骨橋蛋白在胸腺瘤組織中的表達(dá)及臨床病理意義

林春華，黃 明

（1.贛州衛(wèi)生學(xué)校護(hù)理系外科護(hù)理教研室；2.贛南醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院泌尿外科，江西 贛州 341000）

骨橋蛋白（osteopontin，OPN）是在惡性轉(zhuǎn)化的上皮細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)的一種與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的磷酸蛋白，表達(dá)于多種腫瘤組織中［1-2］。 關(guān)于OPN 在胸腺瘤組織中的表達(dá)情況的報(bào)道尚少。 筆者采用免疫組織化學(xué)SP 法檢測(cè)OPN 在胸腺瘤組織及正常胸腺組織中的表達(dá)情況，分析其與胸腺瘤臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集2003 年1 月至2011 年6 月胸腺瘤切除標(biāo)本的完整病例60 例（資料來源于贛州市人民醫(yī)院、贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院、贛州市腫瘤醫(yī)院）。 其中男37 例，女23 例，年齡21～70 歲，平均50.2歲。60例病例術(shù)前行胸部高分辨率CT 檢查均診斷為前上縱隔腫瘤，均未行放療和（或）化療。 術(shù)后按Masaoka分期標(biāo)準(zhǔn)［3］分為：Ⅰ期35 例、Ⅱ期14 例、Ⅲ期8 例、Ⅳ期3 例。 根據(jù)WHO 胸腺瘤組織分型標(biāo)準(zhǔn)［4］分型：A 型14 例、AB 型23 例、B 型21 例、C 型2 例。取同期18 例正常胸腺組織 （取自心臟病患者手術(shù)時(shí)）作為對(duì)照，其中男10 例，女8 例，年齡35～65歲，平均48.7 歲。

1.2 試劑

一抗兔抗人OPN 單克隆抗體、二抗生物素標(biāo)記羊抗兔IgG 試劑盒、DAB 顯色試劑盒等試劑均購自武漢谷歌生物科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

全部標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋。制成4 μm 厚的連續(xù)切片2 張，一張供免疫組織化學(xué)染色，一張供HE 染色復(fù)核診斷。免疫組織化學(xué)采用SP 法，依據(jù)試劑盒說明書步驟進(jìn)行；HE 染色按常規(guī)進(jìn)行操作。

1.4 免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷方法

采用雙盲法，由2 位病理科高年資醫(yī)師在光學(xué)顯微鏡下觀察免疫復(fù)合物沉積部位及免疫反應(yīng)強(qiáng)度，當(dāng)細(xì)胞膜和（或）細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色沉積視作陽性反應(yīng)。 在400 倍視野下每張玻片選取5 個(gè)視野，采用武漢同濟(jì)千屏病理科圖文綜合信息管理系統(tǒng)HMIAS-2000 高清晰度彩色醫(yī)學(xué)圖文分析系統(tǒng)免疫組織化學(xué)測(cè)量程序測(cè)定陽性顆粒的平均灰度和陽性單位值。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 病理學(xué)結(jié)果

免疫組織化學(xué)SP 法檢測(cè)顯示OPN 主要表達(dá)在胸腺瘤腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜上和細(xì)胞質(zhì)中，少量彌散表達(dá)在炎癥細(xì)胞、腫瘤周圍基質(zhì)及血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)中，見封四圖1。

2.2 OPN 在胸腺瘤組織不同分期及不同分型的表達(dá)

OPN 在胸腺瘤組織不同分期及不同分型中的陽性表達(dá)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01），見表1—2。

表1 OPN 在胸腺瘤組織不同分期中的表達(dá)情況

表2 OPN 在胸腺瘤不同分型中的表達(dá)情況

3 討論

胸腺瘤是成人最常見的前上縱隔腫瘤，約占50%［5］。目前臨床主要采用Masaoka 分期法［3］。Ⅰ期：包膜完整，鏡下無包膜浸潤；Ⅱ期：侵犯周圍胸膜或脂肪組織，或鏡下包膜浸潤；Ⅲ期：侵犯鄰近器官(心包、大血管、肺等)；Ⅳa 期：胸膜或心包播散；臨床Ⅳb期：淋巴道或血道轉(zhuǎn)移。 其中Ⅰ期為非侵襲性胸腺瘤，Ⅱ—Ⅳ期為侵襲性胸腺瘤。 而組織學(xué)分型主要根據(jù)2004 年正式的WHO 的胸腺腫瘤組織學(xué)分型標(biāo)準(zhǔn)［4］。 A 型：髓質(zhì)型；AB 型：兼具A 型和B 型胸腺瘤樣成分；B 型：混合型（B1 型：皮質(zhì)為主型，器官樣；B2 型：皮質(zhì)型；B3 型：鱗狀上皮樣、分化好的胸腺癌）；C 型：胸腺癌。 其中A、AB 型為低度惡性，B、C 型為高度惡性。由于胸腺組織學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，細(xì)胞多樣化，單純從細(xì)胞學(xué)形態(tài)上很難在“腺瘤”和“腺癌”之間劃一條涇渭分明的界線。 病理科醫(yī)生往往需要借助特殊標(biāo)記物染色的表達(dá)情況作為診斷的參考依據(jù)。

OPN 是一種相對(duì)分子質(zhì)量約為44 ku 的具有多種生物學(xué)功能的分泌性、糖基化的磷酸蛋白。 它有一個(gè)N 端信號(hào)序列及Gly-Arg-Gly-Asp-Ser 細(xì)胞黏附序列，并含有28 個(gè)功能結(jié)合區(qū)，包括鈣結(jié)合域、凝血酶裂解位點(diǎn)等，這使得其具有多種功能，在細(xì)胞的黏附遷移、信號(hào)傳導(dǎo)及組織修復(fù)中發(fā)揮著重要作用［6］。OPN 在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中有重要的作用，其具體機(jī)制可能有以下幾個(gè)方面：1）通過與其受體-整合素和CD44 結(jié)合后發(fā)揮作用［7］；2）與血管通透性因子（VPF）/血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）發(fā)揮協(xié)同作用［8］；3）通過自分泌及旁分泌途徑發(fā)揮作用［9］；4）通過抑制一氧化氮（NO）的產(chǎn)生，使轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞易于存活［10］。

本研究通過免疫組織化學(xué)SP 法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)OPN主要表達(dá)在胸腺瘤腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜上和細(xì)胞質(zhì)中，少量彌散表達(dá)在炎癥細(xì)胞、腫瘤周圍基質(zhì)及血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)中。 據(jù)此筆者推斷胸腺瘤腫瘤細(xì)胞本身能夠產(chǎn)生和分泌OPN［10］，并通過分泌的OPN來改變周圍的微環(huán)境，促進(jìn)腫瘤迅速生長和浸潤轉(zhuǎn)移；OPN 也可能通過旁分泌方式，作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞和周圍的基質(zhì)細(xì)胞［11］，促進(jìn)腫瘤的生長。 本研究結(jié)果顯示，胸腺瘤組織OPN 的陽性表達(dá)高于正常胸腺組織，提示OPN 參與了胸腺瘤的發(fā)生；OPN 在不同Masaoka 分期胸腺瘤中的陽性表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且在分期越高（侵襲性越高）的胸腺瘤組織中表達(dá)越多，提示胸腺瘤中OPN 的表達(dá)與腫瘤的侵襲性相關(guān)；OPN 在不同WHO 分型的胸腺瘤組織中的陽性表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且在惡性程度越高的胸腺瘤組織中表達(dá)越多，提示OPN 的表達(dá)與胸腺瘤的惡性程度相關(guān)。

綜上所述，OPN 可能在胸腺瘤的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用，OPN 可能參與了胸腺瘤的發(fā)生、發(fā)展。

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