HPLC法測定消渴平片中鹽酸小檗堿的含量

梁玉香 洪巖斌 賀 玲

（1 遼寧富東制藥有限公司，遼寧 本溪 117004；2 沈陽三電有限公司，遼寧 沈陽 110045）

HPLC法測定消渴平片中鹽酸小檗堿的含量

梁玉香1洪巖斌2賀 玲1

（1 遼寧富東制藥有限公司，遼寧 本溪 117004；2 沈陽三電有限公司，遼寧 沈陽 110045）

目的 建立消渴平片的含量測定方法。方法 樣品經(jīng)處理后用 HPLC 法，選擇 265nm 作為檢測波長。結(jié)果 回收率 RSD=1.30%，重復(fù)性 RSD=1.50%，精密度 RSD=1.51%。結(jié)論 HPLC 法測定消渴平片含量的方法準(zhǔn)確、可靠，可作為其質(zhì)量控制方法。

高效液相；消渴平片；鹽酸小檗堿；含量測定

1 實驗材料

1.1 儀器

LC-10UV檢測器、LC-10P液相泵（大連江申分離科學(xué)技術(shù)公司）流動相：以乙腈-0.1%磷酸的溶液（每100mL加十二烷基磺酸鈉0.1g）比例（48∶52）；流速：1mL/min；檢測波長為265nm。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿的峰面積計算應(yīng)不低于4000。

1.2 試藥

乙腈為色譜純（天津市四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司），甲醇、鹽酸、十二烷基磺酸鈉、磷酸為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 綠原酸測定波長的選擇吸取鹽酸小檗堿對照品溶液（含量為1mg/ mL）50μL，在UV-260紫外分光光度計上于400～200nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果表明：鹽酸小檗堿對照品稀釋溶液在265nm的附近均有強吸收峰。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性的試驗。用十八烷基硅烷鍵合硅膠做為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸的溶液（每100mL加十二烷基磺酸鈉0.1 g）比例（48∶52）；流速：1mL/min；檢測波長為265nm。理論板數(shù)以鹽酸小檗堿的峰面積計算應(yīng)不低于4000。

2.3 對照品溶液制備。用十萬分之一的天平秤取鹽酸小檗堿的對照品適量，精密稱定，加甲醇配制成每1mL約含10μg的溶液，搖勻，即得。

2.4 供試品溶液的制備。取消渴平片重量差異項下20片，研細，取約0.3 g，精密稱定，放置在具塞錐形瓶中，精密量取鹽酸-甲醇（1∶100）50mL，將具塞瓶密塞，稱定重量，置60℃水浴中加熱15min后，取出，超聲處理（功率為250W，頻率為40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用鹽酸-甲醇（1∶100）補足減失的重量，搖勻，濾過。

2.5 對照品重復(fù)性試驗精密吸取鹽酸小檗堿對照品稀釋溶液（0.01mg/ mL）5μL，注入液相色譜儀中，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，其實驗結(jié)果表明：對照品精密度實驗良好，RSD1.30%。

2.6 空白試驗按消渴平片處方比例取各藥材（除去黃連），按消渴平片制備工藝制成陰性對照品，再按“含量測定”項下試驗，制備成陰性對照溶液。同時將陰性對照溶液、供試品溶液及對照品溶液各5μL，分別注入大連江申液相色譜儀中，測定結(jié)果表明，陰性對照溶液的圖譜在綠原酸色譜峰保留時間處無其它色譜峰干擾。

2.7 穩(wěn)定性試驗取本品20片，用乳缽研成細粉，取0.3g，用萬分之一天平精密稱定，按“含量測定”項下的供試液制備方法試驗，分別在放置了0、4、8、12和24h時，吸取供試液5μL，分別注入大連江申液相色譜儀中，測定鹽酸小檗堿色譜峰峰面積，計算。結(jié)果表明，供試液放置24h，鹽酸小檗堿含量基本穩(wěn)定，RSD1.50%。

2.8 精密度試驗取樣品20片，稱定重量，研成細粉，取0.3g，精密稱定，按“含量測定”項下的供試液制備方法試驗，精密吸取供試液5μL，共計6份，分別注入江申液相色譜儀中，測定鹽酸小檗堿峰面積。結(jié)果可知，本測定方法，供試品溶液鹽酸小檗堿精密度良好。RSD為1.51%。

2.9 回收率實驗取樣品20片，稱定重量，研細，約取0.2g，精密稱定，共計六份，分別精密加入5μg/mL的鹽酸小檗堿對照品的溶液各1.0mL，按照“含量測定”項下試驗，測定并計算加標(biāo)樣品中綠原酸，得出本次試驗含量測定方法下綠原酸的回收率。結(jié)果顯示，本方法回收率良好。RSD為1.28%。

2.10 樣品的含量測定取不同批號的消渴平各20片，稱定重量，研細，取約0.3g，精密稱定，按“含量測定”項下供試液制備的方法試驗，測定并計算鹽酸小檗堿含量，其結(jié)果見表1。

表1 樣品含量

3 小 結(jié)

①檢測波長的選擇：本實驗采用UV-260紫外分光光度計對含有鹽酸小檗堿對照品溶液在400-200 nm波長范圍內(nèi)進行掃描，結(jié)果顯示在265 nm波長處有強吸收峰，因此，選定265nm做為檢測波長。流動相的選擇：曾試用過甲醇-磷酸二氫鉀的溶液（0.05 mol/L）（25∶75），乙腈-磷酸二氫鉀的溶液（0.05 mol/L）（35∶65），它們的分離效果與保留時間均不夠理想，發(fā)現(xiàn)以乙腈-0.1%磷酸溶液（每100mL加十二烷基磺酸鈉0.1g）（48∶52）時，分離效果良好，故確定以上色譜條件為含量測定條件。②本方法中，消渴平片溶液中的鹽酸小檗堿與雜質(zhì)得到了良好的分離，實驗結(jié)果充分的滿足了藥典規(guī)定的方法及系統(tǒng)適應(yīng)性要求。③本方法準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，可見高效液相色譜系統(tǒng)完全能夠達到中國藥典（2010版）當(dāng)中對消渴平片中鹽酸小檗堿含量的測試要求。④結(jié)果顯示，本廠所生產(chǎn)的消渴平片樣品中鹽酸小檗堿含量0.60%，滿足藥典要求的不低于0.50%的含量。

[1]毛 春芹,謝輝,池 玉梅,等.高 效 液相色譜 法測定 巖黃 連 藥材中3種生物堿[J].中成藥,2011,33(8):1368-1370.

[2]高 效 液相色譜 法測定 雙黃 消炎 片中鹽酸 小 檗堿含 量[A].第九 屆全國中藥和天然藥物學(xué)術(shù)研討會大會報告及論文集[C].2007.

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R927.2

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：1671-8194（2013）10-0078-02