蛋白酶活化受體1活化或抑制對鼻咽癌細(xì)胞遷移侵襲及縫隙連接蛋白43表達(dá)的影響

張曉玲王濤彭綱張利玲李躍華李品東任精華

1.華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院腫瘤中心，湖北 武漢 430022；

2.南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，湖南 衡陽 421001

蛋白酶活化受體1活化或抑制對鼻咽癌細(xì)胞遷移侵襲及縫隙連接蛋白43表達(dá)的影響

張曉玲1王濤1彭綱1張利玲1李躍華2李品東1任精華1

1.華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院腫瘤中心，湖北 武漢 430022；

2.南華大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，湖南 衡陽 421001

背景與目的：蛋白酶活化受體1(protease-activated receptor 1，PAR1)在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，其在鼻咽癌中的作用機制尚不清楚。本文旨在檢測PAR1活化或抑制對鼻咽癌細(xì)胞(CNE1-LMP1)增殖及侵襲的影響，并初探其機制。方法：選取高表達(dá)PAR1的CNE1-LMP1細(xì)胞系作為研究對象，首先采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)、劃痕實驗和Transwell侵襲實驗分別檢測PAR1特異性激動肽SFLLRN和特異性抑制劑SCH79797對CNE1-LMP1細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響。然后應(yīng)用實時定量PCR(real-time PCR)和蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測PAR1活化及抑制前后縫隙連接蛋白43(connexin43，Cx43) mRNA及蛋白表達(dá)情況，并比較組間表達(dá)差異。結(jié)果：與CNE1-LMP1細(xì)胞未處理組相比，PAR1特異性激動肽SFLLRN能夠促進(jìn)CNE1-LMP1細(xì)胞增殖、遷移和體外侵襲，同時發(fā)現(xiàn)Cx43 mRNA和蛋白量明顯減少(P＜0.05)。與CNE1-LMP1細(xì)胞未處理組相比，PAR1抑制劑SCH79797能明顯抑制CNE1-LMP1細(xì)胞增殖、遷移和體外侵襲，并且發(fā)現(xiàn)Cx43 mRNA和蛋白量明顯增高(P＜0.05)。結(jié)論：活化PAR1能夠促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞系CNE1-LMP1的增殖、遷移和侵襲，減少Cx43 mRNA和蛋白表達(dá)，而抑制PAR1的表達(dá)能抑制鼻咽癌細(xì)胞系CNE1-LMP1的增殖、遷移和侵襲，增加Cx43 mRNA和蛋白表達(dá)。

鼻咽癌；蛋白酶活化受體1；侵襲；縫隙連接蛋白43；轉(zhuǎn)移

鼻咽癌是我國南方地區(qū)最常見的惡性腫瘤之一，患者治療失敗的主要原因是局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。因此，研究與鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的分子標(biāo)志可能為鼻咽癌的靶向治療提供新的分子靶點。蛋白酶活化受體1(protease-activated receptor 1，PAR1)是G蛋白偶聯(lián)受體家族主要成員之一，又稱凝血酶受體，其被凝血酶或特異性人工合成多肽SFLLRN激活后，介導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為，如參與腫瘤細(xì)胞生長、侵襲、血管新生等多個環(huán)節(jié)和多條通路［1］。同時，近年來研究發(fā)現(xiàn)，PAR1高表達(dá)于乳腺癌、惡性黑色素瘤、前列腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、口腔鱗狀細(xì)胞癌、食管癌及腎細(xì)胞癌等惡性腫瘤，且其表達(dá)越高，這些腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移力越強。而下調(diào)或者沉默PAR1的表達(dá)后，許多腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移力減弱［2-6］。

間隙連接蛋白43(connexin43，Cx43)是構(gòu)成縫隙連接通訊的重要組成成分，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［3］。許多研究顯示，多種腫瘤組織表現(xiàn)為Cx43基因表達(dá)下降或缺失，導(dǎo)致細(xì)胞間縫隙連接通訊(gap junctional intercellular communication)中斷［4］、細(xì)胞間的物質(zhì)交換障礙，最終導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控和分化異常，臨床上常表現(xiàn)為腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。而恢復(fù)這些癌細(xì)胞的間隙連接功能或上調(diào)Cx43基因表達(dá)水平，它們表現(xiàn)出正常細(xì)胞的生物學(xué)表型，同時抑制腫瘤細(xì)胞生長。Villares等［5］研究已經(jīng)證實在轉(zhuǎn)移性惡性黑色素瘤中Cx43是PAR1下游的調(diào)控基因，且PAR1調(diào)節(jié)Cx43的表達(dá)發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平。且多項研究表明，縫隙連接蛋白Cx43與多種腫瘤細(xì)胞的生長、增殖有關(guān)，當(dāng)其表達(dá)下降或缺失時，細(xì)胞過度克隆生長，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移。我們在前期研究的基礎(chǔ)上［6］，選用鼻咽癌細(xì)胞系CNE1-LMP1(高侵襲性，高轉(zhuǎn)移性)作為研究對象，檢測PAR1活化或抑制對鼻咽癌細(xì)胞CNE1-LMP1增殖、侵襲及Cx43的影響。

1 材料和方法

1.1 主要試劑和儀器

TRIzol Reagent試劑購自Aidlab， cDNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(TransScript First-Strand cDNA Synthesis Super Mix)購自北京全式金生物技術(shù)有限公司，實時熒光定量PCR SYBR? Premix Ex Taq? 購自TaKaRa公司，PCR引物由Invitrogen公司合成，蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)用的各種試劑購自Boster公司，Ecl plus和PVDF膜分別購自Thermo公司和Millipore，兔抗人Cx43多克隆抗體購自Cell Signaling Technology公司；兔抗人actin購自Santa cruz公司；HRP標(biāo)記的抗兔IgG購自武漢谷歌生物科技有限公司，鼻咽癌細(xì)胞系(CNE1-LMP1)購自中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院中心實驗室，應(yīng)用RPMI-1640培養(yǎng)基(Hyclone)加10%胎牛血清(Hyclone)，37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。四甲基偶氮唑鹽(MTT)購自Sigma公司，特異性PAR1激活肽SFLLRN購自ANASPEC公司，選擇性PAR1抑制劑SCH79797購自TOCRIS公司［7］。

1.2 主要方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

人鼻咽癌細(xì)胞系CNE1-LMP1用含10%胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培養(yǎng)液，置于37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的恒溫培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。

1.2.2 MTT法檢測細(xì)胞生長和抑制

取處于對數(shù)生長期的鼻咽癌細(xì)胞系CNE1-LMP1，將其制成單細(xì)胞懸液并接種到96孔板中，待細(xì)胞貼壁后，用含不同濃度組的SFLLRN(細(xì)胞密度為2 000個/孔)或SCH79797(細(xì)胞密度為5 000個/孔)的1.5%血清培養(yǎng)基處理細(xì)胞，溫育48 h后，每孔加入20 μL MTT(用PBS溶解成5 mg/mL) 溶液，37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，小心吸盡孔中的液體，每孔再加入DMSO 150 μL，搖床上震蕩10 min。然后在酶標(biāo)儀波長490 nm處讀取每孔的吸光度值(A)，實驗重復(fù)3次。

1.2.3 Transwell體外侵襲實驗

選用Transwell小室進(jìn)行該實驗，將實驗前一天融化好的matrigel膠加入到小室中，每孔50 μL，放入37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的培養(yǎng)箱中，溫育5 h后吸去小室中上清液，上室中加入用無血清培養(yǎng)基制成的終濃度為100 μmol/L 的SFLLRN或5 μmol/L的SCH79797細(xì)胞懸液200 μL處理細(xì)胞，細(xì)胞密度為20 000個/孔，下室中每孔加入含15%血清培養(yǎng)基600 μL，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后取出小室，4%多聚甲醛固定30 min后0.1%結(jié)晶紫染色，清水沖洗后用棉簽擦凈上室膜面的細(xì)胞，用倒置相差顯微鏡隨機觀察5個視野(×200)，記數(shù)細(xì)胞取均值并照相。實驗重復(fù)3次。

1.2.4 劃痕實驗

將處于對數(shù)生長期的CNE1-LMP1制成細(xì)胞懸液接種到6孔板，6孔板底部劃好直線，調(diào)整細(xì)胞密度為2×105個/孔，搖勻后于37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)過夜，待細(xì)胞貼壁后用1%血清培養(yǎng)基饑餓細(xì)胞24 h，然后用滅菌的200 μL微量移液槍槍頭以直尺為參照沿培養(yǎng)板底部呈I字形垂直劃痕，劃痕后用PBS沖洗3次，以沖走劃痕后的懸浮細(xì)胞，同時在實驗組中分別加入用1.5%血清培養(yǎng)基配制的終濃度為100 μmol/L的SFLLRN或5 μmol/L SCH79797，對照組只加1.5%血清培養(yǎng)基。鏡下記錄劃痕寬度并拍照。37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h，倒置顯微鏡下觀察劃痕愈合程度并拍照。

1.2.5 實時熒光定量RT-PCR

將處于對數(shù)生長期的CNE1-LMP1制成細(xì)胞懸液接種到6孔板，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105個/孔，待細(xì)胞貼壁后用1%血清培養(yǎng)基饑餓細(xì)胞24 h后，在實驗組中分別加入用1.5%血清培養(yǎng)基配制的終濃度為100 μmol/L的SFLLRN或5 μmol/L的SCH79797，對照組只加1.5%血清培養(yǎng)基。37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48 h，以TRIzol試劑提取各組細(xì)胞中RNA，按試劑盒說明書進(jìn)行操作，然后按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書將新提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,實時熒光定量RT-PCR引物序列，Cx43引物上游［8］：5’-CCCGTGAGAACACCAAGT TT-3’，下游：5’-TCACTCCAGGGCATTTCTTC-3’；內(nèi)參GAPDH引物上游：5’-GGTCGGAGTCAACGGATT TG-3’；下游：5’-GGAAGATGGTGATGGGATTTC-3’。按照試劑盒說明書體系，在相同PCR反應(yīng)條件下擴增靶基因和內(nèi)參［8］：95 ℃ 5 min預(yù)變性；95 ℃60 s，58 ℃ 60 s，72 ℃ 60 s，30個循環(huán)；72 ℃終延伸7 min。分析溶解曲線，計算Ct值，以GAPDH為參照物，采用2-ΔΔCT法分析各組Cx43 mRNA相對表達(dá)量。

1.2.6 Western blot檢測

將細(xì)胞接種到6孔板中，細(xì)胞貼壁后加藥物處理細(xì)胞，0、24和48 h后分別提取各處理組細(xì)胞總蛋白，每孔加RIPA裂解緩沖液冰上裂解30 min，4 ℃ 12 000 r/min離心15 min，取上清液并檢測蛋白濃度，操作按試劑盒說明書進(jìn)行。電泳分離：70 V，80 min；110 V，70 min；轉(zhuǎn)膜(一般150 mA，2 h)；5%脫脂奶粉TBST封閉1 h，兔抗人Cx43一抗工作濃度為1∶800(4 ℃輕搖過夜)；兔抗人actin工作濃度為1∶500，HRP標(biāo)記的抗兔lgG二抗工作濃度為1∶5 000(室溫1 h)。暗室中ECL液顯色。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計分析軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料以表示，組間比較采用單因素方差分析和t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 SFLLRN和SCH79797對CNE1-LMP1細(xì)胞增殖的影響

0～500 μmol/L的SFLLRN與細(xì)胞共溫育48 h后表現(xiàn)出促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用，且呈濃度依賴性，500 μmol/L SFLLRN作用最顯著，我們選用100 μmol/L濃度組進(jìn)行后續(xù)實驗。0～20 μmol/L的SCH79797與細(xì)胞共溫育48 h后表現(xiàn)出抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用，且呈濃度依賴性，20 μmol/L SCH79797抑制最明顯(圖1A、B)。本研究后續(xù)實驗選用對細(xì)胞凋亡影響較小的濃度組5 μmol/L。

2.2 SFLLRN和SCH79797對細(xì)胞侵襲的影響

用終濃度為100 μmol/L的SFLLRN和終濃度為5 μmol/L的SCH79797分別處理CNE1-LMP1細(xì)胞36 h后，對照組和各實驗組高倍鏡下穿過Transwell小室的細(xì)胞數(shù)量分別為(94±16)個、(168±18)個和(34±19)個(圖2A、B)。表明SFLLRN能促進(jìn)CNE1-LMP1細(xì)胞的侵襲，而SCH79797抑制CNE1-LMP1細(xì)胞的侵襲。

2.3 SFLLRN和SCH79797對細(xì)胞遷移的影響

與對照組相比，用終濃度為100 μmol/L的SFLLRN處理CNE1-LMP1細(xì)胞36 h后，細(xì)胞遷移明顯增強，劃痕間距縮短，而用終濃度為5 μmol/L的SCH79797處理CNE1-LMP1細(xì)胞36 h后，細(xì)胞幾乎無遷移變化，劃痕間距幾乎不變(圖3)。

圖 1 SFLLRN和SCH79797對CNE1-LMP1細(xì)胞增殖的影響Fig. 1 Effect of SFLLRN or SCH79797 on the growth of CNE1-LMP1

圖 2 SFLLRN和SCH79797對CNE1-LMP1細(xì)胞體外侵襲能力的影響Fig.2 Effect of SFLLRN and SCH79797 on CNE1-LMP1 cells invasion in vitro

圖 3 SFLLRN和SCH79797處理CNE1-LMP1細(xì)胞36 h后細(xì)胞遷移的變化Fig. 3 The change of migration cell 36 h after SFLLRN and SCH79797 processing CNE1-LMP1 cell

圖 4 RT-PCR檢測SFLLRN和SCH79797作用細(xì)胞不同時間后Cx43 mRNA的表達(dá)變化Fig. 4 Real-time PCR analysis of Cx43 mRNA in CNE1-LMP1 with SFLLRN and SCH79797

2.4 SFLLRN和SCH79797處理細(xì)胞后Cx43表達(dá)情況

RT-PCR檢測顯示，用100 μmol/L SFLLRN處理細(xì)胞24、48 h后，Cx43 mRNA表達(dá)與對照組相比呈明顯下降趨勢，而用5 μmol/L SCH79797處理細(xì)胞24、48 h后，Cx43 mRNA表達(dá)與對照組相比呈明顯上升趨勢(圖4)。

2.5 SFLLRN和SCH79797處理細(xì)胞后Cx43蛋白表達(dá)情況

Western blot檢測結(jié)果顯示，用100 μmol/L SFLLRN處理細(xì)胞24、48 h后，Cx43蛋白表達(dá)與對照組相比呈明顯下降趨勢，而用5 μmol/L SCH79797處理細(xì)胞24、48 h后，Cx43蛋白表達(dá)與對照組相比呈明顯上升趨勢(圖5)。

圖 5 Western blot檢測SFLLRN和SCH79797處理細(xì)胞后Cx43蛋白表達(dá)變化Fig. 5 Western blot analysis of Cx43 protein expression in CNE1-LMP1 with SFLLRN and SCH79797

3 討 論

PAR1在鼻咽癌的進(jìn)展中起重要作用，我們前期的研究已經(jīng)表明PAR1高表達(dá)于具有高侵襲、高轉(zhuǎn)移的鼻咽癌細(xì)胞系CNE1-LMP1［6］。因此，本研究通過使用PAR1激活肽SFLLRN及抑制劑SCH79797作用于鼻咽癌細(xì)胞系CNE1-LMP1，發(fā)現(xiàn)激活PAR1后，CNE1-LMP1細(xì)胞增殖及侵襲作用明顯增加，而抑制PAR1表達(dá)后，CNE1-LMP1細(xì)胞增殖及侵襲作用明顯減弱，進(jìn)一步證實了PAR1在鼻咽癌進(jìn)展中的核心作用。

為了更明確PAR1作用于細(xì)胞的機制，我們進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)PAR1的表達(dá)與Cx43之間存在聯(lián)系，證實鼻咽癌中PAR1調(diào)控Cx43的表達(dá)。

Cx43在腫瘤中的作用仍存在爭議，一些研究表明，當(dāng)Cx43表達(dá)升高時，通過增加與血管內(nèi)皮的黏附及物質(zhì)交換功能，可以增強乳腺癌和神經(jīng)膠質(zhì)瘤的轉(zhuǎn)移能力［9-17］。相反許多研究表明，在多種腫瘤中，縫隙連接蛋白Cx43表現(xiàn)為腫瘤抑制基因的特點，當(dāng)其表達(dá)下降或者缺失時，細(xì)胞間連接通訊功能中斷，機體對細(xì)胞的監(jiān)視和調(diào)控作用減弱，細(xì)胞過度克隆生長，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移［1,18-19］。有研究發(fā)現(xiàn)，Cx43在人惡性黑色素瘤細(xì)胞中表達(dá)下降［20-21］。本研究也發(fā)現(xiàn)當(dāng)活化PAR1后，Cx43蛋白及mRNA表達(dá)水平下降，當(dāng)抑制PAR1后，Cx43蛋白及mRNA表達(dá)水平升高。Villares等［5］研究證實在轉(zhuǎn)移性惡性黑色素瘤中，Cx43是PAR1下游的調(diào)控基因，指出盡管PAR1對轉(zhuǎn)錄因子(AP-1和SP-1)的表達(dá)無影響，但其影響轉(zhuǎn)錄因子SP-1、c-Jun和 c-Fos對Cx43基因啟動子的結(jié)合，最終導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄因子SP-1和AP-1結(jié)合Cx43啟動子的作用減弱，證實了PAR1調(diào)節(jié)Cx43的表達(dá)發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平。本研究結(jié)果也表明，PAR1可能通過調(diào)節(jié)下游的靶基因Cx43影響鼻咽癌細(xì)胞的增殖和侵襲。Revilla等［22］在比較腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力時發(fā)現(xiàn)，高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系間的縫隙連接通訊功能明顯低于低轉(zhuǎn)移細(xì)胞系；腫瘤細(xì)胞縫隙連接通訊功能降低與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)。提示Cx43蛋白表達(dá)與癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移有關(guān)，Cx43蛋白表達(dá)越少，縫隙連接的建立越少，機體對細(xì)胞的監(jiān)視和調(diào)控作用減弱，細(xì)胞過度克隆生長，癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力越強；反之，Cx43蛋白表達(dá)越強，可促進(jìn)間隙連接的組裝，增加細(xì)胞間信號的交流，使細(xì)胞之間的生長相互控制［23］，癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力則越弱［24］。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，PAR1被激活后，Cx43表達(dá)下降，鼻咽癌細(xì)胞的侵襲、遷移能力加強；而PAR1被抑制后，Cx43表達(dá)增加，鼻咽癌細(xì)胞的侵襲、遷移能力降低，提示Cx43可成為鼻咽癌早期治療的新靶點。

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《中國癌癥雜志》2013年征訂啟事

《中國癌癥雜志》是由國家教育部主管、復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院主辦的全國性腫瘤學(xué)術(shù)期刊，讀者對象為從事腫瘤基礎(chǔ)、臨床防治研究的中高級工作者。主要報道內(nèi)容：國內(nèi)外研究前沿的快速報道、專家述評、腫瘤臨床研究、基礎(chǔ)研究、文獻(xiàn)綜述、學(xué)術(shù)討論、臨床病理討論、病例報道、講座和簡訊等?！吨袊┌Y雜志》已入選中文核心期刊、中國科技核心期刊及全國腫瘤類核心期刊，并為中國科技論文統(tǒng)計源期刊，先后被“中國期刊網(wǎng)”、“萬方數(shù)據(jù)——數(shù)字化期刊群”和“解放軍醫(yī)學(xué)圖書館數(shù)據(jù)庫（CMCC）”等收錄。

《中國癌癥雜志》為月刊，大16開，80頁銅版紙（隨文彩圖），每月30日出版，單價8元，全年96元。國際標(biāo)準(zhǔn)刊號1007-3639，國內(nèi)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)刊號CN31-1727/R，郵發(fā)代號4-575。

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The effect of protease-activated receptor 1 on the migration and invasion of cancer cells and connexin 43 expression in nasopharyngeal carcinoma cell line CNE1-LMP1

ZHANG Xiao-ling1, WANG Tao1, PENG Gang1, ZHANG Li-ling1, LI Yue-hua2, LI Pin-dong1, REN Jing-hua1(1.Cancer Center, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan Hubei 430022, China; 2.Department of Radiation Oncology, the First Affiliated Hospital of Nanhua University, Hengyang Hunan 421001, China)

WANG Tao E-mail: shuiyueyang0520@163.com

Background and purpose: Protease-activated receptor 1 (PAR1) is a key player in the migration and invasion of tumor, but its role in the migration and invasion of nasopharyngeal carcinoma remains unclear. The purpose of this study was to investigate PAR1 on the proliferation and invasion of nasopharyngeal carcinoma cells (CNE1-LMP1) and its mechanism. Methods: Cultured human nasopharyngeal carcinoma cells CNE1-LMP1 were treated with PAR1 synthetic activating peptide SFLLRN or PAR1 antagonist SCH79797, MTT assay, wound-healing and Transwell invasion assay were used to investigate the proliferation, migration and invasion of CNE1-LMP1 cells. Then the expression of connexin 43 (Cx43) was detected using Western blot and RT-PCR. Results: PAR1 synthetic activating peptide SFLLRN promoted CNE1-LMP1 cell proliferation, migration and invasion, and significantly reduced Cx43 mRNA and protein expression (P＜0.05) compared with the control group. PAR1 antagonist SCH79797 significantly inhibited CNE1-LMP1 cell proliferation, migration, and in vitro invasion ability, and significantly increased Cx43 mRNA and protein expression (P＜0.05) compared with control group. Conclusion: The activation ofPAR1 promotes CNE1-LMP1 proliferation, migration and invasion, and decreases the expression of Cx43 mRNA and protein; the inhibition of PAR1 inhibits CNE1-LMP1 proliferation, migration and invasion, and increases the expression of Cx43 mRNA and protein.

NPC; Protease-activated receptor 1; Migration invasion; Cx43; Metastasis

10.3969/j.issn.1007-3969.2013.03.006

R739.62

：A

：1007-3639(2013)03-0188-07

2012-10-31

2013-01-04）

武漢市科技攻關(guān)計劃項目(No：201260523172-2)。

王濤 E-mail:shuiyueyang0520@163.com