HPLC測(cè)定咳爾康口服液鹽酸麻黃堿的含量※

代貴江 楊淑芹 于 濤

HPLC測(cè)定咳爾康口服液鹽酸麻黃堿的含量※

代貴江 楊淑芹 于 濤

目的建立測(cè)試咳爾康口服液中鹽酸麻黃堿含量的高效液相方法，并對(duì)此方法進(jìn)行系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證，以確保應(yīng)用該方法測(cè)試的結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。方法采用色譜柱：Agilent TC-C18柱（4.6×250mm，5μm，Agilent，美國），流動(dòng)相：甲醇-0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液（以磷酸調(diào)至PH2.5）（5：95），檢測(cè)波長為210nm。結(jié)果鹽酸麻黃堿在2.048mg?L-～500mg?L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，得到線性回歸方程為Y=1.0818X＋0.0011，相關(guān)系數(shù)為0.9993（n=7）；低、中、高濃度的精密度RSD值分別為0.27%、0.76%、0.53%；重復(fù)性RSD為0.67%；平均加樣回收率為99.31%，RSD為0.90%；供試品溶液室溫放置8h穩(wěn)定。結(jié)論本方法測(cè)定咳爾康口服液鹽酸麻黃堿的含量準(zhǔn)確、可靠，操作簡單、用時(shí)短，可用于咳爾康口服液中鹽酸麻黃堿的含量測(cè)定。

咳爾康口服液；鹽酸麻黃堿；含量測(cè)定

咳爾康口服液是由甘草、陳皮、白術(shù)、茯苓、半夏、紫苑等混合研制而成的純中藥復(fù)方制劑[1]。諸藥合用可化痰止咳、燥濕健脾，具有良好的止咳、祛痰、平喘作用，還可驅(qū)除機(jī)體邪毒，改善患者體質(zhì)。為了更好地控制咳爾康口服液的質(zhì)量，確保其療效，筆者建立了一種實(shí)用、準(zhǔn)確、可靠的HPLC檢測(cè)方法，用于檢測(cè)該制劑中有效成分鹽酸麻黃堿的含量，經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證，該方法回收率、準(zhǔn)確度及重現(xiàn)性均為良好，具體敘述如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器與設(shè)備Agilent 1200型高效液相色譜儀（配有脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、恒溫箱、液相色譜泵、柱溫箱及熒光檢測(cè)器），由Chemstation化學(xué)工作站系統(tǒng)控制（Agilent，德國）；METTLER TOLEDO AB135-S型十萬分之一天平（METTLER，瑞士）；XW-80A渦旋混合器（上海青浦滬西分析儀器廠）；TGL16M臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（長沙英泰儀器有限公司）；AHL-2001-P痕量型分析型超純水機(jī)（艾科浦，重慶頤洋企業(yè)發(fā)展有限公司）。

1.2 試藥與材料鹽酸麻黃堿對(duì)照品：由中國藥品生物制品檢定研究所提供，批號(hào)：1241-200001；咳爾康口服液：由黑龍江仁合堂藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)：121015、121016、121017、121018、121019、 121022、121023、121024、121025、121026；磷酸二氫鉀：汕頭市西隴化工廠有限公司，分析純，批號(hào)：090307；磷酸：天津科密歐化學(xué)試劑有限公司，分析純，批號(hào)：110215；甲醇：美國Tedia公司，色譜純，批號(hào)：1202257；純水：自制去離子超純水。

2 方法

2.1 色譜條件色譜柱：Agilent TC-C18柱（4.6 ×250mm，5μm，Agilent，美國）；保護(hù)柱：Gemini C18（4×3.0 mm，10μm，Phenomenex，美國）；流動(dòng)相：甲醇-0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液（以磷酸調(diào)至PH2.5）（5：95）；流速：1ml?min-1；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μl。檢測(cè)波長210nm[2]。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對(duì)照品溶液的配制精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品10mg，置于10ml容量瓶中，加適量流動(dòng)相溶解后，再用流動(dòng)相稀釋至刻度線，搖勻，即得濃度為1g?L-1的鹽酸麻黃堿對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，置于4℃冰箱保存。

2.2.2 供試品溶液的配制精密移取咳爾康口服液5ml，置于大孔樹脂柱上（內(nèi)徑為15mm，填量為20g，填料為AB-8型大孔樹脂），用10ml水洗脫至無色，再用50%乙醇溶液15ml洗脫，收集洗脫液，40℃條件下微弱氮?dú)饬鲹]干乙醇。以流動(dòng)相復(fù)溶，復(fù)溶液轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，即得供試品溶液。進(jìn)樣前用0.22μm的微孔濾膜過濾后進(jìn)樣。

2.2.3 陰性對(duì)照液制備缺少鹽酸麻黃堿的口服制劑作為陰性對(duì)照液（處方同咳爾康口服液），再按“2.2.2供試品溶液的配制”項(xiàng)下方法配制陰性樣品溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性與特異性考察分別取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照液、供試品溶液適量，進(jìn)樣20μl至色譜系統(tǒng)分析。觀察三份溶液中鹽酸麻黃堿的色譜峰情況。

2.4 線性關(guān)系考察精密移取濃度為1g?L-1的鹽酸麻黃堿對(duì)照品儲(chǔ)備溶液適量，用流動(dòng)相逐級(jí)稀釋為500、200、80、32、12.8、5.12、2.048mg?L-1等7個(gè)濃度級(jí)別的系列鹽酸麻黃堿對(duì)照品工作溶液，進(jìn)樣20μl至色譜系統(tǒng)分析，記錄各濃度的峰面積。

2.5 精密度考察配制低、中、高濃度（5.12、32、400mg?L-1）的鹽酸麻黃堿對(duì)照品工作溶液，每個(gè)濃度平行配制5份，分別進(jìn)樣20μl至色譜系統(tǒng)分析，記錄峰面積。

2.6 重復(fù)性考察取一個(gè)批次的供試品，按照“2.2.2供試品溶液的配制”項(xiàng)下方法配制供試品溶液，平行配制6份，進(jìn)樣20μl至色譜系統(tǒng)分析，記錄峰面積。

2.7 加樣回收率考察取同一份供試品溶液，已知其鹽酸麻黃堿含量為15.02mg?L-1，精密移取1ml，平行制備5份，分別加入同體積濃度為32mg?L-1的鹽酸麻黃堿對(duì)照品工作溶液，混勻，進(jìn)樣20μl至色譜系統(tǒng)分析，記錄峰面積。

2.8 穩(wěn)定性考察取同一份供試品溶液，分別在室溫下放置0、2、4、6、8h后測(cè)定，記錄色譜峰。

2.9 樣品含量測(cè)定將待測(cè)樣品按上述“2.2.2樣品溶液的配制”項(xiàng)下方法配制，取上述配制好的樣品溶液，進(jìn)樣20μl到色譜系統(tǒng)，記錄鹽酸麻黃堿的色譜圖，代入該批次標(biāo)準(zhǔn)曲線中，采用外標(biāo)法計(jì)算咳爾康口服液中鹽酸麻黃堿的含量。

3 結(jié)果

3.1 系統(tǒng)適用性與特異性該色譜系統(tǒng)條件下，鹽酸麻黃堿的保留時(shí)間為10.8min，理論塔板數(shù)及分離度良好。陰性對(duì)照液中無干擾峰干擾測(cè)定，對(duì)照液與供試液中鹽酸麻黃堿的保留時(shí)間一致，該方法特異性良好，不干擾測(cè)定。色譜圖情況如圖1所示。

3.2 線性關(guān)系鹽酸麻黃堿在2.048～500mg?L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，以鹽酸麻黃堿色譜峰面積為縱坐標(biāo)，以系列對(duì)照品工作溶液濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到線性回歸方程為Y=1.0818X+ 0.0011，相關(guān)系數(shù)為0.9993（n=7）。見圖2。

圖1 陰性對(duì)照液（A）、對(duì)照品溶液（B）、供試品溶液（C）的色譜圖

圖2 線性方程

3.3 精密度低、中、高濃度（5.12、32、400mg?L-1）的鹽酸麻黃堿的精密度良好，RSD分別為0.27%、0.76%、0.53%。詳見表1。

表1 鹽酸麻黃堿的精密度

3.4 重復(fù)性該方法測(cè)試鹽酸麻黃堿的重現(xiàn)性良好，RSD值為0.67%。詳見表2。

3.5 加樣回收率本實(shí)驗(yàn)所得平均加樣回收率為99.31%，RSD為0.90%。詳見表3。

3.6 穩(wěn)定性供試品溶液在室溫下放置8h后穩(wěn)定。

表2 測(cè)試鹽酸麻黃堿的重現(xiàn)性

表3 平均加樣回收率(mg?L-1,%)

3.7 樣品含量測(cè)定結(jié)果測(cè)得不同批次供試品鹽酸麻黃堿的含量如表4所示。

表4 鹽酸麻黃堿的含量測(cè)定結(jié)果(mg?L-1)

4 討論

近年來，我國中藥口服液的研究較為廣泛，種類及用量明顯增加?？葼柨悼诜菏窃跍珓┗A(chǔ)上改進(jìn)而得的口服液體制劑，服用方便、藥物吸收好、起效快、療效好，然而中藥口服液有效成分的檢測(cè)及分析還有待進(jìn)一步加強(qiáng)研究[3]。本文研究的是HPLC方法測(cè)定咳爾康口服液中鹽酸麻黃堿的含量。結(jié)合藥典中鹽酸麻黃堿項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，本文做了適當(dāng)?shù)姆椒ǜ倪M(jìn)，并對(duì)此方法進(jìn)行系統(tǒng)的方法學(xué)驗(yàn)證。本方法測(cè)定咳爾康口服液鹽酸麻黃堿的含量準(zhǔn)確、可靠，操作簡單、用時(shí)短，可用于咳爾康口服液中鹽酸麻黃堿的含量測(cè)定。

[1] 鞏麗虹,李孟全,程艷,等.咳爾康口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].醫(yī)學(xué)信息(上旬刊),2011,24(5)：2548-2549.

[2] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(2010年版第一部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010：301.

[3] 石秀梅,胡俊俊,李孟全,等.咳爾康口服液中鹽酸麻黃堿含量的測(cè)定[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2010,28(8)：1649-1650.

R927.2

A

1673-5846(2013)04-0209-03

牡丹江醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院藥劑科，黑龍江牡丹江 157009

黑龍江省教育廳攻關(guān)項(xiàng)目，編號(hào)：1151gzx11