AP-2γ在胃癌中表達(dá)的臨床病理意義

王 玹張 翔倪 斌朱宏輝趙 帥蘇 波蘇 琦*（ 長(zhǎng)沙市第三醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙43000； 南華大學(xué)腫瘤研究所，湖南省高校腫瘤細(xì)胞與分子病理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 衡陽(yáng) 400）

AP-2γ在胃癌中表達(dá)的臨床病理意義

王 玹1，2張 翔2倪 斌1朱宏輝1趙 帥1蘇 波2蘇 琦2*（1 長(zhǎng)沙市第三醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙430100；2 南華大學(xué)腫瘤研究所，湖南省高校腫瘤細(xì)胞與分子病理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 衡陽(yáng) 421001）

目的 研究 AP-2γ 表達(dá)與胃癌發(fā)生、分化程度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期的關(guān)系。方法 將 81 例胃癌、胃黏膜癌前病變 26 例及正常胃黏膜組織 34 制成組織芯片，采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)胃癌、癌前病變及正常組織中 AP-2γ 表達(dá)。結(jié)果 AP-2γ 表達(dá)在胃癌 76.54% 與癌前病變 69.23% 明顯高于正常胃黏膜 35.29%(P＜0.05)。癌前病變低于胃癌 (P＜0.05)。高分化腺癌 AP-2γ 表達(dá)率 40.00% 明顯低于中分化 70.59% 與低分化腺癌 81.36% (P＜0.05)。而低分化腺癌顯著高于中分化腺癌 (P＜0.05)?！?3.0cm 表達(dá) 59.38% 低于 ＞3.0cm的 87.76%(P＜0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 83.64% 明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移 61.54%(P＜0.05)。Ⅰ + Ⅱ期表達(dá) 59.38% 明顯低于Ⅲ + Ⅳ期 87.76%(P＜0.05)。結(jié)論 AP-2γ 在胃癌高表達(dá)與胃癌的發(fā)生、腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期密切相關(guān)，其可能是胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的重要標(biāo)記。

胃癌；AP-2γ；組織芯片；免疫組織化學(xué)

胃癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。據(jù)2008年統(tǒng)計(jì)，約100萬(wàn)新發(fā)病例與74萬(wàn)死亡病例，分別占所有腫瘤新發(fā)病例與死亡病例的8%與10%。東亞、東歐與南美地區(qū)發(fā)生率最高，70%新發(fā)與死亡病例發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家[1]。胃癌傳統(tǒng)治療方法是外科手術(shù)切除、化療及放療，由于患者就診時(shí)大多已經(jīng)發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移，從而療效差。因此，研究胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，尋找其關(guān)鍵標(biāo)記，為早期診斷、預(yù)后判斷及靶向干預(yù)治療具有十分重要的臨床意義。

近年來(lái)，AP-2γ在腫瘤細(xì)胞遷移侵襲中的作用引起了廣泛關(guān)注[2]。研究表明，AP-2γ蛋白在乳腺癌、卵巢癌、生殖細(xì)胞瘤、前列腺癌等腫瘤組織中高表達(dá)[3-6]。目前，尚未見(jiàn)胃癌的報(bào)告。本研究采用自制組織芯片檢測(cè)AP-2γ在胃癌中的表達(dá)，并探討其臨床病理意義。

1 材料與方法

1.1 材料

組織芯片收集南華大學(xué)附屬醫(yī)院與長(zhǎng)沙市三醫(yī)院2010至2012年間胃癌手術(shù)切除標(biāo)本81例，全部病例均經(jīng)HE切片復(fù)讀確認(rèn)，其中，男性56例，女性25例；腫塊體積32例≤3.0cm，49例＞3.0cm；高分化腺癌5例，中分化腺癌17例，低分化癌59例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移55例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例。TNM分期Ⅰ+Ⅱ期32例，Ⅲ+Ⅳ期49例。另外，癌前病變（腸化與非典型增生）26例，正常胃黏膜34例。

1.2 組織芯片制作

組織芯片儀及其2mm組織穿刺針均為Beecher Instruments產(chǎn)品。制作主要步驟如下：①模塊制備：石蠟與蜂蠟（上海華靈）混合為7:3，制成2.2cm×3.5cm×1cm受體蠟塊，設(shè)計(jì)5×10點(diǎn)組織列陣，用組織芯片儀打孔制成帶孔空白蠟塊。②組織芯片制備：將組織蠟塊放在39～42℃水浴中軟化3min，選定病變部位，逐個(gè)取出寬2mm，高3mm的組織柱，隨即推入預(yù)先設(shè)計(jì)的空白蠟塊的相應(yīng)孔內(nèi)，排布成組織芯片，將組織芯片面朝下放在玻片上，于37℃放置30min，輕壓玻片使組織柱在模塊中排平。

1.3 免疫組化染色

AP-2γ單克隆抗體（sc-12762）購(gòu)自Santa Cruz Biotechnology，SP試劑盒、DAB顯色劑、0.1M PBS、0.01M檸檬酸鹽抗原修復(fù)液、EDTA修復(fù)液均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)公司，按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。結(jié)果判定：AP-2γ陽(yáng)性表達(dá)為棕黃或棕褐色，定位于胞漿或胞核。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞染色程度及著色細(xì)胞百分率進(jìn)行記分：0分不著色，1分淺棕色，2分深棕色；著色細(xì)胞＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，＞50%為3分。兩種分值相加，1分為（-），2分為弱陽(yáng)性（+），3分為陽(yáng)性（++）；＞4分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分析，不同組間的比較采用χ2檢驗(yàn)，組間等級(jí)資料采用行×列表χ2檢驗(yàn)，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 組織芯片制備結(jié)果

本研究制作5×10組織芯片蠟塊3個(gè)，每個(gè)均以規(guī)則的點(diǎn)陣方式植入相同直徑的組織樣本，組織點(diǎn)陣排列整齊，組織位點(diǎn)的形態(tài)可觀測(cè)率為97.21%。

2.2 AP-2γ在胃癌中表達(dá)

圖1與表1顯示，AP-2γ分別在胃癌與癌前病變表達(dá)76.54%與69.23%明顯高于正常胃黏膜35.29%（P＜0.05）。癌前病變低于胃癌（P＜0.05）。且正常胃黏膜僅在胞漿表達(dá)弱陽(yáng)性，癌前病變可見(jiàn)胞漿與胞核表達(dá)，而胃癌不僅在胞漿高表達(dá)，而且在胞核表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性。提示AP-2γ表達(dá)與胃癌發(fā)生密切相關(guān)。

圖1 組織芯片檢測(cè)AP-2γ在胃癌中表達(dá) SP × 20A：正常胃黏膜；B：腸化；C：高分化腺癌；D：中分化腺癌；E：低分化腺癌；F：黏液癌

2.3 AP-2γ蛋白表達(dá)與胃癌分化程度的關(guān)系

圖1與表1顯示，高分化腺癌AP-2γ表達(dá)率40%明顯低于中分化70.59%與低分化腺癌81.36%（P＜0.05）。而低分化腺癌顯著高于中分化腺癌（P＜0.05）。并且，隨著分化程度越低，AP-2γ不僅胞漿高表達(dá)，而且核內(nèi)陽(yáng)性更顯著。表明AP-2γ表達(dá)與胃癌分化程度有關(guān)。

表1 AP-2γ在胃癌表達(dá)與病理臨床的關(guān)系

2.4 AP-2γ與胃癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

表1所示，男性與女性胃癌患者AP-2γ表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。腫瘤體積≤3.0cm明顯低于＞3.0cm（P＜0.05）。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P＜0.05）。Ⅰ+Ⅱ期明顯低于Ⅲ+Ⅳ期（P＜0.05）。表明AP-2γ表達(dá)與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)。

3 討 論

AP-2γ是轉(zhuǎn)錄因子AP-2家族成員之一，其通過(guò)控制基因轉(zhuǎn)錄，在腫瘤發(fā)生中調(diào)節(jié)有關(guān)的基因參與細(xì)胞增殖，細(xì)胞周期調(diào)控，細(xì)胞黏附和侵襲，從而發(fā)揮重要生物功能[2]。

研究顯示，AP-2γ高表達(dá)可促進(jìn)乳腺癌增殖，沉默AP-2γ 可發(fā)生p21基因部位獲得活性染色質(zhì)構(gòu)象與基因表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致p21蛋白表達(dá)增加和G1/S阻滯[3]。雌激素受體α（ERα）在乳腺癌進(jìn)展起著關(guān)鍵作用。全基因組分析顯示，大量的AP-2γ與ERα結(jié)合共同集中在整個(gè)基因組。AP-2γ以配體不依賴的方式結(jié)合ERα結(jié)合位點(diǎn)ERBS，而干擾AP-2γ表達(dá)可抑制結(jié)合ERα DNA，大范圍的染色質(zhì)相互作用以及基因轉(zhuǎn)錄。表明AP-2γ以不依賴的方式結(jié)合ERBS與乳腺癌發(fā)生有關(guān)，其是一種新的ERα介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄的協(xié)同因子[7]。Allouche等證明，RNA干擾乳腺癌BT-474細(xì)胞AP-2γ可抑制內(nèi)源性ERBB2 mRNA與蛋白表達(dá)水平[8]。Ku蛋白與AP-2γ相互作用可促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞ERBB2 mRNA和蛋白水平增加[9]。采用ChIP、序列分析、報(bào)告基因檢測(cè)、實(shí)時(shí)定量PCR、電泳凝膠遷移實(shí)驗(yàn)和免疫印跡等方法從乳腺癌MDAMB-453細(xì)胞的基因組獲得鄰近AP-2γ與乳腺癌癌發(fā)生相關(guān)的HER-2、CDH2、HPSE和IGSF11靶基因。AP-2γ表達(dá)的增多或減少都會(huì)顯著影響這些靶基因的表達(dá)。因此，AP-2γ可作為治療乳腺癌靶點(diǎn)[10]。

Qin等發(fā)現(xiàn)，AP-2γ在前列腺癌細(xì)胞中高表達(dá)，并與ErbB2啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，可激活雄激素受體活性和限制雄激素濃度的前列腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的介導(dǎo)因子ERBB2基因轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)及前列腺特異性抗原分泌[4]。Biermann等免疫組化檢測(cè)2例松果體生殖細(xì)胞瘤、28例轉(zhuǎn)移性生殖細(xì)胞瘤和10例睪丸生殖細(xì)胞瘤表明，AP-2γ是精原細(xì)胞瘤轉(zhuǎn)移或原發(fā)性性腺外精原細(xì)胞瘤最好的標(biāo)記[11]。Hoei-Hansen等檢測(cè)209例睪丸生殖細(xì)胞瘤發(fā)現(xiàn)，50%睪丸原位癌和33.9%生殖細(xì)胞瘤表達(dá)AP-2γ[12]。

基因剔除小鼠模型顯示，AP-2γ對(duì)胚外細(xì)胞向滋養(yǎng)層細(xì)胞系分化的作用是重要的，表明AP-2γ是能使未分化前體或瞬時(shí)擴(kuò)增細(xì)胞的增殖的分子，在腫瘤中的重新表達(dá)與去分化和進(jìn)展相關(guān)[13]。Salonen等發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)卵巢無(wú)性細(xì)胞瘤與生殖細(xì)胞瘤AP-2γ高表達(dá)，而卵黃囊瘤和未成熟畸胎瘤大多數(shù)則沒(méi)有發(fā)現(xiàn)，并且，AP-2γ高表達(dá)卵巢生殖細(xì)胞腫瘤預(yù)后較差。因此，AP-2γ可以作為惡性卵巢生殖細(xì)胞腫瘤輔助診斷依據(jù)[5]。?degaard等采用免疫組化檢測(cè)13例正常卵巢組織，75例交界瘤，22例I期卵巢癌和306例II-IV期晚期卵巢癌顯示，37%交界瘤，59% I期卵巢癌和83%晚期卵巢癌的腫瘤細(xì)胞核中表達(dá)AP-2γ，良性卵巢組織均表達(dá)陰性，表明AP-2γ表達(dá)與卵巢癌發(fā)生有關(guān)。此外，晚期卵巢癌的實(shí)質(zhì)性病變與滲出物中AP-2γ表達(dá)顯著，特異性局限于滲出物的癌細(xì)胞，提示AP-2γ在腫瘤進(jìn)展中起著重要作用[14]。

本研究結(jié)果顯示，AP-2γ在胃癌表達(dá)明顯高于癌前病變和正常胃黏膜，癌前病變高于正常胃黏膜；隨著分化程度降低表達(dá)越高；≤3.0cm表達(dá)明顯低于＞3.0cm；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移表達(dá)明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；Ⅰ+Ⅱ期表達(dá)明顯低于Ⅲ+Ⅳ期。且正常胃黏膜僅在胞漿表達(dá)弱陽(yáng)性，癌前病變可見(jiàn)胞漿與胞核表達(dá)，而胃癌不僅在胞漿高表達(dá)，而且在胞核表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性。隨著分化程度越低，AP-2γ核內(nèi)陽(yáng)性更顯著。表明AP-2γ表達(dá)與胃癌發(fā)生、分化程度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)，其可能是胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的重要標(biāo)記。

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Expression of AP-2γ in Human Gastric Cancer and its Clinicopathologic Significance

WANG Xuan1,2, ZHANG Xiang2, NI Bin1, ZHU Hong-hui1, ZHAO Shuai1, SU Bo2, SU Qi2*
(1 The Changsha Third Hospital, Changsha 430100, China; 2 Cancer Research Institute, University of South China, Key Laboratory of Cancer Cellulal and Moleculay Pathology of Hunan Provincial University, Hengyang 421001, China)

ObjectiveTo investigate the clinicopathologic significance of AP-2γ expression in human gastric cancer.MethodsThe expression of AP-2γ in gastric cancer, precancerosis and normal tissue was examined by immunohistochemistry.ResultsThe level of expression of AP-2γ in gastric cancer was 76.54%. significantly higher than 69.23%in precancerosis and 35.29% in normal tissue (P＜0.05). AP-2γ expression in well-differentiated was 40% lower than 70.21%in moderately differentiated and 96.67% in poorly differentiated adenocarcinoma, and in moderately differentiated was lower than in poorly differentiated adenocarcinoma, respectively (P＜0.05). The expression of AP-2γ was 59.38% in volume≤3.0cm lower than in ＞3.0cm (P＜0.05). The expression of AP-2γ of lymph node metastasis was 83.64% (46/55) significantly higher than 61.54%in non-lymph node metastasis (P＜0.05). The expression of AP-2γ was 60.98% inⅠ+Ⅱ stage, significantly lower than 87.76% in Ⅲ+Ⅳ(P＜0.05).ConclusionsThe expression of AP-2γ is closely related to carcinogenesis, tumor size, pathological classification, lymph node metastasis and clinical stage in gastric cancer, it suggest that AP-2γ may be a important biomark of invasion and metastasis.

Gastric cancer; AP-2γ; Tissue chip; Immunohisochemistry

R735.2

：B

：1671-8194（2013）09-0001-03

國(guó)家自然科學(xué)基金（31000629）；湖南省衛(wèi)生廳科研項(xiàng)目（B2008-067）

*通訊作者: