高效液相色譜法測(cè)定加味逍遙丸芍藥苷的含量測(cè)定

魏 龍

（株洲市中心醫(yī)院，湖南 株洲 412000）

高效液相色譜法測(cè)定加味逍遙丸芍藥苷的含量測(cè)定

魏 龍

（株洲市中心醫(yī)院，湖南 株洲 412000）

目的 探討高效液相色譜法測(cè)定加味逍遙丸含芍藥苷的含量。方法 應(yīng)用Dikmond C18：色譜柱，進(jìn)行定量分析。柱溫：室溫；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸(14∶86)；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm。結(jié)果 芍藥苷進(jìn)樣濃度在5.81～57.389μg/mL(r=0.9998)范圍內(nèi)與其峰面積顯示良好的線性關(guān)系，重現(xiàn)性試驗(yàn)RSD為0.2%。結(jié)論 本法方法準(zhǔn)確，重復(fù)性好，精密度高，便與測(cè)定加味逍遙丸中芍藥苷的含量，有效控制該制劑的質(zhì)量。

高效液相色譜法；加味逍遙丸；芍藥苷

由茯苓、柴胡、甘草、薄荷、牡丹皮、白芍、當(dāng)歸等中藥組成的具養(yǎng)血健脾，清熱舒肝的作用的中成藥加味逍遙丸，臨床應(yīng)用廣泛。經(jīng)證實(shí)具有確切的療效，作用安全穩(wěn)定，主要用于兩脅脹痛、脾弱肝郁、倦怠食少、肝脾不和、脹痛臍腹、月經(jīng)不調(diào)、頭暈?zāi)垦1,2]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)加味逍遙丸中芍藥苷的含量運(yùn)用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)得到了有效的控制，結(jié)果精確，方法快捷、簡(jiǎn)便，可以用于控制制劑質(zhì)量，報(bào)道如下。

1 藥品與儀器

1.1 藥品

加味逍遙丸（湖南雙鶴新特藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z15020181，批號(hào)：120601，120602，120603）；芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：20120412，供含量測(cè)定用，購(gòu)自寶雞市辰光生物科技有限公司）。水為新制多重蒸餾水，甲醇（濟(jì)南市旺億化工貿(mào)易有限公司）為色譜純，磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉等其他試劑為分析純。

1.2 儀器

DIONEX-P680液相色譜儀（美國(guó)），SPD-10AvP紫外檢測(cè)器；77251定量閥；photoLab 6600 紫外可見分光光度計(jì)（德國(guó)）；FA1604分析天平（沈陽(yáng)鑫科之杰儀器化玻有限公司）；TD-300W超聲波清洗機(jī)（北京泰元達(dá)創(chuàng)科技有限公司）。Chromeleon色譜工作站，EX324ZH電子分析天平（ d = 0101g，美國(guó)）。

1.3 色譜條件

Dikmond C18色譜柱，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑C18（4.5mm ×150mm，5μm，北京京科瑞達(dá)科技有限公司）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸（14∶86）；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm；柱溫：室溫，進(jìn)樣量：20μL。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低于4000。

1.4 供試品溶液的制備

加味逍遙丸碾碎1g，過(guò)篩孔內(nèi)徑0.150mm（100目篩），精密稱重后，放入錐形瓶中，精密加入50%甲醇水溶液50mL，密塞，精密稱重，超聲處理（頻率45Hz，功率240W）30min提取1h，冷卻，精密稱重，用50%甲醇溶液補(bǔ)足丟失的重量，濾過(guò)，搖勻，取續(xù)濾液，可得到供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備，取經(jīng)60℃干燥至恒重的芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱重，加流動(dòng)相中制成每1mL含60μg芍藥苷對(duì)照品，可得到對(duì)照品溶液。

1.5 線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)

取經(jīng)60℃干燥精密稱重的芍藥苷對(duì)照品12.25mg，放入50mL棕色10mL量瓶?jī)?nèi)，加流動(dòng)相溶解稀釋，搖勻；從上述溶液中分別精密吸取0.5，1.0，2.0，3.0，4.0mL放入5個(gè)10mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋并定容。精密吸取對(duì)照品溶液各10μL，注入色譜儀，記錄色譜峰圖[3]。

1.6 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取濃度為35.2μg/mL的芍藥苷對(duì)照品溶液，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得芍藥苷峰面積。

表2 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取含芍藥苷的供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，10，12h進(jìn)樣10μL，測(cè)得芍藥苷峰含量[4]。

1.8 重復(fù)性實(shí)臉

取同一批號(hào)加味逍遙丸（批號(hào)：120601），按照供試品溶液的制備方法平行制備6份，精密吸取10μL，色譜條件下平行測(cè)定6次。

1.9 樣品含量測(cè)定

取加味逍遙丸樣品3批（批號(hào)分別為：050601，050602，050603），按照供試品溶液的制備，按上述色譜條件測(cè)定并計(jì)算含量[5]。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

SPSS等軟件處理，計(jì)數(shù)資料的組間比較應(yīng)用卡方檢驗(yàn)或fisher確切概率法，多因素分析應(yīng)用Logistic回歸。計(jì)量資料符合正態(tài)分布者應(yīng)用平均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差表示，不符合正態(tài)分布者用中位數(shù)及25%、75%位數(shù)表示。

2 結(jié) 果

2.1 線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)

對(duì)照品濃度與對(duì)應(yīng)峰面積（Y）進(jìn)行回歸，回歸方程為：Y=1837.4C-11.447，r=0.9998。芍藥苷在5.81～57.389μg/mL的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈正比關(guān)系，見表1。

表1 線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 精密度實(shí)驗(yàn)

測(cè)得芍藥苷峰面積的RSD為0.98%，見表2。

2.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

表明芍藥苷在供試品溶液內(nèi)放置12h穩(wěn)定，芍藥苷峰含量的RSD=0.72，見表3。

2.4 重復(fù)性實(shí)臉

芍藥苷含量的RSD為1.28%（n=5），表明本法的重復(fù)性好，見表4。

表4 重復(fù)性實(shí)臉結(jié)果

2.5 樣品含量測(cè)定

選取加味逍遙丸樣品3批（批號(hào)分別為：120601，120602，120603）按照供試品溶液的制備，按上述色譜條件測(cè)定并計(jì)算含量，見表5。

表5 加味逍遙丸中芍藥苷含量(n=3)

3 討 論

由茯苓、柴胡、甘草、薄荷、牡丹皮、白芍、當(dāng)歸等中藥組成的具養(yǎng)血健脾，清熱舒肝的作用的中成藥加味逍遙丸，臨床應(yīng)用廣泛。經(jīng)證實(shí)具有確切的療效，作用安全穩(wěn)定，主要用于兩脅脹痛、脾弱肝郁、倦怠食少、肝脾不和、脹痛臍腹、月經(jīng)不調(diào)、頭暈?zāi)垦?。其中白芍具有散淤止痛、清熱涼血作用。具有?zhèn)靜、保肝、鎮(zhèn)痛、瀉下、抗菌功效。其主要藥效成分為芍藥苷。本文應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定了芍藥苷的含量[6,7]。

結(jié)果顯示，在芍藥苷進(jìn)樣濃度在5.81～57.389μg/mL（r=0.9998）范圍內(nèi)與其峰面積顯示良好的線性關(guān)系，重現(xiàn)性試驗(yàn)RSD為0.2%。穩(wěn)定性較好。

在2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》中，擬訂了逍遙丸的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)為芍藥苷在藥物中的含量。明代薛己編撰的《內(nèi)科摘要》中方劑“逍遙丸”基礎(chǔ)上加味而成[8]。有研究表明，以阿魏酸作為指標(biāo)對(duì)含量測(cè)定條件，當(dāng)流動(dòng)相pH值約為2.5時(shí)，抑制阿魏酸的拖尾，當(dāng)流動(dòng)相pH值＜2.5時(shí)C18柱效下降較快，為考慮方法的耐用性。所以選擇芍藥苷為含測(cè)指標(biāo)更合理、結(jié)果更準(zhǔn)確[9,10]。

本實(shí)驗(yàn)在流動(dòng)相選擇乙腈-0.1% 磷酸（14∶86）作為芍藥苷含量測(cè)定的流動(dòng)相，理論塔板數(shù)高。研究表明，甲醇-0.5%冰醋酸理論塔板數(shù)少，甲醇紫外吸收波長(zhǎng)與芍藥苷的檢測(cè)波長(zhǎng)相近，干擾大。而使用磷酸鹽緩沖溶液可明顯改善芍藥苷峰形，理論板數(shù)均符合相關(guān)要求。

綜上所述，采用高效液相色譜法測(cè)定芍藥苷含量，結(jié)果表明，本法簡(jiǎn)單準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性強(qiáng)，可以有效地控制加味逍遙丸的質(zhì)量。

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1671-8194（2013）29-0047-02