精制狗皮膏藥皮膚過敏試驗(yàn)研究

王 震

(咸寧市中醫(yī)醫(yī)院，湖北 咸寧 437100)

中國狗皮膏藥有著悠久的歷史，是中醫(yī)藥重要組成部分，外治法之一，其功用很多，可以舒筋、活血、散寒、止痛。用于筋骨痛、急性挫傷、扭傷、風(fēng)濕痛、關(guān)節(jié)痛、脅痛及肌肉疼痛等癥，并且使用方便、衛(wèi)生、快捷。然而當(dāng)前膏藥迅猛發(fā)展，其種類及生產(chǎn)廠家日漸增多，為了保證臨床使用的安全性，檢測(cè)是否有致敏作用成為評(píng)價(jià)精制狗皮膏安全性的重要內(nèi)容。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

豚鼠30 只，白色，雌雄各半，體重250～300g，由武漢市新洲區(qū)金耀動(dòng)物養(yǎng)殖廠提供，許可證號(hào):SCXK(鄂)2004-0006。

1.1.2 飼養(yǎng)管理

實(shí)驗(yàn)為盒養(yǎng)，5 只為1 盒;基礎(chǔ)飼料為實(shí)驗(yàn)豚鼠全價(jià)顆粒飼料，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心全價(jià)營養(yǎng)顆粒飼料加工廠提供，飲用水為自來水，實(shí)驗(yàn)室溫度為21～28℃，濕度為55%～85%。光照12h 的明暗周期。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK(鄂)2004-0024。

1.1.3 受試藥物及制備

精制狗皮膏。性狀:淡黃色片狀橡膠膏;規(guī)格:9cm×11cm/片，每片中含生藥1.49 克，批號(hào):20040401，湖北省黃石衛(wèi)生材料藥業(yè)有限公司生產(chǎn);試驗(yàn)前制成4.5cm×2.2cm。

1.1.4 陽性致敏物和激發(fā)物

1% 2、4-二硝基氯苯(由1g 2、4-二硝基氯苯加100ml 無水乙醇制成)，0.1% 2、4-二硝基氯苯(0.1g 2、4-二硝基氯苯加100ml 無水乙醇制成)。

1.1.5 空白對(duì)照物

空白橡膠膏，制備同供試藥物，湖北省黃石衛(wèi)生材料藥業(yè)有限公司提供。

1.2 方法

將豚鼠按體質(zhì)量、性別隨機(jī)分為3組:受試藥物組、空白對(duì)照組、陽性對(duì)照組，每組10 只。

1.2.1 致敏接觸

豚鼠在給藥前24h，背部右側(cè)脫毛，面積為3.5cm×5cm。受試藥物組粘貼精制狗皮膏(4.5cm×2.2cm)，陽性對(duì)照組涂擦1% 2、4-二硝基氯苯0.1ml/只，空白對(duì)照組粘貼空白橡膠膏(4.5cm×2.2cm)。涂藥后上蓋二層醫(yī)用紗布加一層塑料紙，用醫(yī)用膠帶固定包扎。6h 后拆去固定膠帶、塑料紙與醫(yī)用紗布，用溫水洗凈擦干。在第7d、第14 d 以同樣的方法各重復(fù)1次，共計(jì)3次。

1.2.2 激發(fā)接觸

于末次給受試物致敏后第13d 將豚鼠背部左側(cè)脫毛，面積為3.5cm×5cm，次日按組別不同分別進(jìn)行激發(fā)接觸，即受試藥物組(4.5cm×2.2cm)、陽性對(duì)照組(0.1% 2、4-二硝基氯苯0.1ml/只)、空白對(duì)照組(空白橡膠膏4.5cm×2.2cm)。給藥方法同致敏接觸，擦干后立即觀察，然后于24、48、72h 觀察皮膚過敏反應(yīng)情況，記錄各時(shí)間過敏反應(yīng)的分值及致敏率。

1.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

皮膚過敏反應(yīng)程度的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)。紅斑形成:無紅斑0分;輕度紅斑，勉強(qiáng)可見1分;中度紅斑，明顯可見2分;重度紅斑3分，紫紅色紅斑并有焦痂形成4分。水腫形成:無水腫0分;輕度水腫，勉強(qiáng)可見1分;中度水腫，明顯可見(邊緣高出周圍皮膚)2分;重度水腫，皮膚隆起1mm，輪廓清楚3分;嚴(yán)重水腫，皮膚隆起1mm 以上并有擴(kuò)大或有水皰或破裂4分;總積分8分。反應(yīng)平均值=(紅斑形成總分+水腫形成總分)/合計(jì)動(dòng)物數(shù)。

皮膚致敏性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn):致敏率0%～10%為無致敏性，11%～30%為輕度致敏性，31%～60%為中度致敏性，61%～80% 為高度致敏性，81%～100%為極度致敏性;致敏率=出現(xiàn)水腫或紅斑的動(dòng)物例數(shù)/供試動(dòng)物總數(shù)。

2 結(jié) 果

所有試驗(yàn)豚鼠(30 只)均無哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴(yán)重的全身性過敏反應(yīng);全部豚鼠在試驗(yàn)區(qū)期間無不良反應(yīng)，一般情況良好，體重增加，見表1。

受試藥物組在0h 觀察發(fā)現(xiàn)皮膚均有中度紅斑，明顯可見，反應(yīng)平均值為2.1，致敏率為100%;在24h 觀察皮膚6 只有輕度紅斑，勉強(qiáng)可見，反應(yīng)平均值為0.6，致敏率為60%;48h 觀察只有2 只豚鼠有輕度紅斑，反應(yīng)平均值為0.2，致敏率為20%，程度比24h 有所減輕;72h 反應(yīng)平均值為0，致敏率為0，均恢復(fù)正常同，無水腫的現(xiàn)象。

表1 精制狗皮膏對(duì)豚鼠體重的影響(，n=10)(體重單位:g)

空白對(duì)照組在0h 觀察發(fā)現(xiàn)皮膚5 只豚鼠有中度紅斑，5 只豚鼠有輕度紅斑，反應(yīng)平均值為1.5，致敏率為100%;在24h 觀察皮膚4 只有輕度紅斑，勉強(qiáng)可見，反應(yīng)平均值為0.4，程度比0h 有所減輕，致敏率為40%;48h 觀察只有1 只豚鼠有勉強(qiáng)可見輕度紅斑，反應(yīng)平均值為0.1，致敏率為10%;72h 反應(yīng)平均值為0，致敏率為0，均恢復(fù)正常，見表2、3。

表2 對(duì)豚鼠皮膚的激發(fā)試驗(yàn)各時(shí)段反應(yīng)平均值(n=10)

陽性對(duì)照組在0h 觀察到有明顯皮膚過敏反應(yīng)，10 只豚鼠均出現(xiàn)程度不同紅斑，9 只豚鼠出現(xiàn)程度不同水腫，反應(yīng)平均值為3.9，反應(yīng)程度比受試藥物組明顯，致敏率為100%;24h10 只豚鼠均有紅斑，9 只豚鼠出現(xiàn)程度不同水腫，反應(yīng)平均值為3.6，致敏率為100%;48h 有5 只焦痂，其余5只有程度不同的紅斑，1 只豚鼠有輕度水腫，勉強(qiáng)可見，反應(yīng)平均值為3.1，致敏率為100%;72h 有3 只焦痂，5 只勉強(qiáng)可見紅斑，2 只明顯可見，反應(yīng)平均值為2.1，致敏率為100%，但均未發(fā)現(xiàn)水腫，為極度致敏性，見表2、3。

表3 精制狗膏對(duì)豚鼠皮膚各時(shí)段激發(fā)試驗(yàn)致敏率(n=10)

3 討論

本品(精制狗皮膏，批號(hào):20040401)通過豚鼠皮膚重復(fù)接觸，觀察機(jī)體免疫系統(tǒng)在皮膚上的反應(yīng)。結(jié)果受試藥物有即時(shí)的極度致敏性，但過敏反應(yīng)程度明顯輕于陽性對(duì)照，與空白對(duì)照比較基本一致;24h 過敏反應(yīng)程度及致敏率明顯降低;48h 后基本恢復(fù)正常;72h 完全恢復(fù)正常。未見水腫及全身性過敏反應(yīng)體重增加，表明本品對(duì)局部皮膚有一過性過敏反應(yīng)。