不同廠家三黃片中鹽酸小檗堿溶出度的比較

陳曉蘭，石晉枝，張永萍，徐 劍，劉 毅

(貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽 550002)

三黃片是由大黃、黃芩浸膏和鹽酸小檗堿經(jīng)加工提取制成的糖衣片或薄膜片，可清熱解毒、瀉火通便，用于三焦熱盛所致目赤腫痛、口鼻生瘡、咽喉腫痛、牙齦腫痛、心煩口渴、尿黃、便秘，亦用于急性胃腸炎、痢疾[1]。其臨床應(yīng)用廣泛，生產(chǎn)廠家眾多，但各廠家生產(chǎn)條件和生產(chǎn)工藝的不同，臨床療效也不同。三黃片中鹽酸小檗堿是發(fā)揮抗菌消炎作用的主要成分，即三黃片中鹽酸小檗堿的含量及在體內(nèi)的釋放速度與程度都直接影響臨床療效。而在三黃片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有對鹽酸小檗堿等有效成分溶出度的控制指標(biāo)。本研究中測定了市場上10個廠家的三黃片中鹽酸小檗堿的溶出度[2]，計算溶出率且分別繪制累積溶出曲線，并對各溶出曲線進(jìn)行方程擬合，為三黃片的質(zhì)量評價提供參考和依據(jù)。

1 儀器與試藥

RC－80型藥物溶出測試儀(天津天光);紫外可見分光光度計(GBC Cintra，澳大利亞照生公司);AE/240型電子天平(上海梅特儀器有限公司);科導(dǎo)SK8210HP型超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司);JA2030型全自動天平(上海良平儀器表有限公司)。鹽酸小檗堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110713－200911);甲醇(色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司);鹽酸(重慶川東化工有限公司，批號為20101101);水為純化水。10個廠家樣品分別為:A廠家(襄樊隆中藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號為100901，50片/袋);B廠家(河南圣光集團(tuán)三恩藥業(yè)有限公司，批號為11051501，規(guī)格為50片/袋);C廠家(廣西恒拓集團(tuán)仁盛制藥有限公司，批號為100902，規(guī)格為50片/袋);D廠家(河南濟(jì)源濟(jì)世藥業(yè)有限公司，批號為20110917，規(guī)格為24片/盒);E廠家(亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號為110507，規(guī)格為20片/盒);F廠家(廣西金頁制藥有限公司，批號為100901，規(guī)格為50片/袋);G廠家(河南創(chuàng)新藥業(yè)有限公司，批號為1103211，規(guī)格為48片/袋);I廠家(陜西盤龍制藥集團(tuán)有限公司，批號為2011001，規(guī)格為24片/盒)。H廠家(安徽華佗國藥股份有限公司，批號為20110404，規(guī)格為24片/盒);J廠家(湖北仁悅藥業(yè)有限公司，批號為110803，規(guī)格為50片/袋)。前8種均為糖衣片，后兩種均為薄膜片。

2 方法與結(jié)果

2.1 測定波長選擇

取鹽酸小檗堿對照品溶液，在200～400 nm波長范圍進(jìn)行紫外掃描，選擇具有較大較穩(wěn)定吸收的波長345 nm為測定波長。

2.2 溶液制備

精密稱取鹽酸小檗堿對照品9.46 mg，加0.1 mol/L鹽酸溶液制成9.46 g/L的貯備液。再精密量取貯備液0.1 mL置10 mL容量瓶中，用 0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋并定容至 9.46 μg/mL，即得對照品溶液。取各廠家的三黃片各兩片，分別研細(xì)，倒入具塞錐形瓶中，精密加入甲醇－鹽酸(500∶1)的混合溶液60 mL，并用溶劑潤洗研缽，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足失重，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL，置25 mL容量瓶中用甲醇－鹽酸(500∶1)的混合溶液稀釋至刻度線，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:取鹽酸小檗堿對照品溶液，分別取鹽酸小檗堿的貯備液 0.05，0.10，0.30，0.50，0.70，0.90，1.10，1.30 mL 用0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋并定容至50 mL容量瓶中，以0.1 mol/L鹽酸溶液為空白對照，在345 nm波長處測定吸收度?；貧w方程為Y=45.367 X+0.035(R2=0.999 3)。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿質(zhì)量濃度在0.946～24.600 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度的線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取鹽酸小檗堿對照品溶液，重復(fù)測定6次。結(jié)果的 RSD=1.53%，表明儀器的精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批供試品，依法制備6份供試品溶液，測定吸光度。結(jié)果的 RSD=2.70%，表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一批供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，12 h時進(jìn)行測定。結(jié)果吸光度無明顯變化，RSD=1.27%，表明鹽酸小檗堿在甲醇－鹽酸(500∶1)的混合溶液中12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 樣品含量測定

按照2010版《中國藥典(一部)》，三黃片中鹽酸小檗堿的含量測定方法中供試品溶液制備方法處理供試品，在測定波長345 nm處測定吸收度，計算鹽酸小檗堿的含量，每個廠家平行測定2片，結(jié)果三黃片中鹽酸小檗堿平均含量分別為A廠家10.91 mg/片，B 廠家 24.70 mg/片，C 廠家 12.80 mg/片，D 廠家 15.54 mg/片，E 廠家 14.65 mg/片，F(xiàn) 廠家 12.48 mg/片，G廠家 16.30 mg/片，H 廠家 16.55 mg/片，I廠家 18.13 mg/片，J廠家 19.75 mg/片。

2.5 溶出度測定

溶出介質(zhì)選擇:取A廠家的三黃片3片，平行3份，分別放入水、0.1 mol/L鹽酸溶液及人工胃液(不含胃蛋白酶)等溶出介質(zhì)(經(jīng)超聲脫氣處理)中，溶出介質(zhì)體積為1 000 mL(符合漏槽條件)，轉(zhuǎn)速是100 r/min，(37±0.5)℃恒溫，將供試品置溶出杯中，開始計時，至規(guī)定時間(10，20，30，60，90，120 min)時取樣(取樣位置固定)，每次取樣5 mL(同時補(bǔ)加同溫度的上述溶出介質(zhì)5 mL)，趁熱過濾，取續(xù)濾液照2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅤA中紫外－分光光度法，即時測定吸收度。結(jié)果以0.1 mol/L鹽酸溶液為溶出介質(zhì)時，鹽酸小檗堿的累積溶出量最大。

溶出時間考察:取A廠家的三黃片1片，平行3份，溶出介質(zhì)為0.1 mol/L鹽酸溶液1 000 mL(經(jīng)超聲脫氣處理，符合漏槽條件)，轉(zhuǎn)速是100 r/min，(37±0.5)℃恒溫，將供試品置溶出杯中，開始計時，至規(guī)定時間(10，20，30，60，90，120，180，300 min)時取樣(取樣位置固定)，每次取樣5 mL(同時補(bǔ)加同溫度的上述溶出介質(zhì)5 mL)，趁熱過濾，取續(xù)濾液照2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅤA中紫外－分光光度法，即時測定吸收度。結(jié)果至120 min時多個廠家三黃片中鹽酸小檗堿的累積溶出量達(dá)最大值，至180min時鹽酸小檗堿的累積溶出量減少或不再增加，故測定溶出度的取樣時間為 10，20，30，60，90，120 min。

樣品溶出度測定:取各廠家三黃片1片，平行6份，溶出介質(zhì)為0.1 mol/L鹽酸溶液1 000 mL(經(jīng)超聲脫氣處理，符合漏槽條件)，轉(zhuǎn)速是100 r/min，(37±0.5)℃恒溫，將供試品置溶出杯中，開始計時，至規(guī)定時間(10，20，30，60，90，120 min)時取樣(取樣位置固定)，每次取樣5 mL(同時補(bǔ)加同溫度的上述溶出介質(zhì)5 mL)，趁熱過濾，取續(xù)濾液照2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅤA中紫外－分光光度法，即時測定吸收度。結(jié)果見圖1。

溶出方程擬合:通過數(shù)學(xué)模型對試驗(yàn)中的溶出數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，推測溶出機(jī)制。在藥物釋放研究中常用的數(shù)學(xué)模型有動力學(xué)模型，包括零級動力學(xué)模型、一級動力學(xué)模型、Weibull分布模型、Higuchi模型等[3－4]。結(jié)果見表 1。

3 討論

圖1 不同廠家三黃片累積溶出曲線(n=6)

表1 不同廠家三黃片中鹽酸小檗堿溶出模型擬合結(jié)果

雖然各廠家執(zhí)行的同一標(biāo)準(zhǔn)，但由于生產(chǎn)條件和生產(chǎn)工藝及輔料的不同，各廠家生產(chǎn)的三黃片中鹽酸小檗堿的含量測定結(jié)果存在明顯的差異。多數(shù)廠家的三黃片中鹽酸小檗堿在30 min時就能溶出50%，在2 h時溶出曲線可達(dá)到平衡，僅有J廠家能達(dá)到90%以上。另外除E廠家的三黃片外，其余均符合Weibull模型分布。然而中藥成分多樣復(fù)雜，其療效受多方面因素的影響，這些建立在西藥制劑上的溶出模型對中藥制劑的適用性還有待進(jìn)一步的考察。

在試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，鹽酸小檗堿的溶出度易受溫度的影響，在熱水中的溶解度較高而在冷水中的溶出度較低，在取出溶出液到測定的過程中若溫度降低，很有可能會使鹽酸小檗堿析出，溶出液中鹽酸小檗堿的濃度變小，導(dǎo)致測定時吸光度減小，試驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確。所以在試驗(yàn)過程中應(yīng)保證即取即測，盡量避免對試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。

本試驗(yàn)對不同廠家三黃片中鹽酸小檗堿的溶出度進(jìn)行了研究，分析不同廠家生產(chǎn)的三黃片的體外溶出度的差異，為三黃片的質(zhì)量控制和質(zhì)量提升奠定基礎(chǔ)，同時也為三黃片的臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:457.

[2]龔海紅.藥物溶出度試驗(yàn)的應(yīng)用概述[J].海峽藥學(xué)，2008，20(11):123－125.

[3]黎 陽.基于擬合方法的藥物溶出度數(shù)據(jù)的計算機(jī)處理[J].廣西民族學(xué)院學(xué)報:自然科學(xué)版，1998，4(3):46－47.

[4]蘇銀發(fā)，陳浩華，白學(xué)敏，等.Excel規(guī)劃求解法在藥物溶出模型擬合和優(yōu)選中的應(yīng)用[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27(6):839－841.