藏藥前列寧膠囊中總黃酮成分提取工藝研究

馬宏偉 李懷平

山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司，山東 濟(jì)南 250101

前列寧膠囊為金訶藏藥股份有限公司獨(dú)家產(chǎn)品，由菥蓂子、葡桃、大托葉云實(shí)、豆蔻等13味藥材組成。主要功能清熱解毒，化瘀通淋，用于熱毒瘀阻所引起的尿頻、尿急、尿痛屬中醫(yī)淋證者［1］，療效顯著。但前列寧膠囊現(xiàn)有工藝為全藥粉入藥，患者服藥量大，為此，對(duì)前列寧膠囊進(jìn)行了提取工藝研究。本文采用正交試驗(yàn)法，以總黃酮含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察了前列寧膠囊的乙醇提取工藝［2］，為產(chǎn)品的工藝優(yōu)化奠定了基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

前列寧處方藥材均由金訶藏藥股份有限公司提供，經(jīng)青海省藏醫(yī)院尼瑪鑒定，均為正品;蘆丁對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品鑒定所，100080－200707，供UV法測(cè)定，含量為92．5%);UV－2450型紫外可見分光光度計(jì) (SHIMADZU);RE－52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (上海亞榮生化儀器廠);KQ5200B型超聲波清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司);水為蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 前列寧膠囊醇提液中總黃酮的含量測(cè)定［3］

2.1.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 精密量取對(duì)照品溶液1ml，置25ml量瓶中，加水至6.0ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置5分鐘，加10%硝酸鉛溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，采用相應(yīng)的試劑為空白，采用島津UV－2450型紫外可見分光光度計(jì)在200～700nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果顯示在500nm有最大吸收。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密量取對(duì)照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分別置25ml量瓶中，各加水至6.0ml，加5%亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置5分鐘，加10%硝酸鉛溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外－可見分光光度法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅤA)，在500nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表1。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=0.0104X+0.0002，r=0.9998，線性范圍為 7.50656～37.53280μg/mL，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

表1 總黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果

2.1.3 樣品溶液的測(cè)定 精密量取供試品溶液3ml，置25ml量瓶中，自“各加水至6.0ml……”起，按2.1.1方法依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的含量 (μg)，計(jì)算，即得。

2.2 正交試驗(yàn) 影響乙醇提取的影響因素有提取時(shí)間、提取次數(shù)、加液量、乙醇濃度，對(duì)這4個(gè)因素各選三個(gè)水平，進(jìn)行正交試驗(yàn)，以提取液中的總黃酮量為考察指標(biāo)，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

由正交試驗(yàn)結(jié)果和方差分析結(jié)果可知，以總黃酮的量為考察指標(biāo)，提取次數(shù)有顯著性影響，各影響因素的主次順序?yàn)锽＞A＞C＞D，最佳提取工藝為A1B3C2D3。但總黃酮的量提取2次時(shí)為提取3次的93.68%;加液為8倍量時(shí)為加液10倍量時(shí)的96.51%。綜合各種因素考慮，優(yōu)選提取工藝為A1B2C2D2，即加50%乙醇提取2次，每次加液8倍量，提取2小時(shí)。

表3 總黃酮測(cè)定方差分析表

3 討論

3.1 本試驗(yàn)僅對(duì)前列寧膠囊處方中的醇溶性有效成分進(jìn)行了初步考察，因各種藥材沒有明確的有效成分做考察指標(biāo)，故選擇總黃酮作為提取工藝的考察指標(biāo)。

3.2 乙醇濃度對(duì)提取效率有所影響，當(dāng)乙醇濃度較低時(shí)，會(huì)有較多的水溶性雜質(zhì)提出，過(guò)高時(shí)，不僅影響提取效果，而且還存在大生產(chǎn)時(shí)的安全隱患，濃度為50%的乙醇提取比較合適。

本試驗(yàn)優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定、可行，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

［1］國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局．國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)頒布件．批件號(hào):(2011)國(guó)藥標(biāo)字ZD－0153號(hào)．

［2］趙英日，王淑美，崔紅花，等．盤龍參中總黃酮提取工藝研究［J］．中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2011，(14):46－48．

［3］國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典2010年版 (一部)［S］．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:333．