Galectin-3、ret、nm23-H1蛋白與喉癌浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系※

張瑞迪 王樂秋 張立晨 李麗娟 馬秀鳳

Galectin-3、ret、nm23-H1蛋白與喉癌浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系※

張瑞迪 王樂秋 張立晨 李麗娟 馬秀鳳

目的研究Galectin-3、ret、nm23-H1蛋白與喉鱗狀細胞癌（LSCC）的腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法，檢測30例LSCC標本癌組織中Galectin-3、ret及nm23-H1蛋白的表達情況。結(jié)果Galectin-3、ret在LSCC不同病理分化組間的表達差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），nm23-H1的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義；此三種蛋白在不同的臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意（P＜0.05）；nm23-H1的表達與Galectin-3、ret的表達呈負相關(guān)，Galectin-3與ret的表達無明顯相關(guān)（P＞0.05）。結(jié)論Galectin-3、ret、nm23-H1與LSCC的浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

喉鱗狀細胞癌；Galectin-3； ret；nm23-H1

喉癌是頭頸部常見的惡性腫瘤之一，腫瘤的局部復(fù)發(fā)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移是影響喉癌患者預(yù)后的重要因素。本研究通過觀察喉癌組織、和轉(zhuǎn)移灶中原癌基因ret蛋白、腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因nm23-H1蛋白、內(nèi)源性凝集素Galectin-3的表達情況，了解ret蛋白、nm23-H1蛋白和Galectin-3與喉癌病理分化程度、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系?，F(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2011年8月～2012年8月期間來我院我科手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)檢查確診的原發(fā)性LSCC標本30例，其中男28例，女2例，年齡38～73歲，平均（52.1±6.3）歲，根據(jù)2002年國際抗癌協(xié)會（UICC）分期方案行臨床分期分組：Ⅰ～Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期12例；分化程度分組：高分化7例，中分化14例，低分化9例；有否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分組：有轉(zhuǎn)移16例，無轉(zhuǎn)移14例。病例術(shù)前均未做過放射治療和化學(xué)治療，患者簽訂知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑兔抗人nm23多克隆抗體（即用型）、兔抗人ret單克隆抗體和兔抗人Galectin-3單克隆抗體購自武漢博士德公司，SP試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2.2 免疫組織化學(xué)方法臨床標本組織取得后由病理科常規(guī)石蠟包埋、切片，行HE染色及Galectin-3、ret、nm23-H1抗體免疫組化S-P法染色。

1.2.3 結(jié)果判定由病理科醫(yī)生對所有切片進行雙盲閱片及記錄，陽性為細胞質(zhì)中有棕褐色顆粒染色。陰性為對照組黏膜細胞著色。于高倍鏡下每張切片隨機抽取10個不重復(fù)視野計數(shù)200個細胞（對極少數(shù)不足10個高倍視野的，以觀察到的最多高倍視野計算均值），根據(jù)陽性細胞所占百分比分別記錄為不同結(jié)果如：陽性細胞數(shù)＜10%為陰性，≥10%為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理用SPSS 13.0軟件分析，用χ2檢驗及確切概率法，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 喉癌臨床病理表現(xiàn)與Galectin-3、ret、nm23-H1蛋白的關(guān)系在LSCC不同分化程度各組中，Galectin-3在高分化組與中分化組、低分化組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），ret在組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），ret的表達與分化程度成負相關(guān)，低分化組中表達明顯高于中分化組；nm23-H1的表達在組間兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。在不同臨床分期各組中，Galectin-3的表達在各分期間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），成正相關(guān)；ret、nm23-H1蛋白表達在Ⅰ～Ⅱ期組與Ⅲ～Ⅳ期組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。Galectin-3、ret、nm23-H1的表達在有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，見表1。

2.2 nm23-H1表達與Galectin-3、ret表達的相關(guān)性在喉癌組織中nm23-H1的表達與Galectin-3（P＜0.05）、ret（P＜0.05）的表達呈負相關(guān)，Galectin-3與ret在喉癌組織中的表達無明顯相關(guān)（P＞0.05）。

表1 喉癌中相關(guān)基因表達與各臨床病理指標的關(guān)系

3 討論

凝集素（Lectin）被廣泛發(fā)現(xiàn)于植物及動物組織中，其通過參與或交聯(lián)特異的糖結(jié)合物，在調(diào)節(jié)生理過程中扮演了很重要的角色。Galectin-3是唯一的嵌合體凝集素，已知Galectin-3調(diào)節(jié)相當大一部分細胞的生物學(xué)過程，尤其是抑制凋亡和促進細胞增殖[1]。近年來的大多數(shù)研究表明，Galectin-3過表達與一些腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)，即隨著Galectin-3的表達水平升高，腫瘤易發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良，與國內(nèi)外學(xué)者的研究結(jié)果部分一致[2]。本研究結(jié)果顯示Galectin-3在LSCC不同病理分化程度中，高分化組與中分化組、低分化組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。由此可見，Galectin-3表達與LSCC組織分化程度密切相關(guān)，組織分化程度高，惡性程度低，其蛋白低表達；表達或表達強者多見于組織分化程度低，惡性程度高的LSCC，提示在誘導(dǎo)LSCC分化過程中Galectin-3起重要作用。且本實驗中Galectin-3在臨床Ⅲ～Ⅳ期組及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達率明顯高于其對應(yīng)對照組，其之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，表明Galectin-3高表達與LSCC的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

ret原癌基因位于10q11.2，編碼一種酪氨酸激酶受體[3]，ret蛋白由胞膜外配體結(jié)合區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)酪氨酸蛋白激酶功能區(qū)組成，其中胞膜外區(qū)分為半胱氨酸富集區(qū)和鈣粘著蛋白樣配基結(jié)合區(qū)兩部分，與細胞間的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)。ret原癌基因?qū)ι窠?jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)、腎臟的發(fā)育，對調(diào)節(jié)神經(jīng)嵴細胞的增殖、分化、遷移及腸神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育都起著重要的作用。在神經(jīng)生長、分化、成熟中起重要作用[4]。本實驗結(jié)果顯示，ret蛋白的表達隨著LSCC分化程度的降低而增加，中分化組中表達明顯低于低分化組（P＜0.05），提示ret在誘導(dǎo)腫瘤分化過程中起重要作用。本研究還顯示，在各臨床分期間及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），由此可見，ret蛋白的表達與LSCC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期相關(guān)，隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期的增加，ret蛋白陽性表達率逐漸升高，提示ret蛋白在LSCC的發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移過程起重要作用。其機制可能為由于激活性異源基因使癌蛋白形成二聚體引起TK區(qū)功能的組成性激活，跨膜區(qū)的丟失改變了ret癌基因的細胞內(nèi)定位，允許這些癌蛋白與異常的底物相互作用，同時ret與普遍表達的異源基因融合而改變了啟動子，使得在正常喉黏膜組織細胞內(nèi)靜止的ret開始表達，激發(fā)酪氨酸激酶自動磷酸化，誘導(dǎo)細胞增生過度以至癌變。

nm23基因（Nometastatic gene 23）是1988年Steeg等[5]在研究小鼠黑色素瘤K-1735的亞細胞克隆株以及化學(xué)誘導(dǎo)大鼠乳腺癌細胞時發(fā)現(xiàn)的一種cDNA基因。小鼠和人中nm23基因均編碼為分子量為17kD的核內(nèi)及胞漿蛋白質(zhì)，人類nm23基因的兩個亞型nm23-H1和nm23-H2均位于17號染色體長臂17q 21～3處，分別編碼18.5kD和17kD兩種蛋白。而轉(zhuǎn)移抑制功能主要由 nm23-H1 和nm23-H2 體現(xiàn)，其中nm23-H1基因與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移最為密切。本實驗結(jié)果顯示，nm23-H1表達在不同分化程度組間兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），在各分期間及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。由此可見，nm23-H1的表達與LSCC的病理分化程度無明顯相關(guān)性。與轉(zhuǎn)移及臨床分期呈相關(guān)性。即隨著nm23-H1表達水平的降低，LSCC表現(xiàn)出臨床分期晚以及更易發(fā)生轉(zhuǎn)移的特點，與國內(nèi)外學(xué)者報道一致。綜上所述，nm23-Hl表達的缺失或失活與LSCC的臨床分期及淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，尤其在反映LSCC向鄰近器官侵犯和淋巴轉(zhuǎn)移方面有重要價值。

在惡性腫瘤相關(guān)的癌基因研究中，許多學(xué)者提出了基因協(xié)同作用的假說，認為在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的各個階段，至少有兩個或兩個以上的功能各異且異常激活的基因各自發(fā)揮不同作用，并在發(fā)生先后及發(fā)生位置上相互配合，共同促進了細胞的癌變。本實驗結(jié)果顯示nm23-H1的表達與Galectin-3、ret的表達呈負相關(guān)，Galectin-3與ret的表達無明顯相關(guān)（P＞0.05）。總之，Galectin-3、ret和nm23-H1蛋白在LSCC中的不尋常表達，導(dǎo)致細胞無限增殖和細胞凋亡受阻，在喉癌的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。聯(lián)合檢測Galectin-3、ret及nm23-H1蛋白可能成為LSCC早期診斷及判斷惡性程度的指標之一?？芍笇?dǎo)臨床準確估計LSCC的侵襲性和淋巴轉(zhuǎn)移趨勢，并有助于選擇適宜的治療方案以及評估預(yù)后。

[1] Miranda FA, Hassumi MK, Guimaraes MC, et al. Galectin-3 overexpression in inasive laryngeal carcinoma, assessed by computer-assisted analysis[J]. J Histochem Cytochem, 2009,57(7)：665-673.

[2] Sakaki M, Fukumori T, Fukawa T, et al.Clinical significance of Galecyin-3 inc-ear cell renal cell carcinoma[J]. J Med Invest, 2010, 57(1-2)：152-157.

[3] 賈萬鈞,郭艷.CK19、gal-3、HBME-1和Ret蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達[J].浙江臨床醫(yī)學(xué),2007,9(11)：1443-1444.

[4] Drosten M, Putzer BM.Mechanisms of Disease, cancer targeting and the impact of oncogenic RET for medullary thyroid carcinoma therapy[J]. Nat Clin Pract Oncol, 2006,3(10)：564-574.

[5] 符生苗.鼻咽癌nm23-H1基因外顯子的檢測[J].醫(yī)學(xué)研究雜志, 2007,36(9)：30-32.

R34

A

1673-5846(2013)06-0289-03

牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院耳鼻咽喉科，黑龍江牡丹江 157011

黑龍江省衛(wèi)生廳科研課題項目（項目編號：2011-301）

王樂秋，女，現(xiàn)任牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院耳鼻咽喉科主治醫(yī)師，碩士，主要從事耳鼻咽喉臨床研究，E-mail：mdjwangleqiu@163.com。