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    糞便抗原檢測(cè)診斷幽門(mén)螺桿菌感染的檢驗(yàn)學(xué)研究

    2013-06-28 17:17:49劉甲辰劉曉華鮑連勇
    中國(guó)醫(yī)藥指南 2013年10期
    關(guān)鍵詞:螺桿菌幽門(mén)尿素

    劉甲辰 劉曉華 金 哲 鮑連勇

    (中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼陽(yáng)中心醫(yī)院檢驗(yàn)科,遼寧 遼陽(yáng) 111000)

    糞便抗原檢測(cè)診斷幽門(mén)螺桿菌感染的檢驗(yàn)學(xué)研究

    劉甲辰 劉曉華 金 哲 鮑連勇

    (中國(guó)醫(yī)科大學(xué)遼陽(yáng)中心醫(yī)院檢驗(yàn)科,遼寧 遼陽(yáng) 111000)

    目的 評(píng)價(jià)幽門(mén)螺桿菌糞便抗原(幽門(mén)螺桿菌 SA)檢測(cè)診斷幽門(mén)螺桿(幽門(mén)螺桿菌)感染的可靠性。方法 采用 ELISA 法檢測(cè) 116例因上消化道癥狀接受胃鏡檢查患者的幽門(mén)螺桿菌 SA,以快速尿素酶試驗(yàn)、14C-尿素呼氣試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)作為診斷幽門(mén)螺桿菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”。結(jié)果 “金標(biāo)準(zhǔn)”診斷幽門(mén)螺桿菌感染:陽(yáng)性 78 例,陰性 38 例,“金標(biāo)準(zhǔn)”陽(yáng)性 78 例中,幽門(mén)螺桿菌 SA 檢測(cè)陽(yáng)性為 74 例,陰性為 4 例;“金標(biāo)準(zhǔn)”陰性 38 例中,幽門(mén)螺桿菌 SA 檢測(cè)陰性為 36 例,陽(yáng)性為 2 例。幽門(mén)螺桿菌 SA 檢測(cè)診斷幽門(mén)螺桿菌感染的敏感性94.9%(74/78),特異性 94.7(36/38),準(zhǔn)確性 94.8%(110/176),陽(yáng)性預(yù)測(cè)值 97.4%(74/76),陰性預(yù)測(cè)值 90.0%(36/40)。結(jié)論 幽門(mén)螺桿菌SA檢測(cè)有較高的敏感性和特異性,是一種簡(jiǎn)便可靠、非侵入性的診斷幽門(mén)螺桿菌感染的方法。

    糞便抗原;螺桿菌;幽門(mén);診斷

    幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter Pylori,HP)感染是慢性胃炎和消化性潰瘍的主要原因,也是胃腫瘤發(fā)生的高危因素[1-3]?,F(xiàn)階段,檢測(cè)幽門(mén)螺桿菌的方式包括侵入性及非侵入性?xún)煞N,侵入式要采用胃鏡進(jìn)行檢查,獲得胃粘膜活檢標(biāo)本后開(kāi)展包括尿素酶試驗(yàn)、組織染色及培養(yǎng)檢查等檢驗(yàn),非侵入式則包括13C、14C-尿素呼氣試驗(yàn)(14C-UBT)、15N尿素排泄試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)學(xué)。然而,上述方式 都 存 在 其 優(yōu) 劣 勢(shì)[4-5]。 最近幾年,西方有研究顯示,有一種新型的非侵入性檢查方式,即檢測(cè)幽門(mén)螺桿菌糞便抗原(幽門(mén)螺桿菌 stool antigen,幽門(mén)螺桿菌SA)[6-7],本研究以快速尿素酶試驗(yàn)、14C-尿素呼氣試驗(yàn)作為診斷幽門(mén)螺桿菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”,旨在評(píng)價(jià)該方法診斷幽門(mén)螺桿菌 感染的可靠性。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選取116例患者,其皆為由于出現(xiàn)各類(lèi)上消化系癥狀,并接受胃鏡檢查者。其中60例為男性,56例為女性,年齡為17~66歲,平均年齡(42.8±4.1)歲。排除以下情況者:30d內(nèi)服用過(guò)抗生素者,采用質(zhì)子泵抑制劑,使用過(guò)H2受體阻滯劑及鉍劑等對(duì)幽門(mén)螺桿菌造成影響者,胃部分切除術(shù)患者。

    1.2 方法

    上述患者都在空腹?fàn)顟B(tài)下,在使用胃鏡檢查中,選擇胃竇部活檢1塊胃粘膜作快速尿素酶試驗(yàn),同時(shí)行14C-UBT 和 幽門(mén)螺桿菌SA檢查。

    1.2.1 幽門(mén)螺桿菌診斷標(biāo)準(zhǔn)

    快速尿素酶試驗(yàn)及14C-尿素呼氣試驗(yàn),上述兩種檢查都為陽(yáng)性是診斷幽門(mén)螺桿菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”,若兩種試驗(yàn)結(jié)果都是陰性則可診斷為幽門(mén)螺桿菌陰性。

    1.2.2 幽門(mén)螺桿菌糞便抗原檢查

    用無(wú)菌瓶采集樣本,對(duì)患者當(dāng)天早晨的糞便樣本進(jìn)行內(nèi)鏡檢驗(yàn),放在零下20℃的冰箱內(nèi)備用。檢測(cè)試劑盒為上海鑫樂(lè)生物有限公司生產(chǎn),使用ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)雙抗體夾心法進(jìn)行檢測(cè),根據(jù)試劑盒操作步驟進(jìn)行操作。具體操作流程為:挑取約100mg糞便置入0.4mL稀釋液中進(jìn)行稀釋?zhuān)睾匣旌虾笳鹗?0s,制成稀釋標(biāo)本。取0.1mL稀釋液、陽(yáng)性/陰性對(duì)照物放在板孔內(nèi),向孔內(nèi)加入0.1mL酶標(biāo)抗體,在室溫環(huán)境中防止1h,將板沖洗干凈,再向每孔內(nèi)滴入0.1mL底物溶液,在室溫環(huán)境內(nèi)防止10min,直至陽(yáng)性對(duì)照孔變?yōu)樗{(lán)色,滴入2滴終止液,并在15min內(nèi),采用酶聯(lián)免疫儀,讀取波長(zhǎng)450mm處待測(cè)樣本的吸光度(OD)。結(jié)果評(píng)判:若OD高于0.120則為陽(yáng)性,若OD超過(guò)0.10單不足≤0.120則是可疑,若OD不足0.10則為陰性。

    1.2.3 14C-UBT

    在胃鏡檢查后,立即口服一粒含37Kpq ( lu-Ci)14C-尿素膠囊(解放軍第二醫(yī)藥大學(xué)),患者靜坐0.5h后采用導(dǎo)管吹氣進(jìn)含二氧化碳吸收劑的液閃瓶,直至吸收劑顏色從紅色變成無(wú)色,停止吹氣,往閃瓶例加進(jìn)4.5mL的稀釋閃爍液,在液體閃爍計(jì)數(shù)儀(貝克曼庫(kù)爾特商貿(mào)(中國(guó))有限公司)上檢測(cè),獲取DPM(每分鐘的衰變數(shù)),DPM≥200為陽(yáng)性,100≤DPM≤199為可疑陽(yáng)性,DPM<100為陰性。

    1.2.4 快速尿素酶試驗(yàn)(RUT)

    在胃鏡檢查過(guò)程中,在胃竇離幽門(mén)40mm左右處取一塊活檢組織,置入一分鐘尿素酶檢測(cè)試劑(東樂(lè)自然基因生命科學(xué)公司)瓶?jī)?nèi),經(jīng)5min,若組織塊周邊的液體呈紅色則是陽(yáng)性,否則是陰性。

    1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理

    檢驗(yàn)“金標(biāo)準(zhǔn)”是快速尿素酶試驗(yàn)及14C-尿素呼氣試驗(yàn)結(jié)果,根據(jù)診斷試驗(yàn)的相關(guān)評(píng)價(jià)方式,使用四格表進(jìn)行分析,得出特異性、敏感性、準(zhǔn)確性、陽(yáng)性/陰性預(yù)測(cè)值。

    2 結(jié) 果

    在116例患者中,參考診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”對(duì)幽門(mén)螺桿菌感染進(jìn)行分析。結(jié)果為:78例患者為陽(yáng)性,38例患者為陰性。“金標(biāo)準(zhǔn)”顯示的78例為陽(yáng)性患者內(nèi),有74例患者的幽門(mén)螺桿菌SA檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,另4例為陰性;“金標(biāo)準(zhǔn)”顯示的38例陰性患者內(nèi),36例為幽門(mén)螺桿菌SA檢測(cè)結(jié)果為陰性,另2例為陽(yáng)性。詳見(jiàn)表1。和“金標(biāo)準(zhǔn)”檢測(cè)結(jié)果相比,幽門(mén)螺桿菌SA診斷幽門(mén)螺桿菌感染的敏感性為94.87%(74/78),特異性為94.74%(18/19),準(zhǔn)確性為94.83%(110/116),陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為97.37%(74/76),陰性檢驗(yàn)的預(yù)測(cè)值為90.00%(36/40)。

    表1 幽門(mén)螺桿菌SA檢測(cè)與金標(biāo)準(zhǔn)檢查結(jié)果比較(例)

    3 討 論

    隨著幽門(mén)螺桿菌感染與胃腸道疾病之間的研究的不斷深入,檢測(cè)幽門(mén)螺桿菌感染的方法在臨床上應(yīng)用也日益普遍。RUT法目前作為單獨(dú)的臨床診斷方法,具有較高的準(zhǔn)確性,然而,活檢標(biāo)本內(nèi)的細(xì)菌密度決定了該反應(yīng)的結(jié)果,而“灶性”分布也對(duì)取材有著重要的影響;若患者最近使用國(guó)抗幽門(mén)螺桿菌藥物,則其陽(yáng)性率會(huì)顯著降低,其假陰性率明顯提高[8]。由于該方法需通過(guò)胃鏡檢查,因此有一定創(chuàng)傷性,且操作較繁瑣,患者的依從性差,且極易導(dǎo)致交叉感染,從而大大增加了對(duì)幽門(mén)螺桿菌根治及隨訪的難度。作為一種重要的非侵入性檢測(cè)方式,有研究已證實(shí)尿素呼氣試驗(yàn)的敏感性及特異性較高,并可以反映幽門(mén)螺桿菌的活動(dòng)性感染,在判斷根治幽門(mén)螺桿菌的效果中具有積極的價(jià)值。然而,14C-尿素呼氣試驗(yàn)有著一定的放射性,從而受限其應(yīng)用范圍;13C-尿素呼氣試驗(yàn)沒(méi)有放射性,然而價(jià)格較高,且另需的紅外能譜儀和氣體質(zhì)譜儀,其價(jià)格也相當(dāng)高,從而大大限制了其基層醫(yī)療單位的應(yīng)用。近年來(lái),一種新的非侵入性檢查方法——幽門(mén)螺桿菌SA,就是采用純化免抗人多克隆抗體、酶標(biāo)抗體雙抗體夾心酶免疫對(duì)幽門(mén)螺桿菌SA進(jìn)行測(cè)定的方式,該法的檢測(cè)原理是,當(dāng)胃粘膜的上皮細(xì)胞更新脫落時(shí),在其表面定植的幽門(mén)螺桿菌也會(huì)隨糞便被排出,采用ELISA法對(duì)糞便內(nèi)的幽門(mén)螺桿菌SA進(jìn)行檢測(cè)。筆者應(yīng)用此方法檢測(cè)了116例患者幽門(mén)螺桿菌SA,與“金標(biāo)準(zhǔn)”比較,初步發(fā)現(xiàn)此法具有較高的敏感性(94.9%)、特異性(94.7%)、準(zhǔn)確性(94.8%),與國(guó)外報(bào)道基本一致[9-10]。所以,若只是了確定當(dāng)前胃內(nèi)是否存在幽門(mén)螺桿菌感染,對(duì)抗幽門(mén)螺桿菌藥物的效果和抗幽門(mén)螺桿菌治療后復(fù)發(fā)、再感染情況進(jìn)行觀察,對(duì)幽門(mén)螺桿菌SA進(jìn)行檢測(cè)是一種較為理想的方法。另外,幽門(mén)螺桿菌SA檢測(cè)與其他幽門(mén)螺桿菌檢測(cè)方法相比,還有著簡(jiǎn)便、價(jià)廉、可靠、安全等優(yōu)點(diǎn);同時(shí)標(biāo)本來(lái)源方便,特別適合于兒童、孕婦、老人及其他不宜做胃鏡檢查的患者;且其試劑抗干擾能力強(qiáng),不受糞便中其他細(xì)菌、病毒的干擾,故該方法適合在基層醫(yī)院推廣使用。

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    R446.13

    :B

    :1671-8194(2013)10-0092-02

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