假藿香不同入藥部位中齊墩果酸的含量測(cè)定

呂錫亮姬生國*

（1 河南省職工醫(yī)院，河南 鄭州 450002；2 廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006）

假藿香不同入藥部位中齊墩果酸的含量測(cè)定

呂錫亮1姬生國2*

（1 河南省職工醫(yī)院，河南 鄭州 450002；2 廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006）

目的對(duì)民間中草藥假藿香不同入藥部位中齊墩果酸的含量進(jìn)行進(jìn)行比較，以確定適宜的入藥部位。方法采用RP-HPLC法測(cè)定。色譜柱：ODS-C18色譜柱（4.6mm×250mm），流動(dòng)相：甲醇-0.5%磷酸水（90∶10）；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm。結(jié)果其根、莖、葉中含量分別為0.02106%，0.02681%，0.03206%。結(jié)論葉中含量比根中高0.011%，比莖中高0.00525%，莖和根含量相近，在藥材重量上莖和根占85%以上，故建議以葉入藥為佳。該方法快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、重現(xiàn)性好。

蛇百子；齊墩果酸；HPLC

1 儀器與材料

1.1 儀器及試劑

LC-2010AHT高效液相色譜儀（日本島津公司），1/10萬分析天平（日本島津公司）SK250LH超聲波清潔器（超聲功率為100W，上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司），齊墩果酸對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110709-200505），試驗(yàn)所用試劑除流動(dòng)相為色譜純外其余均為分析純。

1.2 藥材

實(shí)驗(yàn)材料采集于廣州市廣州大學(xué)城廣東藥學(xué)院藥用植物園，經(jīng)廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院姬生國教授鑒定為山香Hyptis suaveolens (L.) Poit。藥材陰干，打粉，過篩備用。

2 方法與結(jié)果

表1 齊墩果酸加樣回收率數(shù)據(jù)表（n=6）

2.1 色譜條件[3,4]

色譜柱：迪馬Kromasil ODS柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.5%磷酸水（90∶10）；檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；流速：1mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 線性范圍考察

精密量取上述對(duì)照品溶液0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，定容至5mL容量瓶中，配成系列濃度為0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/mL的齊墩果酸對(duì)照品溶液。以齊墩果酸濃度為橫坐標(biāo)(x)，峰面積為縱坐標(biāo)(y)作標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程：y=107x-1832.3，r=0.9996，齊墩果酸含量在0.05～0.5mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.2.2 精密度考察

儀器精密度度實(shí)驗(yàn)：取齊墩果酸對(duì)照品貯備液，在上述色譜條件下，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，以對(duì)照品峰面積計(jì)算偏差，RSD=0.40%。方法重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)：按供試品溶液的制備方法配制齊墩果酸樣品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定齊墩果酸峰面積值，RSD=0.40%。

2.2.3 穩(wěn)定性考察

將上述齊墩果酸中等濃度的對(duì)照品溶液在第0、1、4、8、12、24h連續(xù)進(jìn)樣3次，分別測(cè)定峰面積，RSD=0.30%，齊墩果酸在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.4 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取已測(cè)定含量齊墩果酸含量的葉樣品溶液6份，分別精密加入同一濃度的齊墩果酸對(duì)照品溶液，按供試品溶液的制備方法制備，在上述色譜條件下，測(cè)得齊墩果酸的回收率平均為98.93%，RSD為0.81%（表1）。

2.3 供試品溶液的制備與測(cè)定

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取齊墩果酸對(duì)照品0.0100g，加甲醇（色譜純）溶解并定容至10mL，即為1mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備

精密稱取藥材根、莖、葉粗粉各5g，加95%乙醇45mL超聲提取，過濾，濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干后直接加甲醇定容至5mL。

2.3.3 樣品的測(cè)定

取根莖葉三部位的樣品，按2.4.2項(xiàng)下制備樣品溶液，根據(jù)測(cè)定成分的線性范圍進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，由對(duì)應(yīng)的線性方程計(jì)算其含量，結(jié)果見表2。對(duì)照品溶液及樣品溶液的HPLC圖見圖1。

3 討 論

3.1 假藿香中含有齊墩果酸和熊果酸，齊墩果酸和熊果酸是同分異構(gòu)體，由于結(jié)構(gòu)的相似性，性質(zhì)極為相近，在進(jìn)行液相分離時(shí)其保留時(shí)間基本一致，因此會(huì)出現(xiàn)很難分離。通過大量的實(shí)驗(yàn)，我們優(yōu)選了齊墩果酸的HPLC條件。

3.2 樣品提取方法的選擇：用超聲波提取法提取齊墩果酸，溶劑性質(zhì)、溶劑量、溶劑濃度、超聲時(shí)間、所加藥材的質(zhì)量和藥材的粉碎度對(duì)齊墩果酸含量均有影響。本實(shí)驗(yàn)采用95%乙醇9倍的量作為根、莖、葉的提取溶劑，均超聲提取2h，提取效果良好。

表2 樣品中測(cè)定的齊墩果酸含量結(jié)果（n=6）

圖1 對(duì)照品及蛇百子樣品高效液相色譜圖

3.3 色譜條件的選擇及優(yōu)化[5,6]：熊果酸和齊墩果酸是同分異構(gòu)體，蛇百子同時(shí)含有這兩個(gè)成分，在葉中較難分離。本實(shí)驗(yàn)嘗試了三種色譜柱：①在Phenomenex Luna C18（2）150×4.6mm；②在Waters MS C185μm 250×4.6mm；③Dikma PLATISIL ODS 5μm 250×4.6mm。結(jié)果前兩種色譜柱分離效果均不理想，因此，選用Dikma PLATISIL ODS 5μm 250×4.6mm。試驗(yàn)考察了以下色譜系統(tǒng)：甲醇-水，甲醇-磷酸水，乙腈-水，乙腈-磷酸水，所得的色譜圖以甲醇-0.5%磷酸（90∶10）洗脫為最佳。

3.4 假藿香為一年生草本植物，植株高可到達(dá)2米，其莖、根粗壯，莖和根的重量占整株植物重量的85%以上，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，其根、莖、葉中含量分別為0.02106%，0.02681%，0.03206%。葉中含量比根中高0.011%，比莖中高0.00525%，由于，齊墩果酸為其主要有效成分，故此，建議入藥用葉。

[1] 全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編(下冊(cè))[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1978:65-66.

[2] 國家醫(yī)藥管理局中草藥情報(bào)中心站編.植物藥有效成分手冊(cè)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1986:427-428.

[3] 江記武,肖慶祥.植物藥有效成分手冊(cè)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1986.

[4] 王天勇,楊文遠(yuǎn).反相高效液相色譜法測(cè)定七種中藥中齊墩果酸[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào),1995,14(4):82-84.

[5] 鄭茂,范博,丁紅,等.高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地白花蛇舌草中齊墩果酸和熊果酸的含量[J].中國藥物與臨床,2010,10(3): 261-262.

[6] 劉偉,丁海杰.HPLC測(cè)定夏枯草中熊果酸、齊墩果酸、迷迭香酸的含量[J].中成藥,2008,30(4):577-580.

Determination of Oleanolic Acid in Hyptis Suaveolents Different Vegetative Organs

LV Xi-liang1, JI Sheng-guo2

(1 Henan Province Worker's Hospital, Zhengzhou 450002, China; 2 School of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China)

ObjectiveTo determinate the content of oleanolic acid in Hyptis suaveolents by RP- HPLC, and Choose appropriate medicinal organs.MethodsThe oleanolic acid was determined by HPLC, Column: ODS-C18(250×4.6mm), mobile phase: methanol-water (with 0.5% H3PO4), detection at 210nm, flow rate: 1.0mL/min, column temperature: 25℃.ResultsThe determination of oleanolic acid was 0.02106% in roots,0.02681% in stems, 0.03206% in leaves.ConclusionThe content in leaf than root high 0.011%, more than 0.00525% of the stem, high content of stems and roots. Stem and root content close, in medicinal materials on stem and root weight 85%, therefore, Suggest to clinical medicinal leaves as well. The established method is quick, accurate, sensitive and well repeated.

Hyptis suaveolents; Oleanolic acid; HPLC假藿香為唇形科植物山香Hyptis suaveolens (L.) Poit的干燥全草，別名逼死蛇、毛老虎，黃黃草、大還魂，主產(chǎn)于廣東、廣西、臺(tái)灣等地。全草入藥，是我國南方地區(qū)廣泛使用的中草藥。其性辛、溫，味苦，有疏風(fēng)散瘀，解毒定痛之功效，用于治療感冒，風(fēng)濕，濕疹，跌打創(chuàng)傷等癥[1,2]。我院以此藥材為主藥，正在研制治療濕疹的外用制劑，由于該植物植株高大，莖和根較重，大量運(yùn)輸成本較大，故此，對(duì)其不同入藥部位中的齊墩果酸進(jìn)行測(cè)定，為入藥部位的選擇以及以后研究制劑的質(zhì)量控制提供參考。

R927.2

B

1671-8194（2013）17-0056-02

*通訊作者：E-mail：shengguo_ji@yahoo．cn