XPD751基因多態(tài)性與晚期非小細(xì)胞肺癌化療敏感性及毒性的相關(guān)性探討

張亞平，薛宏波，凌揚(yáng)，劉永萍，盛桂鳳

（蘇州大學(xué)附屬常州腫瘤醫(yī)院腫瘤內(nèi)科1、藥劑科2，江蘇常州213001）

XPD751基因多態(tài)性與晚期非小細(xì)胞肺癌化療敏感性及毒性的相關(guān)性探討

張亞平1，薛宏波2，凌揚(yáng)1，劉永萍1，盛桂鳳1

（蘇州大學(xué)附屬常州腫瘤醫(yī)院腫瘤內(nèi)科1、藥劑科2，江蘇常州213001）

目的探討人類著色性干皮病D組基因(XPD)與接受含鉑方案化療的晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者的近期療效及毒副反應(yīng)的關(guān)系。方法經(jīng)病理確診的晚期非小細(xì)胞肺癌患者62例，接受含鉑方案化療至少2周期后評(píng)價(jià)療效，采用TaqMan探針實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法和直接測(cè)序法對(duì)患者外周血XPD第751位密碼子進(jìn)行多態(tài)性分析，分析各基因型與晚期非小細(xì)胞肺癌患者近期療效及毒副反應(yīng)的的相關(guān)性。結(jié)果XPD751基因多態(tài)性與NSCLC患者對(duì)鉑類藥物化療的有效率無關(guān)(P＞0.05，95%CI=0.292 4～4.359 4，OR=1.1290)。攜帶XPD751 Lys/Gln基因型患者其消化道反應(yīng)較攜帶Lys/Lys基因型患者明顯(P＜0.05)。而在血液學(xué)方面的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論XPD751基因多態(tài)性與NSCLC患者對(duì)鉑類藥物化療的敏感性無關(guān)，而對(duì)預(yù)測(cè)其毒副反應(yīng)有一定價(jià)值。

非小細(xì)胞肺癌；XPD；化療毒副反應(yīng)

肺癌中80%左右為非小細(xì)胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)[1]，在其治療中，鉑類藥物起著舉足輕重的作用。它通過與腫瘤細(xì)胞DNA形成鏈間及鏈內(nèi)交聯(lián)而導(dǎo)致DNA損傷，引起細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抗腫瘤作用。人類著色性干皮病D組基因(Xeroderma pigmentosum group D，XPD)參與核苷酸切除修復(fù)和基因轉(zhuǎn)錄，在DNA損傷修復(fù)中起著重要作用。其多態(tài)性可以導(dǎo)致活性改變，從而與鉑類敏感性相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)旨在研究NSCLC患者中XPD751與含鉑類藥物為主的化療方案之間的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2006年10月至2010年4月在我院腫瘤內(nèi)科接受化療的62例晚期非小細(xì)胞肺癌患者，病例均經(jīng)病理學(xué)檢查確診，CT掃描證實(shí)具有可測(cè)量的實(shí)體病灶存在。所有患者均為漢族人，年齡37～72歲，中位年齡58歲；男性38例，女性24例；病理類型：腺癌39例，鱗癌13例，腺鱗癌5例，支氣管肺泡細(xì)胞癌2例，神經(jīng)內(nèi)分泌癌2例及未分類非小細(xì)胞肺癌1例。血常規(guī)、肝腎功能在治療前均在正常范圍內(nèi)，心電圖正常。預(yù)計(jì)生存期＞3個(gè)月以上。所有患者均在化療前抽取靜脈血2 ml，分離淋巴細(xì)胞基因組DNA供基因分析用。所有患者均知情并簽署知情同意書。

1.2 化療方案及療效評(píng)價(jià)所有患者均接受以順鉑為主的方案化療，采用NP方案化療的24例，TP方案化療的26例，GP方案的化療的8例，AP方案化療的4例。具體用法：NP方案：長(zhǎng)春瑞濱25 mg/m2，d1、d8；順鉑25 mg/m2，d1～3。TP方案：紫杉醇175 mg/m2，分d1、d8、d15，順鉑25 mg/m2，d2、d9、d16。GP方案：吉西他濱1 250 mg/m2d1、d8；順鉑25 mg/m2d1～3；培美曲塞：500 mg/m2d1+DDP 25 mg/m2d1～3。所有藥物均靜脈滴注。

1.3 基因型分析所有患者抗凝外周血用QIAmp?DNA blood Mini kit(Qiagen,Hilden,Germany)提取基因組DNA。PCR擴(kuò)增及探針由上?；倒竞铣伞CR反應(yīng)體系為12μl，含Taqman Universal PCR Master Mix(Applied Biosystems,Foster City, CA,USA)6μl，引物、探針濃度分別為900 nmol/L和300 nmol/L，50 ng的基因組DNA。在iCycler (Bio-Rad)熒光定量PCR儀上反應(yīng)：50°C 2 min，95°C 10 min；繼而95°C 30 s，60°C 1 min.進(jìn)行45個(gè)循環(huán)，儀器自動(dòng)收集熒光信號(hào)，軟件分析給出SNP分型結(jié)果。同時(shí)所有標(biāo)本送交上海基康公司直接測(cè)序。

1.4 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)所有患者必需進(jìn)行至少2個(gè)療程以上治療方可按RECIST 1.0標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行療效評(píng)定，分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩(wěn)定(SD)和進(jìn)展(PD)。毒副反應(yīng)按WHO抗癌藥物毒性分度標(biāo)準(zhǔn)分為0～Ⅳ度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0軟件進(jìn)行雙尾卡方檢驗(yàn)，當(dāng)出現(xiàn)期望值＜5時(shí)用Fisher精確概率法進(jìn)行計(jì)算，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 療效62例患者均完成2個(gè)周期化療，獲得PR 24例，SD 16例，PD22例，總有效率為38.7%。其中51例(82.3%)攜帶XPD751 Lys/Lys基因型，11例(17.7%)攜帶Lys/Gln基因型，未發(fā)現(xiàn)攜帶Gln/Gln基因型。在XPD751 Lys/Lys和Lys/Gln攜帶者中，化療有效(CR+PR)率分別為39.2%、36.4%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.860 2＞0.05，95%CI=0.292 4～4.359 4，OR= 1.129 0)，見表1。

表1 XPD751基因型與晚期NSCLC化療近期療效的關(guān)系[例(%)]

2.2 XPD751與化療毒副反應(yīng)的關(guān)系化療前后不同XPD751基因型患者毒副反應(yīng)的比較結(jié)果顯示：Ⅲ～Ⅳ度血液學(xué)毒性與患者攜帶的基因型無相關(guān)性(P＞0.05)。攜帶XPD751 Lys/Gln患者Ⅲ～Ⅳ度消化道反應(yīng)較攜帶Lys/Lys患者明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表2。

表2 XPD751基因型與化療后毒副反應(yīng)的關(guān)系（例）

2 討論

晚期NSCLC的治療目前仍以鉑類聯(lián)合第3代抗腫瘤藥物為主，鉑類藥物以順鉑最為常用。順鉑通過用細(xì)胞DNA形成順鉑-DNA加合物，影響DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，從而導(dǎo)致DNA損傷。機(jī)體主要通過堿基切除修復(fù)(BER)、核酸切除修復(fù)(NER)、錯(cuò)配修復(fù)(MMR)和重組修復(fù)(RR)等方式來修復(fù)損傷的DNA。有研究證明DNA修復(fù)基因的修復(fù)能力與肺癌的發(fā)病及耐藥相關(guān)[2]。對(duì)于正常人群，DNA修復(fù)基因可以降低肺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，而對(duì)于肺癌患者，DNA修復(fù)基因可以導(dǎo)致化療藥物的耐藥，而使化療療效降低。XPD為其中一個(gè)重要基因。XPD位于染色體19q13.2-13.3，在核苷酸修復(fù)系統(tǒng)中作為進(jìn)化保守的DNA解旋酶，發(fā)揮5'→3'解旋酶活性，參與核苷酸切除修復(fù)和基因轉(zhuǎn)錄，在DNA損傷修復(fù)中起著重要作用。

XPD的多態(tài)性可以改變DNA修復(fù)能力，與鉑類藥物的敏感性密切相關(guān)[3]。一組對(duì)135例Ⅳ期的非小細(xì)胞肺癌患者接受鉑類藥物治療并分析其SNP的研究中發(fā)現(xiàn)，XPD第751密碼子的變異與疾病進(jìn)展時(shí)間、化療效果之間存在相關(guān)性(P=0.03)[4]。而袁芃[5]研究未發(fā)現(xiàn)XPD Lys751Gln多態(tài)與化療敏感性有相關(guān)性。我們對(duì)62例患者的XPD751的基因型進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)Gln/Gln基因型缺如，這與劉永萍[6]的研究相同。在攜帶XPD751 Lys/Lys和Lys/Gln基因型中，化療有效率(CR+PR)分別為39.2%、36.4%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

機(jī)體對(duì)DNA損傷修復(fù)能力的降低，可能使人體正常組織對(duì)鉑類藥物的損傷修復(fù)能力也降低，從而化療毒性可能會(huì)增加[7]。有研究顯示在白細(xì)胞下降大于Ⅱ度的骨髓毒性發(fā)生率在XPD751不同基因型中有顯著差異[8]，而有的研究[9]顯示：XPD156多態(tài)性與Ⅲ～Ⅳ度血液學(xué)毒性相關(guān)，而與Ⅲ～Ⅳ度胃腸道毒性無關(guān)。丁忠海[10]研究發(fā)現(xiàn)攜帶XPD751 Lys/Lys的患者中Ⅲ～Ⅳ度惡心嘔吐及脫發(fā)較攜帶Lys/Gln+Gln/Gln患者明顯(P＞0.05)，而血液學(xué)毒性方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本文主要觀察了XPD Lys751Gln與含鉑藥物化療后的消化道反應(yīng)及骨髓抑制情況，發(fā)現(xiàn)攜帶不同XPDLys751Gln基因的患者Ⅲ～Ⅳ度血液學(xué)毒性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而攜帶XPD 751 Lys/Gln患者Ⅲ～Ⅳ度消化道反應(yīng)較攜帶Lys/Lys患者明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。這與前面的研究結(jié)果有差異，其原因可能與樣本量較少，只能做到檢測(cè)某一些特定人群有關(guān)。

目前的研究?jī)H局限于機(jī)體的某個(gè)基因?qū)熕幬锏挠绊?，但在治療過程中，患者對(duì)藥物的反應(yīng)性與很多因素相關(guān)，如對(duì)聯(lián)合藥物的敏感性、耐藥性等，這給臨床實(shí)際應(yīng)用中帶來諸多變數(shù)。為了讓患者更獲益，我們還需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，不斷探索和研究。

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Correlation between the polymorphisms in XPD751 gene and sensitivity and toxicity of chemotherapy in advanced non-small cell lung cancer

ZHANG Ya-ping1,XUE Hong-bo2,LING Yang1,LIU Yong-ping1,SHENG

Gui-feng1.Department of Oncology1,Department of Pharmacy2,Changzhou Tumor Hospital Affiliated to Soochow University,Changzhou 213001,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo study the relationship between the polymorphisms in XPD751 gene and sensitivity and toxicity of chemotherapy in advanced non-small cell lung cancer(NSCLC).MethodsA total of 62 patients with advanced NSCLC were routinely treated by cisplatin or carboplatin-based chemotherapy.The clinical response was evaluated after at least 2 cycles.Single nuclear polymorphisms(SNPs)in XPD Lys751Gln were assessed with 5'nuclease allelic discrimination assay(TaqMan)by real-time polymerase chain reaction and direct sequencing.The genotypes were tested for the association with clinical response and toxic reactions of platin-based chemotherapy in advanced NSCLC.ResultsThe response rate of chemotherapy showed no significant correlation in NSCLC patients with the polymorphisms in XPD751 gene(P＞0.05,95%CI=0.292 4～4.359 4,OR=1.1290).There was statistically significant difference between patients with XPD751Lys/Gln genotype and those with Lys/Lys genotype in grade 3 or 4 gastro-intestinal toxicity(P＞0.05),but with no significant difference in grade 3 or 4 hematologic toxicity(P＜0.05). ConclusionPolymorphisms in XPD751 gene may have no significant impact on the sensitivity of chemotherapy in NSCLC patients,but it provides evidence on severe toxicity.

Non-small cell lung cancer;XPD;Toxic reactions of chemotherapy

R734.2

A

1003—6350（2013）05—0648—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.05.0278

2012-10-28)

江蘇省衛(wèi)生廳資助項(xiàng)目(編號(hào)：P200935)；常州市衛(wèi)生局重大項(xiàng)目(編號(hào)：ZD200913)；常州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：CS20109013)

劉永萍。E-mail：liuuongping026@yahoo.com.cn