五藤痛風(fēng)飲對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型IL-1β、NO的影響

徐 靜 王曉璐 郭 慧 李 慧 梁 華*

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040）

五藤痛風(fēng)飲對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型IL-1β、NO的影響

徐 靜 王曉璐 郭 慧 李 慧 梁 華*

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040）

目的 本實驗研究五藤痛風(fēng)飲對高尿酸血癥并急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的IL-1β、NO指標(biāo)的影響。方法 將Wister大鼠60只隨機分為6組，分別為空白對照組、模型對照組、五藤痛風(fēng)飲高劑量、五藤痛風(fēng)飲中劑量、五藤痛風(fēng)飲低劑量、西藥對照組。每天給大鼠喂特制的酵母飼料，同時灌胃給腺嘌呤和治療藥各1次，連續(xù)給藥7d。于第5天除空白組外其余大鼠按照國外Coderre等經(jīng)典方法略作改進造模，第7天給藥后采血、取關(guān)節(jié)液和滑膜，比較6組IL-1β、NO方面的變化。結(jié)果 五藤痛風(fēng)飲高、中劑量組均可降低實驗大鼠的IL-1β水平，與模型組對照組比較，高劑量P＜0.01有極顯著差異，中劑量P＜0.05有顯著差異。結(jié)論 五藤痛風(fēng)飲可以降低高尿酸血癥并急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的IL-1β、NO的分泌，對關(guān)節(jié)有治療和保護作用。

急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎；尿酸鈉；IL-1β；NO

痛風(fēng)是由尿酸鈉結(jié)晶沉積在關(guān)節(jié)周圍而引起的炎性反應(yīng)，高尿酸血癥是其表現(xiàn)的主要特征。隨著人們生活水平的提高，高嘌呤、高蛋白食物攝入和飲酒量的增多，痛風(fēng)的發(fā)病率也明顯上升。正確的使用中藥方劑既能有效的降低尿酸含量和炎癥因子的水平，又能保護腎臟減少不良反應(yīng)。

1 實驗材料與方法

1.1 實驗材料

①動物：Wister清潔級大鼠60只，體質(zhì)量200g。北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供。②藥物。五藤痛風(fēng)飲：忍冬藤、海風(fēng)藤、雞血藤、絡(luò)石藤、青風(fēng)藤、穿山龍、土茯苓、威靈仙等飲片組成。按比例配，加水煎煮，濃縮成濃度為7.2g/mL（高劑量用量）。陽性對照藥：秋水仙堿（西雙版納版納藥業(yè)有限責(zé)任公司），每片含秋水仙堿0.5mg，批號120313。配制成0.03mg/mL。尿酸鈉：SIGMAALDRICH公司，規(guī)格：5g/瓶，CAS：1198-77-2。配制成25mg/mL。腺嘌呤：SIGMA公司，制成10mg/mL的乳濁液，現(xiàn)用現(xiàn)配。特制酵母飼料：酵母干粉（英國OXIOD公司）與普通大鼠飼料混合，制成含量為10%的酵母飼料。氯化鈉注射液：500mL/瓶，批號：120517A3，哈爾濱三聯(lián)藥業(yè)有限公司提供。③試劑與儀器。試劑盒：NO、白介素-1β（IL-1β）ELISA試劑盒均由RD公司提供。儀器：KDC-40低速離心機、酶標(biāo)儀、KQ-500E型醫(yī)用超聲波清洗器。

1.2 實驗方法

1.2.1 試劑的制備：尿酸鈉溶液的制備：取250 mg尿酸鈉晶體顆粒加入9mL生理鹽水，1mL吐溫80加熱攪拌，制成濃度為25mg/mL的尿酸鈉溶液。

1.2.2 動物分組：將Wister清潔級大鼠60只在相同環(huán)境條件下飼養(yǎng)2周，適應(yīng)環(huán)境后隨機分為6組，分別為空白對照組、模型對照組、陽性藥對照組、五藤痛風(fēng)飲高劑量、五藤痛風(fēng)飲中劑量、五藤痛風(fēng)飲低劑量。模型制備：除空白對照組外，每天各組大鼠喂特制的酵母飼料，同時上午定點按10mL/kg的劑量灌胃，即腺嘌呤和治療藥各2mL各一次，連續(xù)給藥7d。于第5天除空白組外其余各組大鼠按照國外Coderre等經(jīng)典方法[1-5]略作改進造模，即給藥后30分鐘，立即以乙醇消毒局部，選大鼠右踝關(guān)節(jié)外側(cè)后方為穿刺點，針口斜面朝前方向與脛骨成45度夾角刺入踝關(guān)節(jié)腔，以6號針頭向關(guān)節(jié)腔一次性注入25mg/ mLMSU溶液0.2mL，以關(guān)節(jié)囊對側(cè)膨起為注入標(biāo)準(zhǔn)。第7天給藥后30分鐘后，10%水合氯醛麻醉，頸動脈取血，脫頸處死大鼠后取肝臟、腎臟和踝關(guān)節(jié)滑膜組織，制備血清和組織勻漿-70℃保存待測[6]。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析：用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。所有計量資料用（）表示。多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗。

2 實驗結(jié)果

2.1 對血清中白介素-1β（IL-1β）的影響

由表1可見，模型對照組IL-1β的水平明顯高于空白對照組，具有極顯著差異（P＜0.01），說明造模成功。五藤痛風(fēng)飲高、中、低劑量組和陽性對照組IL-1β的水平均低于模型對照組。其中，陽性對照組和高劑量組具有極顯著性差異（P＜0.01），說明兩組均有明顯抑制炎癥因子IL-1β的分泌。中劑量組與模型對照組比較有顯著性差異（P＜0.05），但沒有高劑量組效果明顯。

2.2 對血清中一氧化氮（NO）的影響

由表1可見，模型對照組NO的水平也明顯高于空白對照組，具有極顯著差異（P＜0.01），說明造模成功。五藤痛風(fēng)飲高、中、低劑量組和陽性對照組NO的水平均低于模型對照組。其中，陽性對照組和高劑量組具有極顯著性差異（P＜0.01），說明兩組均有明顯降低NO的含量。中劑量組與模型對照組比較有顯著性差異（P＜0.05），但沒有高劑量組效果明顯。

3 討 論

痛風(fēng)又稱“高尿酸血癥”，是由于嘌呤代謝紊亂或尿酸排泄障礙所致的代謝性疾病。主要表現(xiàn)為急性關(guān)節(jié)炎反復(fù)發(fā)作、痛風(fēng)石形成和關(guān)節(jié)畸形，嚴(yán)重者可導(dǎo)致骨關(guān)節(jié)病變和關(guān)節(jié)活動障礙與畸形，以及在病程后其出現(xiàn)腎尿酸結(jié)石和痛風(fēng)性腎實質(zhì)病變[7-8]。目前有些報道已經(jīng)證實，急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎因子是MSUC，當(dāng)MSUC沉積到關(guān)節(jié)周圍時，可誘使炎癥細胞聚集到其周圍發(fā)生吞噬反應(yīng)，且吞噬細胞破裂釋放出多種致炎因子，如白介素-1、白介素-6、白介素-8、NO、TNF-α、LTB4等[9]?？焖俳档突蛞种七@些因子的分泌，使炎癥得到緩解，從而有效的治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎這一疾病。本實驗所用的五藤痛風(fēng)飲是臨床常用方，具有利水滲濕、祛風(fēng)通絡(luò)、清熱解毒、消腫止痛指之功。為進一步闡明五藤痛風(fēng)飲抗炎的藥理作用，本實驗研究了其對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的影響。實驗結(jié)果表明，五藤痛風(fēng)飲有抑制急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠血液中細胞因子IL-1β、NO的分泌和局部血管擴張，從而降低炎性反應(yīng)保護關(guān)節(jié)[10]，為臨床提供參考依據(jù)。見表1。

[1] CoderreTJ,Wall PD.Ankle joint urate arthritis in rat:analternativeanimal model of arthritis to that produced by freund sadjuvant. [J] Pain,1987,28(3):379.

表1 五藤痛風(fēng)飲對痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清NO、IL-1β的影響（n=10，）

表1 五藤痛風(fēng)飲對痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清NO、IL-1β的影響（n=10，）

注：與正常組比較P＜0.05為顯著性差異，用Δ表示，P＜0.01為極顯著性差異，用ΔΔ表示；與模型組比較P＜0.05為顯著性差異，用*表示，P＜0.01為極顯著性差異，用**表示

組別數(shù)量(n) 劑量IL-1β(pg/mL)NO(umol/l)空白對照組10—51.33±13.888.66±2.28模型對照組10—101.32±18.78ΔΔ13.67±2.88ΔΔ五藤痛風(fēng)飲高劑量107.2g/mL70.79±17.54**10.09±1.35**五藤痛風(fēng)飲中劑量103.6g/mL81.74±18.37*11.22±1.46*五藤痛風(fēng)飲低劑量101.8g/mL90.56±15.4712.27±1.95陽性對照組100.03mg/mL68.32±16.90**9.65±1.92**

[2] Coderre TJ,Wall PD.Ankle joint arthritis in rats:provide ausefull tool for the evaluation of analgesis and anti-arthritisagents[J]. Pharm Biochern Be-hav,1988,29(3):461.

[3] 黃尉霞.藥物對痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型IL-1、IL-6的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志,2002,3(6):359.

[4] 許延文.痹清膠囊抗痛風(fēng)作用的實驗研究[D].哈爾濱:黑龍江中醫(yī)藥大學(xué),2005.

[5] 趙樑.中藥治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的實驗研究[D].廣州:廣東中醫(yī)藥大學(xué),2002.

[6] 周敏,董娜,韓玉生,等.痹清膠囊對大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎白細胞介素12及誘導(dǎo)型環(huán)氧化酶表達的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2008,(11):53-55.

[7] 陳心智,黃曉巍,歐喜燕.痛風(fēng)安膠囊對高尿酸血癥大鼠血尿酸水平影響的實驗研究[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2007,23(2):8-9.

[8] 王德軍,梁華.針刀治療痛風(fēng)石對血尿酸指標(biāo)影響的臨床研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報,2010,38(3):110-111.

[9] 黃敬群,孫文娟,王四旺,等..尿酸鈉致急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠與槲皮素的抗炎作用[J].中國組織工程研究,,2012,16(15):2815-2819..

[10] 周敏,萬麗鶴,溫薇.痹清膠囊抗尿酸鈉誘導(dǎo)大鼠足腫脹的急性關(guān)節(jié)炎的研究[J]中醫(yī)藥信息,2008,25(1):73-75.

R593.22

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1671-8194（2013）22-0086-02

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