改進(jìn)飽和鹽水漂浮法快速大量檢測兔球蟲

曾彥欽 陳 震 福建省福州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所 福州 350008

兔球蟲是危害家兔最廣、最嚴(yán)重的寄生蟲。筆者以改進(jìn)飽和鹽水漂浮法快速檢測418 只兔的球蟲卵囊數(shù)。輪換添加抗球蟲藥的試驗兔群仍檢出7 種球蟲，其中大型艾美耳球蟲陽性率最高，斯氏艾美耳球蟲陽性兔的卵囊平均數(shù)最高?，F(xiàn)將詳情報道如下。

1 材料和方法

1.1 制備飽和鹽水 1 000 mL 冷開水中加入超過410 g 普通食鹽，置于密閉玻璃瓶，用力搖勻，靜置過夜，取用上清液。

1.2 其他材料 60 目小銅篩、大小與150 mL 小燒杯相似的玻瓶（內(nèi)裝6～10 mL 飽和鹽水）、干凈的青霉素瓶或疫苗瓶（內(nèi)裝0.2～0.5 g 食鹽）、長鑷子、干凈的瓷磚（15 cm×20 cm）。

1.3 試驗兔群 試驗兔為35～90日齡黃兔，在每千克飼料中每4 d 輪換添加可愛丹125 mg、氯苯胍100 mg、地克珠利1 mg。91日齡以后不再使用任何抗球蟲藥。

1.4 取糞便 取糞前，先將籠底和集糞板沖洗干凈，待兔籠晾干后，將干凈的瓷磚密鋪在兔籠里。3 h后可從瓷磚上取樣，不管兔日齡大小，每只兔只取一粒糞。將樣品在6～10 mL 飽和鹽水中充分化開，糞液經(jīng)60 目小銅篩過濾，把濾液裝在備好的青霉素瓶中。每取完一次樣品后，小銅篩、小燒杯和長鑷子須先以流水充分沖洗干凈，再進(jìn)行第二次取樣。

2 鏡 檢

選用帶有圓形凹槽的載玻片。以吸管從前、后、左、右、中五個方向輕觸樣品的液面，吸取表面的糞液滴加于載玻片的凹槽中。先用10×12.5倍鏡掃視（緩慢移動載玻片，同時以粗調(diào)調(diào)焦），球蟲卵囊漂浮在液面。125倍鏡下觀察，卵囊呈橢圓形、西瓜子形、鴨蛋形，能明顯看到蛋殼狀結(jié)構(gòu)，無色、淡黃色、金黃色等。以125倍鏡對卵囊定位后，即以40×12.5倍鏡進(jìn)一步觀察卵囊形狀和結(jié)構(gòu)。本試驗觀察到的卵囊都是未胞子化的。

以125倍鏡觀察，在液面頂部取9個視野，用紅血球記數(shù)器記數(shù)，算出9個視野中球蟲卵囊的數(shù)量。必要時，算出9個視野中球蟲卵囊的數(shù)量后，將載玻片上的球蟲卵囊以觸片法重新制片，在500倍鏡下進(jìn)一步觀察卵囊形狀和結(jié)構(gòu)。

3 結(jié) 果

共檢測418 只兔的糞樣，發(fā)現(xiàn)7 種球蟲，包括穿孔艾美耳球蟲、中型艾美耳球蟲、大型艾美耳球蟲、斯氏艾美耳球蟲、無殘艾美耳球蟲、盲腸艾美耳球蟲、長形艾美耳球蟲。在各個日齡段中，大型艾美耳球蟲陽性率最高，斯氏艾美耳球蟲陽性兔的平均卵囊數(shù)最高，見表1，表中的卵囊數(shù)指陽性兔每一種球蟲的平均卵囊數(shù)。

表1 不同日齡黃兔檢出球蟲卵囊的情況

大于100日齡的兔，檢出的各種球蟲卵囊數(shù)明顯減少，從一粒糞中檢出的球蟲卵囊總數(shù)多在10個以內(nèi)，見表2。

表2 與球蟲卵囊總數(shù)區(qū)間對應(yīng)的兔數(shù)

4 討論與小結(jié)

1）試驗兔于35～90日齡在每千克飼料中每4 d輪換添加可愛丹125 mg、氯苯胍100 mg、地克珠利1 mg。未發(fā)現(xiàn)球蟲病死兔，說明該用藥方案可行。從表1 可看出，在該用藥方案下，黃兔仍感染多種球蟲，并排出卵囊，只是藥物控制了球蟲的繁殖，減弱球蟲對上皮組織的破壞。因此，雖有少數(shù)小兔出現(xiàn)短暫食欲下降、排軟糞，但無腹?jié)q等重癥和死亡。兔既可以產(chǎn)生抗球蟲免疫力，又不會死亡。

2）各種兔球蟲卵囊的形態(tài)、大小、顏色、結(jié)構(gòu)等資料，在網(wǎng)絡(luò)、書刊上都易獲得，文中不再重復(fù)描述，只談本試驗操作顯微鏡下觀察體會。球蟲卵囊漂浮在液面，可能會輕微晃動和移動，觀察時要避免顯微鏡周圍有風(fēng)扇等空氣流動的因素。125倍鏡下，大型艾美耳球蟲卵囊最好辯認(rèn)，呈金黃色小西瓜籽狀，卵膜孔的一端較平，有2個小突起（500倍鏡下，卵膜孔明顯，呈堤狀突出于卵囊壁）；斯氏艾美耳球蟲卵囊長度與大型艾美耳球蟲卵囊相近，但較瘦，接近兩端對稱的橢圓形，淡黃色澤接近大型艾美耳球蟲卵囊（500倍鏡下，似橙紅色鴨蛋，卵膜孔明顯，位于一端的頂部）；中型艾美耳球蟲在125倍鏡下，形狀近似75%大小的斯氏艾美耳球蟲卵囊，色澤為比斯氏球蟲更淡（近無色）的淺黃色（500倍鏡下，有卵膜孔，短橢圓形，形狀近似75%大小的斯氏球蟲卵囊）；穿孔艾美耳球蟲在125倍鏡下呈無色透明短橢圓形，大小約為50%中型艾美耳球蟲卵囊（500倍鏡下，卵膜孔不明顯，近圓形的短橢圓，有很淺的淺紫色）；125倍鏡下無殘艾美耳球蟲卵囊比大型艾美耳球蟲卵囊略大，二者色相近，但無殘球蟲卵囊無2個小突起；盲腸艾美耳球蟲卵囊呈淡棕色；長形艾美耳球蟲卵囊呈很長的瘦長橢圓形。

3）7 只小兔檢出的球蟲卵囊數(shù)≥200個，主要是斯氏艾美耳球蟲，7 只小兔均成活。從一粒糞檢出大型艾美耳球蟲卵囊數(shù)≥100個的兔糞濾液都混濁；從一粒糞檢出斯氏艾美耳球蟲卵囊數(shù)≥100個的兔糞濾液多數(shù)較清。但兔糞濾液混濁的樣品，也有只檢出少量幾個球蟲卵囊的現(xiàn)象。

4）從一粒糞﹙70日齡﹚檢出球蟲卵囊數(shù)最多的達(dá)390個。取一粒糞就夠了，無需多取，球蟲卵囊的多寡也與糞粒的大小無關(guān)。只取一粒新鮮兔糞，既可節(jié)省取樣時間，操作又簡便，并可作定量比較。