)物［3-4］。由于NF-κB是調(diào)控多種細(xì)胞因子基因表達(dá)的樞紐，它在酒精性肝損傷中的作用備受關(guān)注［5］。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)是一個(gè)重要的促炎因子和免疫調(diào)節(jié)因子，肝臟是TNF-α的重要靶器官。TNF-α主要由肝臟激活的枯否細(xì)胞產(chǎn)生，并作為一個(gè)關(guān)鍵因子參與酒精性肝損傷的發(fā)生與發(fā)展［6-7］。本研究擬觀察可舒膠囊對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷血清中NF-κB和TNF-α水平的影響，探討酒精性肝損傷防治機(jī)制，為可舒膠囊臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)資料和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 健康雄性Wistar大鼠50只，體重150～200 g，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物繁殖場(chǎng)提供(合格證號(hào)：SCXK11-00-0006)。高脂飼料：標(biāo)準(zhǔn)飼料加1%膽固醇、10%玉米油、5%豬油制成，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物繁殖場(chǎng)提供。白酒紅星牌56°，北京紅星二鍋頭股份有限公司生產(chǎn)?？墒婺z囊：北京軍區(qū)臨床藥物研究所自制，0.5 g/粒，批號(hào)080822，使用時(shí)用0.5% 羧甲基纖維素(CMC-Na)配制。另附TNF-α試劑盒和NF-κB試劑盒(南京建成生物工程研究所)、日立7150型全自動(dòng)生化分析儀(日本)、MK型酶標(biāo)儀(芬蘭)等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組與給藥 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將50只大鼠隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組、模型組、并將可舒膠囊干預(yù)組根據(jù)臨床劑量按體表面積換算，按生藥計(jì)量，分低劑量組(3.06 g/kg)、中劑量組(6.12 g/kg)、高劑量組(12.24 g/kg)，每組10只。模型組和可舒膠囊干預(yù)組：每日上午灌飲56°白酒，每天24 g/kg，下午分別灌胃0.5%CMC-Na及不同劑量的可舒膠囊，喂高脂飼料；正常對(duì)照組：每日上午灌胃生理鹽水，下午灌胃0.5%CMC-Na，給予正常飼料。給藥量均為1 ml/100 g，連續(xù)14 d。

1.2.2 標(biāo)本采集 各組大鼠在最后一次給藥后禁食12 h，25%烏拉坦腹腔注射麻醉，無(wú)菌消毒下分離頸主動(dòng)脈插管取血，離心半徑8 cm，3000 r/min離心10 min，分離血清，-20℃保存，以備測(cè)定之用。

1.2.3 酶學(xué)測(cè)定 取大鼠血清，全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天門冬氨酸轉(zhuǎn)移酶(AST)。

1.2.4 血清TNF-α和血清NF-κB的測(cè)定 嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 11.5軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，滿足“方差齊”要求的數(shù)據(jù)資料用單因素方差分析，組間比較采用LSD法，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況觀察 正常對(duì)照組大鼠，食欲佳，被毛光滑，精神狀態(tài)好，體重增加。模型組大鼠精神萎靡，活動(dòng)減少，食欲減退，皮毛無(wú)光澤，體重較前有所下降。可舒膠囊各干預(yù)組大鼠精神、食欲及活動(dòng)狀態(tài)介于正常對(duì)照組與模型組之間。

2.2 血清ALT、AST值的比較 模型組與對(duì)照組比較血清ALT和AST值均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05)；可舒膠囊干預(yù)組與模型組比較血清ALT和AST值均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05，表1)。

表1 各組大鼠血清ALT、AST值的比較()

表1 各組大鼠血清ALT、AST值的比較()

注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

2.3 血清TNF-α和NF-κB含量的測(cè)定 與對(duì)照組相比，急性酒精性肝損傷大鼠血清中的 NF-κB和TNF-α水平均明顯升高(P＜0.01)。與模型組比較，可舒膠囊干預(yù)組，血清NF-κB和TNF-α含量明顯降低(P＜0.01，表2)。

表2 各組大鼠血清NF-κB與TNF-α水平比較()

表2 各組大鼠血清NF-κB與TNF-α水平比較()

注：與模型組比較，*P＜0.01；與正常對(duì)照組比較，#P＜0.01

3 討論

酒精性肝病在我國(guó)的發(fā)病率逐年上升，嚴(yán)重危害人們的健康。血清轉(zhuǎn)氨酶水平是臨床反映肝細(xì)胞損傷的敏感指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M的ALT和AST較正常對(duì)照組明顯升高，說(shuō)明酒精和高脂飼料疊加所誘導(dǎo)的酒精性肝損傷造模成功。

酒精性肝損傷的致病因素為長(zhǎng)期大量的酒精攝入。但其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。研究證實(shí)，長(zhǎng)期酒精攝入可以使肝組織中NF-κB活化，活化后的NF-κB進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與多種炎癥因子啟動(dòng)子區(qū)域中κB 序列結(jié)合，促進(jìn)炎癥細(xì)胞因子(TNF-α、L-1、IL-2、IL-6等)、黏附分子以及NO合酶等的轉(zhuǎn)錄，引起肝細(xì)胞的進(jìn)一步炎癥、壞死、凋亡和纖維化形成［8-10］。此外，酒精在肝臟中代謝產(chǎn)生了大量自由基，當(dāng)超出了機(jī)體的清除能力，則可抑制脂肪酸氧化，使肝內(nèi)脂肪蓄積，又可導(dǎo)致肝細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化，造成肝細(xì)胞損傷。同時(shí)，這些活性氧會(huì)使內(nèi)毒素水平升高，炎癥介質(zhì)釋放，這些物質(zhì)又都可以使NF-κB活化，進(jìn)而產(chǎn)生大量炎性介質(zhì)，發(fā)揮炎性級(jí)聯(lián)放大作用，加重肝臟損害［11］。

TNF-α是最關(guān)鍵的促炎介質(zhì)，對(duì)NF-κB的活化起正反饋調(diào)節(jié)作用，它既是NF-κB的激活物，也是其激活后的產(chǎn)物。TNF-α一方面具有直接的細(xì)胞毒作用，引起肝細(xì)胞壞死，另一方面又可引起微循環(huán)障礙導(dǎo)致肝細(xì)胞壞死，同時(shí)，還與其他炎性因子如IL-6相互激發(fā)，引起級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)，進(jìn)一步加重肝損傷。

中醫(yī)藥治療酒精性肝損傷可以從多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)調(diào)節(jié)機(jī)體生理平衡，且不良反應(yīng)相對(duì)較小，近年來(lái)已逐漸得到認(rèn)可［12］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)可舒膠囊干預(yù)可抑制肝損傷造成的轉(zhuǎn)氨酶升高?？墒婺z囊臨床用于治療酒精性肝損傷療效明確。與對(duì)照組相比，急性酒精性肝損傷大鼠血清NF-κB和TNF-α含量明顯升高，引起炎性損傷。與模型組相比，應(yīng)用可舒膠囊后，各劑量組血清中NF-κB和 TNF-α水平含量明顯降低，且呈一定的劑量反應(yīng)關(guān)系。通過(guò)抑制NF-κB的激活，減少炎癥因子的釋放，發(fā)揮抗炎及抗凋亡作用，從而有效防治酒精誘導(dǎo)的肝臟損傷，改善肝功能指標(biāo)可能是可舒膠囊防治酒精性肝病的作用機(jī)制之一。

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