MTHFR基因C667T多態(tài)性與胃癌化療敏感的相關性探討

王文文，趙蜀崖

(海南省人民醫(yī)院內(nèi)鏡室，海南海口570311)

MTHFR基因C667T多態(tài)性與胃癌化療敏感的相關性探討

王文文，趙蜀崖

(海南省人民醫(yī)院內(nèi)鏡室，海南海口570311)

目的探討亞甲基四氫葉酸還原酶基因C667T(rs1801133)多態(tài)性與胃癌化療敏感性的相關性。方法選擇我院對5-FU敏感的胃癌患者150例作為實驗組，不敏感胃癌患者120例作為對照組，利用PCR技術檢測所有樣本C667T位點多態(tài)性。利用統(tǒng)計學軟件SPSS13.0對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。結果實驗組和對照組中均檢出CC、CT、TT三種基因型，三種基因型在實驗組中的分布頻率分別為34.0%、52.0%、14.0%，在對照組中的分布頻率分別為45.0%、44.2%、10.8%。等位基因頻率C/T在實驗組中的分布頻率為60%/40%，在對照組中的分布頻率為67%/33%。統(tǒng)計學分析結果顯示基因型在兩組中的分布頻率差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結論TT基因型有助于5-FU的化療效果，而CC基因型可能是胃癌患者對5-FU化療抵抗的重要遺傳因素。

胃癌；亞甲基四氫葉酸還原酶基因；C667T多態(tài)性；5-氟尿嘧啶

胃癌已經(jīng)成為世界性的健康難題，每年約有93萬新增病例，而同時約有70萬病例死亡，其中中國的病例占38%[1]。鑒于人們自我意識及診斷方面的不足，大多數(shù)胃癌患者就診時已經(jīng)處于癌癥晚期，而化療是可以延緩病程延長患者生存期的重要方式[2]。5-氟尿嘧啶是重要的化療藥物之一，其作用機理是進入體內(nèi)在亞甲基四氫葉酸的參與下與胸苷合酶形成穩(wěn)定的復合物，干擾DNA的合成和修復。作為葉酸代謝中的關鍵酶，亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)的活性與5-FU的化療效果具有相關性[3-4]。目前，影響MTHFR活性的基因多態(tài)位點中，C667T是最為常見的位點，該位點對嘧啶類化療藥物的化療效果的研究已經(jīng)有相關文獻報道，但是結果存在矛盾性[3-7]。本研究收集了本院2008-2011年三年中的胃癌相關病例進行研究，試圖揭示MTHFR C667T多態(tài)性與胃癌化療敏感的相關性，為胃癌化療藥物的個性化選擇提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取我院2008-2011年三年間對5-FU敏感的150例胃癌患者作為實驗組，選取120例不敏感的患者作為對照組。其中實驗組患者男性93例，女性57例，年齡42～69歲，平均59.7歲。對照組患者男性82例，女性38例，年齡43～70歲，平均58.5歲。兩組患者年齡、體重、癌癥轉移類型及例數(shù)等方面差異均無統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

1.2 研究方法

1.2.1 血樣的采集及DNA的提取收集患者血液生化檢測剩余血樣，利用酚-氯仿的方法提取基因組DNA。檢測其質(zhì)量后置于-20℃保存。

1.2.2 基因型檢測利用PCR擴增結合測序的方法檢測C667T多態(tài)性。50 μl PCR反應體系中含模板DNA 0.2 μg，引物各0.2～0.5 μmol/L，4種dNTP各200 μmol/L，Taq DNA聚合酶(北京天根公司產(chǎn)品)2 U。PCR循環(huán)參數(shù)為：首先在94℃進行2 min的熱變性，隨后進行32個循環(huán)反應，最后72℃延伸10 min。擴增產(chǎn)物在1.5%的瓊脂糖凝膠中電泳檢測，送上海生工進行序列測定。

1.3 統(tǒng)計學方法利用SPSS13.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，基因型頻率的比較采取χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

CC、CT、TT三種基因型在實驗組中的檢出例(率)分別為51例(34.0%)、78例(52.0%)、21例(14.0%)，在對照組中的檢出例(率)分別為54例(45.0%)、53例(44.2%)、13例(10.8%)，組間差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，CC基因型不利于5-FU化療敏感性。實驗組和對照組等位基因C/T的分布頻率分別為60%/ 40%、67%/33%，組間差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=25.63，P＜0.05)。

表1 兩組患者基因型檢出情況

3 討論

個體化醫(yī)療是未來醫(yī)學發(fā)展的方向，基因SNP多態(tài)性與疾病的關系可能為個體化醫(yī)療的發(fā)展提供理論參考。C667T多態(tài)位點是MTHFR基因的SNP位點之一，其CT的突變可導致該蛋白222位氨基酸由丙氨酸轉變?yōu)槔i氨酸，而此處氨基酸的轉變將使酶的活性降低[2]。從理論上來說，該酶活性的降低將減少亞甲基四氫葉酸的去路，增加該物質(zhì)的濃度，從而促進胸苷酸合成酶復合物的形成，進而減少dTTP的合成，使抑癌效果增強。

國內(nèi)外許多文獻對C667T的多態(tài)性與5-FU化療效果的相關性進行了研究[3-7]。Shitara等[7]以日本人群作為研究對象發(fā)現(xiàn)TT基因型可以顯著提高胃癌患者的化療效果，有利于提高患者的生存期。而國內(nèi)也有類似的研究結果，如Huang等[5]研究發(fā)現(xiàn)CC基因型患者的化療效果劣于含有T的基因型，李潔等[3]的研究結果也說明TT基因型的化療效果優(yōu)于CT基因型及CC基因型。而在德國人群的研究中發(fā)現(xiàn)該SNP位點的多態(tài)性與胃癌的化療效果及預后差異均無統(tǒng)計學意義。因此，關于C667T多態(tài)位點與胃癌化療效果的相關性尚存在爭議。

我們對我院2008-2011年三年間的胃癌患者進行分析，研究結果發(fā)現(xiàn)，CC、CT、TT三種基因型在實驗組中的檢出例(率)分別為51例(34.0%)、78例(52.0%)、21例(14.0%)，在對照組中的檢出例(率)分別為54例(45.0%)、53例(44.2%)、13例(10.8%)。統(tǒng)計學分析結果顯示，組間差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，CC基因型不利于5-FU化療敏感性。實驗組和對照組等位基因C/T的分布頻率分別為60%/40%、67%/33%，組間差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，等位基因T可增強5-FU化療的敏感性。

綜上所述，TT基因型有助于5-FU的化療效果，而CC基因型可能是胃癌患者對5-FU化療抵抗的重要遺傳因素。

[1]Kamang F,Dores GM,Anderson WF.Patterns of cancer incidence, mortality,and prevalence across five continents:defining priorities to reduce cancer disparities in different geographic regions of the world[J].J Clin Oncol,2006,24:2137-2150.

[2]鄭磊貞,王志杰.基因多態(tài)性與胃癌化療敏感性的研究進展[J].上海交通大學學報,2011,31(1):89-94.

[3]李潔,季枚,吳昌平,等.亞甲基四氫葉酸還原酶C667T基因多態(tài)性與晚期胃癌患者對5-FU化療敏感相關性[J].江蘇醫(yī)藥, 2010,18:2125-2127.

[4]高長明,陸建偉,Takezaki,等.亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與胃癌化療的敏感新關系研究[J]．中華流行病學雜志,2004,12: 1054-1058.

[5]Huang ZH,Hua D,Li LH.The polymorphisms of TS and MTHFR predict survival of gastric cancer patients treated with fluorouraci-l based adjuvant chem otherapy in Chinese population[J].Cancer Chem other Pharm acol 2009,63(5):911-918.

[6]Frosst P,B lom HJ,Milos R,et al.A candidate genetic risk factor for vascular disease:a common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase[J].Nat Genet,1995,10(1):111-113.

[7]Shitara K,Muro K,Ito S,et al.Folate in take along with genetic polymorphism sinmethylenetetrahydrofolate reductase and thymidylate synthase in patients with advanced gastric cancer[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev,2010,19(5):1311-1319.

Correlation of C667T polymorphism of MTHFR gene and chemotherapy sensitivity of gastric cancer.

WANG Wen-wen,ZHAO Shu-ya.Endoscopy Room,People's Hospital of Hainan Province,Haikou 570311,Hainan,CHINA

ObjectiveTo investigate the correlation of C667T polymorphism of MTHFR gene and chemotherapy sensitivity of gastric cancer.MethodsOne hundred and fifty patients with gastric cancer who were sensitive to 5-FU were chosen as the experiment group,and 120 patients with gastric cancer who were not sensitivity to 5-FU were chosen as the control group.The C667T polymorphism and genotype were detected by PCR and sequencing.All the data were analyzed by SPSS13.0.ResultsThree genotypes were detected,which is CC,CT and TT.The frequencies of CC,CT,TT were 34.0%,52.0%,14.0%in the experiment group and 45.0%,44.2%,10.8%in the control group,respectively.The allele frequency of C/T was 60%/40%in the experiment group and 67%/33%in the control group.The difference in the two group was statistically significant(P＜0.05).ConclusionTT genotype is sensitive to the 5-FU,and the CC may be an important factor for chemotherapy resistance.

Gastric cancer;MTHFR gene;Polymorphism of C667T;5-FU

R735.2

A

1003—6350（2013）18—2661—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.18.1108

2013-04-24)

趙蜀崖。E-mail：zsy4444@163.com