厄貝沙坦胃滯留滲透泵片的制備及其在犬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究

方 瑜，潘振華，曹德英（河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，石家莊 050017）

厄貝沙坦是目前唯一具有全程干預(yù)糖尿病腎病進(jìn)程證據(jù)的血管緊張素受體拮抗藥（ARB）[1]。對(duì)于給予厄貝沙坦干預(yù)早期糖尿病腎病的患者，長期堅(jiān)持治療是成功的關(guān)鍵。對(duì)于血壓正常的早期糖尿病腎病患者，患者口服厄貝沙坦普通片劑后，其在胃內(nèi)崩解，藥物較快地溶出并被吸收，體內(nèi)血藥濃度迅速達(dá)到峰值。由于厄貝沙坦的生理活性，部分患者可能出現(xiàn)一過性體位性低血壓。該不良反應(yīng)的發(fā)生，將嚴(yán)重降低患者的依從性，從而導(dǎo)致干預(yù)失敗。開發(fā)厄貝沙坦胃滯留滲透泵片，控制患者口服厄貝沙坦后的血藥濃度保持在平穩(wěn)的水平，避免血藥峰谷波動(dòng)現(xiàn)象[2]，減少不良反應(yīng)，從而提高患者依從性，可使厄貝沙坦干預(yù)早期糖尿病腎病患者獲得成功。筆者制備了厄貝沙坦胃滯留滲透泵片，并采用高效液相色譜（HPLC）-熒光檢測(cè)法測(cè)定了Beagle犬血漿中厄貝沙坦?jié)舛?，考察了厄貝沙坦胃滯留滲透泵片在Beagle犬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)并評(píng)價(jià)了緩釋作用。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1100液相系統(tǒng)，包括G1311A型四元輸液泵、G1321A熒光檢測(cè)器、G1313A型自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A型柱溫箱和G1379A型脫氣機(jī)（美國Agilent公司）；BY300A型小型包衣機(jī)（上海黃海藥檢儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

厄貝沙坦對(duì)照品（批號(hào)：100607-200301，純度：99.8%）、纈沙坦對(duì)照品（批號(hào)：100651-200902，純度：99.9%）均由中國食品藥品檢定研究院提供；厄貝沙坦原料藥（修正藥業(yè)集團(tuán)柳河制藥有限公司，批號(hào)：20101101，純度：99.6%）；厄貝沙坦胃滯留滲透泵片（河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院自制，批號(hào)：20110601，規(guī)格：每片150 mg）；厄貝沙坦片（杭州賽諾菲安萬特民生制藥有限公司，批號(hào)：1004043，規(guī)格：每片150 mg）；甲醇、乙腈為色譜純，磷酸、三乙胺、二氯甲烷均為分析純，其他輔料均為藥用級(jí)。

1.3 動(dòng)物

健康Beagle犬6只，體質(zhì)量（7.5±1.0）kg，♀♂各半，上海新岡實(shí)驗(yàn)動(dòng)物場(chǎng)提供，合格證號(hào)：SCXK（滬）2002-0014。

2 方法與結(jié)果

2.1 厄貝沙坦胃滯留滲透泵片的制備

2.1.1 輕質(zhì)多孔微球的制備：將聚丙烯酸樹脂RS溶于適量乙醇-二氯甲烷中，加入0.3%十二烷基硫酸鈉水溶液，50～100 r/min攪拌，至油珠粒徑為0.3～0.8 mm時(shí)，開始緩慢升溫，至40℃時(shí)固化4 h，過濾，裝柱，10倍柱體積熱水淋洗后，干燥即得。

2.1.2 片芯的制備：將輕質(zhì)多孔微球、聚氧乙烯（PEO）、羥丙甲纖維素（HPMC）、氯化鈉、聚維酮按處方量混合均勻，加入無水乙醇制軟材，過20目篩制粒，40℃干燥12 h，加入硬脂酸鎂混勻，壓制膨脹漂浮層片芯；將厄貝沙坦、PEO按處方量混合均勻，加入無水乙醇制軟材，過20目篩制粒，40℃干燥12 h，加入硬脂酸鎂混勻，在上述片芯兩側(cè)加壓含藥層，制成片芯。

2.1.3 包衣與打孔：用醋酸纖維素丙酮溶液包衣，在片劑的雙側(cè)表面各打一直徑0.8 mm的小孔，即得。

2.2 血漿中厄貝沙坦測(cè)定方法[3-4]

2.2.1 色譜條件：色譜柱為Inersil CN（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為pH 3.0磷酸鹽緩沖液-甲醇-乙腈（67∶20∶13，V/V/V），流速為1.0 ml/min；熒光激發(fā)波長為250 nm，發(fā)射波長為371 nm；進(jìn)樣量為20 μl。

2.2.2 血漿樣品的預(yù)處理：精密量取血漿0.3 ml，加內(nèi)標(biāo)纈沙坦溶液（50 μg/ml）10 μl、2 mol/L磷酸50 μl，混勻，加二氯甲烷5 ml，渦流混合10 min，10 000 r/min離心5 min，分取下層有機(jī)相于另一試管中，氮?dú)饬鞔蹈?，殘留物?.1 ml流動(dòng)相溶解，渦流混合，取20 μl進(jìn)樣。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 方法的專屬性：取犬空白血漿、空白血漿+厄貝沙坦+內(nèi)標(biāo)、血漿樣品（給藥后4 h）+內(nèi)標(biāo)，依法處理后，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果表明，厄貝沙坦和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間分別為12.49、14.19 min，峰形良好，無雜質(zhì)干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.空白血漿；B.空白血漿+厄貝沙坦+內(nèi)標(biāo)；C.血漿樣品+內(nèi)標(biāo)；1.厄貝沙坦；2.內(nèi)標(biāo)Fig1 HPLC chromatogramsA.blank plasma；B.blank plasma+irbesartan+internal standard；C.plasma sample+internal standard；1.irbesartan；2.internal standard

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：取空白血漿0.3 ml，加厄貝沙坦對(duì)照品溶液適量制備成質(zhì)量濃度分別為0.5、1.0、2.5、5、10、25、50 μg/ml的血漿樣品，照“2.2.2”項(xiàng)下方法處理，進(jìn)樣20 μl，記錄色譜圖。以樣品及內(nèi)標(biāo)的峰面積比值（A）為縱坐標(biāo)，厄貝沙坦質(zhì)量濃度（c）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。得回歸方程為c＝987.51A－27.36（r＝0.999 1），結(jié)果表明，厄貝沙坦檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍為0.5～50 μg/ml。

2.3.3 方法精密度及準(zhǔn)確度試驗(yàn)：取空白血漿0.3 ml，制備成低、中、高（1.0、5.0、30 μg/ml）3個(gè)質(zhì)量濃度的血漿樣品，每日測(cè)3次，連續(xù)測(cè)定3 d的血漿樣品濃度，根據(jù)結(jié)果計(jì)算本法的方法回收率與精密度。結(jié)果，方法回收率分別為96.3%、95.9%、102.4%，日內(nèi)RSD分別為4.97%、3.49%、3.06%，日間RSD分別為5.75%、8.82%、10.04%。

2.3.4 提取回收率試驗(yàn)：取空白血漿0.3 ml，制備成低、中、高（1.0、5.0、30 μg/ml）3 個(gè)質(zhì)量濃度的血漿樣品，依法處理。同時(shí)另取空白血漿0.3 ml，不加內(nèi)標(biāo)溶液，按“2.2.2”項(xiàng)下方法處理，向獲得的澄清液中加入相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液和內(nèi)標(biāo)溶液各10 μl，氮?dú)饬飨麓蹈?。殘留物均以流?dòng)相0.1 ml溶解，進(jìn)樣分析，獲得相應(yīng)峰面積，以每一濃度2種處理方法峰面積比值計(jì)算提取回收率。結(jié)果，厄貝沙坦的提取回收率分別為89.4%、95.4%、92.1%，內(nèi)標(biāo)的提取回收率為94.7%。

2.3.5 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)：取空白血漿0.3 ml，制備低、高（1.0、30 μg/ml）2個(gè)質(zhì)量濃度的血漿樣品，分別進(jìn)行2次循環(huán)凍融穩(wěn)定性、－20℃條件下凍存45 d穩(wěn)定性和室溫放置2 h穩(wěn)定性考察。結(jié)果，樣品2次循環(huán)凍融、－20℃條件下凍存45 d、室溫放置2 h均穩(wěn)定。

2.4 藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)

將犬6只隨機(jī)均分成2組，采用雙周期自身交叉試驗(yàn)，一組服用受試制劑厄貝沙坦胃滯留滲透泵片，另一組服用參比制劑厄貝沙坦片，劑量均為150 mg。2周后進(jìn)行交叉試驗(yàn)。于口服給藥前（0 h）和給藥后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24、36、48、72 h取前肢靜脈血3 ml，并立即移入肝素化離心管中，10 000 r/min離心10 min，分離血漿，于－20℃冰箱中保存，檢測(cè)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)厄貝沙坦的血藥濃度。用DAS統(tǒng)計(jì)軟件，采用梯形法計(jì)算AUC0-72h值，以半對(duì)數(shù)作圖法由消除相濃度點(diǎn)計(jì)算t1/2、tmax、cmax。2種制劑在犬體內(nèi)的藥-時(shí)曲線見圖2，藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表1。

圖2 2種制劑在犬體內(nèi)的藥-時(shí)曲線Fig2 Plasma concentration-time curves of 2 kinds of preparations in Beagle dogs

表1 2種制劑在犬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（±s，n＝6）Tab1 Pharmacokinetic parameters of 2 kinds of preparations in Beagle dog（±s，n＝6）

表1 2種制劑在犬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（±s，n＝6）Tab1 Pharmacokinetic parameters of 2 kinds of preparations in Beagle dog（±s，n＝6）

與參比制劑比較：＊P＜0.05vs.reference preparation：＊P＜0.05

受試制劑5.43±3.79＊1.87×104±0.45×104＊17.5±4.7 6.07×105±8.61×104 6.26×105±8.94×104參數(shù)tmax，h cmax，μg/L t1/2，h AUC0-72 h，μg·h/L AUC0-∞，μg·h/L參比制劑1.21±0.76 2.93×104±0.71×104 14.2±4.9 6.57×105±1.19×105 6.84×105±1.28×105

結(jié)果，以厄貝沙坦AUC0-72h計(jì)算，厄貝沙坦胃滯留滲透泵片中厄貝沙坦的相對(duì)生物利用度為（92.1±18.5）%。方差分析結(jié)果顯示，受試制劑與參比制劑生物利用度無顯著性差異（P＞0.05），受試制劑AUC0-72h的90%置信區(qū)間為參比制劑相應(yīng)參數(shù)的92.1%～119.4%。經(jīng)分析，受試制劑與參比制劑間的tmax、cmax均有顯著性差異（P＜0.05）：受試制劑cmax的 90%置信區(qū)間為參比制劑的57.0%～81.3%，顯著降低。上述結(jié)果表明，受試制劑較參比制劑tmax明顯延長，cmax顯著降低，生物利用度無顯著性差異，具有明顯的緩釋作用。

3 討論

現(xiàn)有的難溶性藥物滲透泵制劑設(shè)計(jì)方法主要為普通雙室滲透泵片，主要問題在于藥物以固體微粒狀態(tài)進(jìn)入腸道，而其進(jìn)一步的溶解與吸收是否能完全進(jìn)行，不能有效驗(yàn)證[5]。厄貝沙坦在水中不能溶解，如果開發(fā)普通雙室滲透泵控釋制劑，其口服后在腸道中可排出藥物固體微粒，藥物的溶解存在困難，因此難以達(dá)到預(yù)期的生物利用度。由于厄貝沙坦在胃液的偏酸性環(huán)境下具有一定溶解度，制備具有胃滯留功能的滲透泵片，在整個(gè)釋藥周期內(nèi)均能夠滯留于胃液中，因此藥物釋放后能夠快速溶解從而吸收，保證獲得理想的生物利用度。

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