苦參方劑對池塘輪蟲、劍水蚤、庫蚊幼蟲和藍彩鳉魚的急性毒性試驗

田海軍 彭新亮

(信陽農(nóng)林學院水產(chǎn)科學系，河南信陽 464000)

中草藥是中國醫(yī)藥的瑰寶。它具有毒副作用小、價格低廉、不易產(chǎn)生抗藥性優(yōu)點，且其中的某些藥物成分不僅有抗菌作用，還具免疫作用，能改善機體的免疫狀態(tài)，提高機體自身的抗菌防病能力，所以進一步開展中草藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖上的應(yīng)用研究成為必然趨勢［4－5］。苦參方劑由苦參、苦楝、百部、貫眾、青蒿、黃柏、茯苓幾味藥組成，是信陽農(nóng)業(yè)高等?？茖W校水產(chǎn)系水產(chǎn)病害實驗室研究開發(fā)出來的防治魚類車輪蟲、指環(huán)蟲病等寄生蟲病的新型環(huán)境友好型漁藥，是復方中草藥漁業(yè)殺蟲劑，其劑型為水乳劑和水分散粒劑。

本研究初步評價了苦參方劑對藍彩鳉魚、庫蚊幼蟲、劍水蚤和輪蟲(臂尾種)的毒性。

1 材料與方法

1.1 測試生物

輪蟲在實驗室經(jīng)過純培養(yǎng)獲得(Lubzens，1987年)。劍水蚤在敞開的400 L的金屬容器中通過添加家禽的糞便對其進行產(chǎn)能性刺激而獲得(Wade和Stirling，1999)。庫蚊幼蟲在敞開的金屬容器中通過收集庫蚊的卵，然后讓其在體積為1 L的透明玻璃容器中孵化獲得，待其生長到第2齡期后做生物測驗。藍彩鳉魚用20 L的球狀塑料容器從廢棄的池塘收集裝載到實驗室，在19℃用脫氯的自來水馴養(yǎng)兩周(溶解氧為8.20 mg/L，pH 值為6.7)，馴養(yǎng)期間每天用蚊子幼蟲喂食，生物活性測試的8 h和18h之前進行暴露處理。

1.2 生物測定

以苦參方劑在可再生的靜態(tài)系統(tǒng)進行48h生物活性急性毒性試驗(OECD，1981)。貯存液分別被稀釋配制成以下系列濃度:10.0，5.0，2.5，1.25，0.625，0.312和0.156 mg/L，而對蚊子幼蟲生物活性測定配制成以下濃度:40.0，20.0，10.0，5.0，2.5，1.25和0.625 mg/L。

對輪蟲的生物活性測定在25 mL 玻璃標本瓶中進行。從純培養(yǎng)中取含有1 mL 輪蟲的水進行接種，每個處理濃度設(shè)3次重復。為了測定每個重復的死亡率，對處理液充分攪拌后，用3個1 mL胰島素注射器等分收集，然后倒入1 mL的計數(shù)腔中，把計數(shù)腔安裝在一個低功耗顯微鏡下觀察，計數(shù)器計數(shù)和記錄死亡率。分析每處理每重復濃度的平均死亡率之間的顯著性差異。當輪蟲纖毛運動停止認為已經(jīng)死亡。

劍水蚤生物活性測定在100 mL的玻璃杯中進行。每個處理均設(shè)置重復濃度，而且用1 mL 注射器接種10只劍水蚤。設(shè)定呼吸心跳停止為死亡，通過立體顯微鏡觀察劍水蚤的死亡情況。記錄每個重復處理濃度的平均死亡率，對其進行顯著性差異分析。

對庫蚊幼蟲的生物活性測定在100 mL 容量的玻璃杯中進行，與劍水蚤的操作相同，幼蟲停止跳動即認為其為死亡。

藍彩鳉魚的生物活性測試在10 L 玻璃魚缸中進行。每個魚缸內(nèi)魚的平均長度為(4.5 土1.2)cm，平均體重為(2.7 士0.5)g。每個處理濃度設(shè)重復。當藍彩鳉魚運動停止或尾巴擺動停止和不再對機械刺激起反應(yīng)時認為其死亡(觸摸)。觀察到有死魚時即將其移出玻璃缸。對各處理各重復死亡率的方差進行顯著性差異分析。

水質(zhì)參數(shù)由生物測定試驗的初末決定(見表1)。水的溶解氧、總堿度和總硬度由APHA 法確定(1985年)。pH 值由菲利普斯PW9418 型pH計測定。使用水銀溫度計測定水溫。48h的LC50回歸分析和相關(guān)系數(shù)使用Microsoft Excel Office 2003 進行分析。

2 結(jié)果

由所有測試生物的概率曲線確定山毛豆水提物對測試生物體的48h的LC50值。死亡率的概率值與Sprague(1970，1971)描述生物測試的濃度對數(shù)值相反。

輪蟲的線性回歸方程Y=18.29－3.84X，是由生物活性測定死亡率概率回歸分析得出的。48h的LC50為2.89 mg/L，相關(guān)系數(shù)為－0.833(P=0.0199)。卡方檢驗表明，觀察值和預測值沒有顯著性差異(P＞0.05)。各個處理重復之間也無顯著性差異，方差遠小于F0.05。

對庫蚊幼蟲活性的死亡率線性回歸方程為Y=3.58 +2.35X。由方程得出48h的LC50為4.48 mg/L。相關(guān)系數(shù)為0.844(P=0.016 9)?？ǚ綑z驗表明，觀察和預測的概率值間(P＞0.05)無顯著性差異。與方差變異率一樣，方差分析表明各處理重復濃度間也無顯著性差異，且值遠遠小于F0.05。

苦參方劑對藍彩鳉魚的死亡率模型，其線性回歸方程為Y=1.45 +1.50X。觀察和預測值的相關(guān)系數(shù)為0.724(P=0.0659)。48h的LC50為9.232 mg/L?？ǚ綑z驗表明(P＞0.05)觀察和預測的概率值無顯著性差異，在各處理濃度重復間死亡率無顯著性差異，與方差率類似，均小于F0.05。

3 討論

池塘通常會有生物體，如昆蟲、兩棲類和爬行類，以及雜魚和肉食性魚類。本文中苦參方劑對魚急性毒性試驗48h的LC50為9.232mg/L，這表明它的毒性很低。庫蚊幼蟲對苦參方劑不敏感，48h半致死濃度為4.48 mg/L，該值相對較高。這可能是由于庫蚊幼蟲呼吸的是大氣(Ukoli，1984;Segun，1989)，這減少機體吸收水提物概率的緣故。該研究中苦參方劑對水生生物的毒性比其他已研究的漁用中草藥對水生生物的毒性低。Chen等(1996年)報道了皂甙對日本小對蝦48h的LC50為2.82 mg/L。Saha和Kaviraj(1996)報道了花金雞納樹皮中單寧酸對庫蚊96h的LC50為5.5 mg/L。Onusiriuka和Ufodike(1994)報道了Blighia Sapida和Kigelia africana 樹皮提取物對非洲鯰魚96h的LC50分別為8.32 mg/L和6.92 mg/L。Beal和Anderson (1993)報道了使用魚藤酮消除池塘水體中的所有浮游動物后，需要l～8個月的時間浮游動物群落才恢復到應(yīng)用魚藤酮前的水平。30 d 后劍水蚤出現(xiàn)，而45 d 后輪蟲也開始重新出現(xiàn)。Calow(1992)認為，實驗室的條件與自然條件是有誤差的，通過引入安全系數(shù)可以修補該誤差，從而估計LC50將達到10。

該研究表明，苦參方劑與其他水生生物相比對魚毒性很低。應(yīng)該推廣其在天然水體中的應(yīng)用。

表1 48h暴露期測定的平均水質(zhì)參數(shù)

略)