乙酰肝素酶在賁門癌中的表達(dá)及與臨床病理的關(guān)系

劉亞紅

（河南省洛陽市洛陽軍分區(qū)衛(wèi)生所，河南 洛陽 471000）

乙酰肝素酶在賁門癌中的表達(dá)及與臨床病理的關(guān)系

劉亞紅

（河南省洛陽市洛陽軍分區(qū)衛(wèi)生所，河南 洛陽 471000）

目的 檢測乙酰肝素酶和低氧誘導(dǎo)因子 1α 在賁門癌中的表達(dá)，分析其與臨床病理的關(guān)系并探討低氧誘導(dǎo)因子 1α 對調(diào)節(jié)乙酰肝素酶的可能機制。方法 用免疫組化分別檢測 48 例賁門癌和 26 例癌旁組織中乙酰肝素酶（SP 法）及低氧誘導(dǎo)因子 1α 蛋白（SABC 法）的表達(dá)，并分析它們與臨床病理因素之間的關(guān)系。結(jié)果 乙酰肝素酶和低氧誘導(dǎo)因子 1α 在 48 例賁門癌中的陽性表達(dá)率分別為 62.5% 和 45.9%，明顯高于相應(yīng)癌旁組織。乙酰肝素酶陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM 分期密切相關(guān)；低氧誘導(dǎo)因子 1α 與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。乙酰肝素酶與低氧誘導(dǎo)因子 1α 有明顯的陽性共表達(dá)率 (P=0.020)。結(jié)論 乙酰肝素酶在賁門癌中表達(dá)增高，低氧誘導(dǎo)因子 1α 可能參與上調(diào)乙酰肝素酶的表達(dá)水平，促進(jìn)乙酰肝素酶介導(dǎo)的賁門癌浸潤及轉(zhuǎn)移。

乙酰肝素酶；賁門癌；臨床病理因素

浸潤和轉(zhuǎn)移是影響惡性腫瘤治愈率的主要因素，惡性腫瘤細(xì)胞侵出基底膜(BM)進(jìn)入細(xì)胞外間質(zhì)(ECM)是轉(zhuǎn)移過程中關(guān)鍵而必須的步驟。研究證實，乙酰肝素酶可破壞BM和ECM的完整性，從而有利于腫瘤細(xì)胞穿越ECM和血管內(nèi)皮，促進(jìn)侵襲和轉(zhuǎn)移的發(fā)生[1,2]。雖然目前對乙酰肝素酶在腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移中的作用有較多了解，但是對于其賁門癌中的表達(dá)以及與臨床病理的關(guān)系研究甚少。同時低氧誘導(dǎo)因子1α在腫瘤的演進(jìn)中扮演重要角色，與浸潤、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，包括加速腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移、促進(jìn)腫瘤血管生成。研究發(fā)現(xiàn)通過抑制低氧誘導(dǎo)因子1α的活化可以促進(jìn)乙酰肝素酶的表達(dá)[3]。但是在賁門癌中低氧誘導(dǎo)因子1α和乙酰肝素酶的關(guān)系仍然需要探討。我們檢測了乙酰肝素酶和低氧誘導(dǎo)因子1α蛋白在賁門癌中的表達(dá)，分析其與臨床病理因素之間的關(guān)系，初步探討低氧誘導(dǎo)因子1α對乙酰肝素酶調(diào)節(jié)的可能機制。

1 材料與方法

1.1 研究對象

河南省洛陽市三甲醫(yī)院于2007至2011年接受手術(shù)治療的賁門癌患者48例，其中女18例、男30例，年齡32～71歲，中位年齡(56±8)歲，所有標(biāo)本術(shù)后經(jīng)病理證實均為腺癌。

1.2 試劑及結(jié)果評估

羊抗兔低氧誘導(dǎo)因子1α抗體和免疫組化試劑盒購于北京中山公司；兔抗山羊乙酰肝素酶多克隆抗體購于GIBCO公司。以正常山羊或者兔血清作為一抗行陰性對照，以已知表達(dá)陽性的乳腺癌、子宮癌組織分別作為低氧誘導(dǎo)因子1α和乙酰肝素酶陽性對照。顯微鏡下觀察陽性細(xì)胞并計數(shù)，根據(jù)所占比例分為：(-)陽性細(xì)胞數(shù)＜10%；(+)介于10%～50%之間；(++) 陽性細(xì)胞數(shù)＞50%。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

所用軟件包為SPSS13.0，統(tǒng)計學(xué)方法采用χ2檢驗和Fisher’S精確概率法，單因素分析用秩和檢驗。P＜0.05為差異有顯著性。

2 結(jié) 果

2.1 乙酰肝素酶和低氧誘導(dǎo)因子1α在賁門癌中的表達(dá)

乙酰肝素酶定位于賁門癌細(xì)胞的胞漿，主要表達(dá)于癌組織的邊緣。位于腫瘤邊緣的癌旁組織也有乙酰肝素酶表達(dá)而正常的賁門上皮無乙酰肝素酶表達(dá)。低氧誘導(dǎo)因子1α主要表達(dá)于細(xì)胞漿，而正常的賁門組織內(nèi)無低氧誘導(dǎo)因子1α表達(dá)。實驗顯示，在賁門癌組織中，乙酰肝素酶表達(dá)率為62.5%(30/48)，癌旁組織為23.0%(6/26)，P＜0.05。低氧誘導(dǎo)因子1α在癌組織中表達(dá)率為45.9%(22/48)，在癌旁組織為19.2%(5/26)，P＜0.05。

2.2 乙酰肝素酶和低氧誘導(dǎo)因子1α表達(dá)與臨床病理的關(guān)系

表1總結(jié)了賁門癌中乙酰肝素酶和低氧誘導(dǎo)因子1α蛋白表達(dá)與臨床病理之間的關(guān)系。乙酰肝素酶表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.003)以及TNM分期密切相關(guān)(P=0.032)。而低氧誘導(dǎo)因子1α表達(dá)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P=0.032)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P=0.018)。二者的表達(dá)均與患者年齡及組織學(xué)分級無顯著性相關(guān)。

表1 乙酰肝素酶和低氧誘導(dǎo)因子1α蛋白的表達(dá)與臨床病理因素之間的關(guān)系

2.3 乙酰肝素酶和低氧誘導(dǎo)因子1α表達(dá)之間的關(guān)系

乙酰肝素酶表達(dá)陽性的患者其低氧誘導(dǎo)因子1α的表達(dá)也高，兩者具有相關(guān)性(P=0.020，表2)。

表2 乙酰肝素酶和低氧誘導(dǎo)因子1α表達(dá)之間的關(guān)系

3 討 論

因缺乏特異性早期癥狀且賁門在解剖方面的特殊位置，賁門癌早期誤診率很高，病死率與發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。其中轉(zhuǎn)移和浸潤是賁門癌患者預(yù)后不良的主要因素。乙酰肝素酶通過降解硫酸乙酰肝素參與血管生成、浸潤及轉(zhuǎn)移等重要過程，而該酶是哺乳動物唯一的能夠降解硫酸乙酰肝素的內(nèi)切糖苷酶，因此，乙酰肝素酶已經(jīng)成為抑制腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移理想的靶點。目前只有關(guān)于乙酰肝素酶與賁門癌關(guān)系的零星研究，且這些研究局限于乙酰肝素酶單個因素，對乙酰肝素酶與賁門癌其他臨床病理因素之間的關(guān)系卻尚無研究。本實驗表明：乙酰肝素酶在正常的賁門組織中沒有表達(dá)，而在48例癌組織中表達(dá)率高達(dá)62.5%，且表達(dá)主要見于腫瘤組織的邊緣，表明乙酰肝素酶對降解基底膜具有重要作用。雖然賁門癌在各個時期均可轉(zhuǎn)移，但是TNM分期越晚，患者的腫瘤就越具有侵襲性，并且乙酰肝素酶的表達(dá)率也增高。因此，高表達(dá)的乙酰肝素酶是胃賁門癌生長、侵襲、轉(zhuǎn)移能力增強的重要因素[4]。

與乙酰肝素酶不同，本資料顯示低氧誘導(dǎo)因子1α與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，且與乙酰肝素酶表達(dá)正相關(guān)。那么低氧誘導(dǎo)因子1α是否能調(diào)節(jié)乙酰肝素酶的表達(dá)呢？腫瘤微環(huán)境，主要是腫瘤組織處于低氧情況下，可以持續(xù)刺激低氧誘導(dǎo)因子1α的活化，引起低氧誘導(dǎo)因子1α下游相關(guān)基因的表達(dá)減弱或增強[5]。如前所述，阻斷低氧誘導(dǎo)因子1α信號傳導(dǎo)通路可以抑制乙酰肝素酶的表達(dá)增強。在體外研究中，我們曾用低氧誘導(dǎo)因子1α的特異性抑制劑對培養(yǎng)的賁門癌細(xì)胞預(yù)先處理，也可以抑制由缺氧誘導(dǎo)的乙酰肝素酶表達(dá)升高，上述結(jié)果表明：在體外，低氧誘導(dǎo)因子1α可以調(diào)節(jié)乙酰肝素酶的表達(dá)。目前雖無直接證據(jù)表明在體內(nèi)乙酰肝素酶的表達(dá)就是受低氧誘導(dǎo)因子1α的調(diào)控，但是根據(jù)我們的體外實驗結(jié)果和文獻(xiàn)報道[6]，表明低氧誘導(dǎo)因子1α對腫瘤組織中乙酰肝素酶的表達(dá)，至少在部分程度上發(fā)揮重要的調(diào)控作用。因此，乙酰肝素酶在賁門癌組織中表達(dá)增高，并與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期密切相關(guān)，表明乙酰肝素酶可以作為預(yù)測賁門癌惡劣的生物學(xué)行為的一個指標(biāo)。而乙酰肝素酶和低氧誘導(dǎo)因子1α在賁門癌中的共表達(dá)，初步提示在實體腫瘤，活化的低氧誘導(dǎo)因子1α可能上調(diào)乙酰肝素酶的表達(dá)，二者共同促進(jìn)賁門癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。

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