雞H9亞型禽流感、大腸桿菌病和球蟲(chóng)病混合感染的診治

牛長(zhǎng)義 劉國(guó)華 馬秀霞

（寧夏中衛(wèi)市動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，中衛(wèi) 755000）

中衛(wèi)市沙坡頭區(qū)一養(yǎng)雞戶飼養(yǎng)的商品育雛蛋雞先后出現(xiàn)以典型的大腸桿菌病病變、球蟲(chóng)病病變的疾病，以高死亡率為特征，但按大腸桿菌病和球蟲(chóng)病混合感染治療，效果不明顯。經(jīng)綜合診斷為H9亞型禽流感、大腸桿菌和球蟲(chóng)混合感染，采取防治措施后，有效遏止了疫病的繼續(xù)發(fā)生，防治效果良好。

1 發(fā)病情況

養(yǎng)雞戶張某2012年7月3日自陜西省某孵化場(chǎng)購(gòu)進(jìn)1日齡海蘭褐雛雞4000只，在30 m2炕面育雛，飼喂蛋雞育雛料，常規(guī)喂養(yǎng)。20日齡時(shí)將雞群轉(zhuǎn)移至2間房里搭建的1.3 m高，面積約50 m2的網(wǎng)上飼養(yǎng)。雞群隨著逐漸生長(zhǎng)，加之平網(wǎng)周邊圍扎的立網(wǎng)過(guò)低，約有2/5的雞飛過(guò)立網(wǎng)在地面上活動(dòng)（土地面）。觀察時(shí)，看到網(wǎng)上的雞群密度過(guò)大，極度擁擠，地面的雞到處亂竄，啄食地面的污物，雞舍內(nèi)粉塵飛揚(yáng)，空氣污濁，通風(fēng)不暢。飲水器、料桶不及時(shí)進(jìn)行清洗和消毒，雞舍內(nèi)未進(jìn)行過(guò)消毒，地面的糞污未進(jìn)行清理。雞群于8月4日（32日齡）開(kāi)始發(fā)病。表現(xiàn)為呼吸道癥狀。雞群發(fā)病后在當(dāng)?shù)孬F藥店買藥進(jìn)行過(guò)治療，曾選用過(guò)鎮(zhèn)咳滌毒靈、環(huán)丙沙星、呼毒殺、清熱散、黃芪多糖、三字球蟲(chóng)粉等，采用過(guò)維生素制劑和電解多維飲水。雞群發(fā)病初期應(yīng)用藥物治療尚有一定效果，但停藥后又繼續(xù)發(fā)病并不斷出現(xiàn)死亡，后期用藥沒(méi)有任何效果，且發(fā)病死亡數(shù)量不斷增加。雞群的防疫程序：3日齡時(shí)（5月30日）新城疫-支氣管炎二聯(lián)（Lasota-IBH120）弱毒苗，1.5頭份/只滴鼻，9日齡時(shí)肌注新城疫油苗0.3 ml/只，14日齡和21日齡時(shí)分別用法氏囊弱毒苗1頭份/只和1.5頭份/只滴口，8月6日又用新城疫-支氣管炎二聯(lián)（Lasota-IBH120）弱毒苗3頭份/只滴鼻。至8月10日，發(fā)病雞1800只，發(fā)病率45%，共死亡雞1100只，病死率61.11%。8月10日，養(yǎng)雞戶送病料進(jìn)行化驗(yàn)診斷，11日前往發(fā)病雞群進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查、現(xiàn)場(chǎng)診斷和病料采集，對(duì)發(fā)病雞群隨機(jī)翅靜脈采血20份分離血清進(jìn)行血清學(xué)診斷。8月18日和27日分別對(duì)本雞群的治療情況進(jìn)行了回訪觀察。

2 臨床癥狀

雞群采食量下降，體重輕，長(zhǎng)勢(shì)緩慢。發(fā)病雞群最初表現(xiàn)為僅有輕微的呼吸道癥狀，隨后出現(xiàn)呼嚕、啰音、咳嗽等明顯的、輕重不一的呼吸道癥狀，有的出現(xiàn)伸頸呼吸癥狀，精神不振，食欲下降，羽毛松亂，排出灰白色、土黃色或黃綠色的稀便或水樣便，部分排出暗褐色或紅色的血樣便；有的糞便中含有未消化的飼料。隨著病情的發(fā)展，病雞群飲水量增加，食欲廢絕，嗉囊中積有液體，雞群逐漸出現(xiàn)營(yíng)養(yǎng)不良，消瘦，縮頸閉眼，眼球凹陷，翅膀披散下垂，精神極度沉郁呈昏睡狀態(tài)。個(gè)別出現(xiàn)臉部腫脹，眼流淚。發(fā)病雞因衰竭而死亡，病程3～6 d。

3 病理變化

尸體消瘦，羽毛松亂，腿爪干燥缺乏彈性。有的皮下瘀血，肌肉呈紫色；有的肌肉呈現(xiàn)蒼白色。腹膜渾濁。有的肝臟瘀血，輕度腫脹，質(zhì)脆；有的肝臟表面覆蓋有薄膜狀灰白色凝固物，易剝離，肝腫脹、質(zhì)脆。有的胸、腹氣囊渾濁、增厚，呈白色或淡黃色毛玻璃樣；有的表面被覆有黃色干酪樣物，并與有關(guān)臟器相粘連。脾臟腫脹，呈暗紫色。腎臟腫脹、瘀血，部分腎臟內(nèi)有尿酸鹽沉積，呈花斑腎。鼻腔內(nèi)有粘液，喉頭和氣管內(nèi)有灰白色粘液；有的氣管出血，內(nèi)有干酪樣物。肺臟充血或出血，肺水腫。部分心臟冠狀血管周圍有散在或密集的出血點(diǎn)，有的心包膜擴(kuò)張，心包液渾濁，心外膜附有大量呈絨毛樣的纖維狀物。腸系膜混濁并有纖維素樣物粘連。有的腸粘膜充血、出血，呈廣泛性出血性腸炎；有的盲腸擴(kuò)張、腫脹，腸壁增厚，腸粘膜出血，內(nèi)容物為紅色血凝塊；有的小腸腸管膨大，腸壁增厚，粘膜腫脹，腸內(nèi)容物濃稠呈褐色或混有小血塊；在小腸漿膜上可見(jiàn)有密集的出血性潰瘍?cè)罨蛞?jiàn)到灰白色的小斑點(diǎn)；直腸有條紋狀出血；泄殖腔充血、出血，內(nèi)有石灰樣糞便。臉腫者見(jiàn)腫脹部位皮下有白色或淡黃色膠胨樣物浸潤(rùn)。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 腸粘膜刮取物檢查

刮取小腸、盲腸有病變部位的粘膜，放在載玻片上，滴加50%甘油生理鹽水1～2滴，充分調(diào)和均勻，加蓋玻片后用高倍鏡檢查，可見(jiàn)到大量呈球形橘子瓣?duì)畹牧阎丑w和呈香蕉形或月牙形的裂殖子以及圓形的卵囊。

4.2 病料涂片鏡檢

病死雞分別取心、肝、脾觸片，革蘭氏染色鏡檢，均見(jiàn)到革蘭氏染色陰性、兩端稍顯濃染、單個(gè)散在的短桿菌。

4.3 細(xì)菌分離和培養(yǎng)特性觀察

分別取上述病死雞的心、肝、脾、肺接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯、普通瓊脂、麥康凱瓊脂和伊紅-美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上，37℃24 h培養(yǎng)。營(yíng)養(yǎng)肉湯均勻一致混濁，管底可見(jiàn)絮狀沉淀物，表面有一層淡薄的菌膜；普通瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)出灰白色、表面隆起、中等大小的無(wú)色菌落；麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)出隆起、濕潤(rùn)、中等大小、粉紅色的菌落；伊紅-美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上長(zhǎng)出紫黑色帶金屬光澤的菌落。將上述培養(yǎng)物涂片、革蘭氏染色鏡檢，可見(jiàn)革蘭氏染色陰性、單在、兩端鈍園、中等大小的短桿菌，無(wú)芽胞和莢膜。分離菌符合大腸桿菌的培養(yǎng)特性。

4.4 生化試驗(yàn)

隨機(jī)選擇分離到的3株菌進(jìn)行生化鑒定。試驗(yàn)方法和判定結(jié)果按文獻(xiàn)[1]進(jìn)行。結(jié)果3株菌M.R和靛基質(zhì)均陽(yáng)性；V-P、H2S、尿素酶、檸檬酸鹽分解和明膠液化均陰性；分解葡萄糖、甘露醇、麥芽糖產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣；分解乳糖、山梨醇和阿拉伯糖產(chǎn)酸；蔗糖、衛(wèi)矛醇、水楊苷、棉子糖和鼠李糖產(chǎn)酸或不分解；不分解肌醇。3株菌均符合大腸桿菌生化反應(yīng)特性。

4.5 致病力試驗(yàn)

選取3株菌參照文獻(xiàn)[1]各做活菌計(jì)數(shù)后制成菌液備用。取臨床檢查健康的15日齡肉雜雛公雞20只，分為4組，5只/組；第1～3組為試驗(yàn)組，每組的每只雞分別腹腔接種第1～3株菌的菌液各0.2 ml/只（含菌1.0億）；第4組腹腔注射無(wú)菌生理鹽水0.2 ml作為對(duì)照組。接種后隔離飼養(yǎng)。結(jié)果3組試驗(yàn)雞在4～7日齡內(nèi)全部死亡，并從病料中回收到接種菌。對(duì)照組存活。

4.6 藥敏試驗(yàn)

采用藥敏紙片法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)測(cè)定，試驗(yàn)方法和判定標(biāo)準(zhǔn)按文獻(xiàn)[2]進(jìn)行。結(jié)果對(duì)慶大霉素、甲砜霉素、丁胺卡那霉素高度敏感；對(duì)卡那霉素、氟哌酸、新霉素、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、頭孢氨芐中度敏感；對(duì)鏈霉素、土霉素、強(qiáng)力霉素、氨芐青霉素、紅霉素、麥迪霉素和磺胺甲基乙噁唑不敏感。

4.7 禽流感血清亞型鑒定

用禽流感病毒H9亞型（抗原批號(hào)：201201，陽(yáng)性血清批號(hào)：201202）和H5亞型（H5Re-4抗原批號(hào)：201205，H5Re-5抗原批號(hào)：201202，陽(yáng)性血清批號(hào)：201201；均購(gòu)自哈爾濱獸醫(yī)研究所）標(biāo)準(zhǔn)抗原與20份分離血清進(jìn)行血凝抑制（HI）試驗(yàn)，試驗(yàn)操作及判定均按文獻(xiàn)[3]進(jìn)行。20份血清的H9和 H5HI檢測(cè)值分布結(jié)果見(jiàn)表。從檢測(cè)結(jié)果看，H5未檢測(cè)到抗體；H9檢測(cè)到了抗體，其中1∶16以上抗體陽(yáng)性率達(dá)到80%（16/20），最高達(dá)到1∶512。

4.8 新城疫抗體檢測(cè)

20份血清進(jìn)行了新城疫抗體檢測(cè)（抗原批號(hào)：20110321，陽(yáng)性血清批號(hào)：20110321，均購(gòu)自哈爾濱獸醫(yī)研究所），采用血凝抑制試驗(yàn)（HI）法，按照文獻(xiàn)[4]進(jìn)行操作及判定。20份血清的新城疫HI檢測(cè)值分布結(jié)果見(jiàn)表1。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，雞群新城疫血清HI效價(jià)在≥6log2的血清比例80%（16/20）。

表1 禽流感和新城疫抗體效價(jià)檢測(cè)結(jié)果

根據(jù)流行病學(xué)情況調(diào)查，臨床癥狀和病理變化觀察以及實(shí)驗(yàn)室診斷，雞群發(fā)病為H9亞型禽流感、大腸桿菌和球蟲(chóng)混合感染所致。

5 防治情況

5.1 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理

一是挑出瘦弱、精神差、無(wú)治療價(jià)值的病雞，一次性進(jìn)行淘汰深埋處理。二是將地面的雞全部清理上網(wǎng)，網(wǎng)養(yǎng)的雞大幅度降低飼養(yǎng)密度。三是加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，注意雞舍通風(fēng)換氣，雞舍溫、濕度適宜，增強(qiáng)雞體抵抗力。四是強(qiáng)化衛(wèi)生消毒措施，及時(shí)清理雞糞，進(jìn)行帶雞消毒，1次/日，連續(xù)消毒1周；對(duì)用具、食槽、水槽、污染場(chǎng)地嚴(yán)格消毒。五是盡可能減少各種應(yīng)激因素的刺激。

5.2 疫苗接種

所有雞群于8月12日全部緊急接種H9亞型禽流感疫苗，注射劑量為0.5 ml/只。

5.3 注意事項(xiàng)

鑒于這些雞群前期已大量使用了抗生素和抗病毒藥物，故注射H9亞型禽流感疫苗后3 d內(nèi)停喂一切抗生素和抗病毒藥物；給予亞硒酸鈉-維生素E和拜固舒飲水，每日各2次，按說(shuō)明連續(xù)應(yīng)用3 d。第4 d采用甲砜霉素按使用說(shuō)明飲水，連用3 d；強(qiáng)效氨丙啉按使用說(shuō)明書(shū)拌料混飼，連用5 d。第6 d開(kāi)始在飼料中加入健胃消食類中藥拌料混飼，連用5 d。

經(jīng)采取以上措施，在注苗后第7 d（8月18日齡）發(fā)病數(shù)逐漸減少，第9 d開(kāi)始，發(fā)病數(shù)明顯減少，第12 d后，除個(gè)別雞死亡外，雞群病情基本穩(wěn)定，不再出現(xiàn)新的發(fā)病死亡病例。

6 小結(jié)與討論

6.1 診斷過(guò)程

本病發(fā)生后，曾經(jīng)診斷為大腸桿菌病和球蟲(chóng)病，給予了抗生素和抗球蟲(chóng)藥物進(jìn)行治療，但并沒(méi)有有效的控制疫病的進(jìn)一步發(fā)生，證明診斷有誤。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀和病理變化觀察以及實(shí)驗(yàn)室診斷，確診本次雞群發(fā)病為H9亞型禽流感、大腸桿菌病和球蟲(chóng)病混合感染所致。經(jīng)分析認(rèn)為，應(yīng)把禽流感作為主要發(fā)生疾病來(lái)控制，采取了注射疫苗的辦法，對(duì)大腸桿菌病和球蟲(chóng)病采用敏感藥物進(jìn)行治療，并同時(shí)采取其他的防治措施，通過(guò)綜合性防治措施的應(yīng)用，有效控制了本次疫情的進(jìn)一步發(fā)生。

6.2 原發(fā)病確認(rèn)

中衛(wèi)市沙坡頭區(qū)在1999～2000年即發(fā)生H9亞型禽流感，為H9亞型禽流感疫區(qū)[5]。本次發(fā)病的雞群沒(méi)有進(jìn)行過(guò)H9亞型和H5亞型禽流感疫苗的免疫，雞體缺乏免疫保護(hù)力，由于疫源的長(zhǎng)期存在，雞群發(fā)生H9亞型禽流感在所難免，分析認(rèn)為H9亞型禽流感應(yīng)為原發(fā)病。同時(shí)，由于受雞群飼養(yǎng)密度大、雞舍空氣污濁、雞群與地面的糞污接觸、衛(wèi)生消毒措施不力等因素的影響，雞群在極差的環(huán)境條件中飼養(yǎng)，極易感染發(fā)生大腸桿菌病和球蟲(chóng)病。雞群發(fā)病后，由于沒(méi)有做出準(zhǔn)確診斷，未對(duì)H9亞型禽流感感染情況采取措施，只是針對(duì)大腸桿菌病和球蟲(chóng)病進(jìn)行治療，雖然應(yīng)用藥物治療后有一定的效果，但不能從根本上控制疫病的進(jìn)一步發(fā)生，并延誤了病情的控制。因此，如果不考慮控制禽流感而只考慮控制大腸桿菌病和球蟲(chóng)病，原發(fā)病在不能控制的前提下，既使選擇了對(duì)大腸桿菌病和球蟲(chóng)病高度敏感的藥物進(jìn)行治療，治療效果也不會(huì)理想，疫病會(huì)繼續(xù)發(fā)生。

6.3 H9亞型禽流感的發(fā)病特點(diǎn)

從H9亞型禽流感的發(fā)病特點(diǎn)觀察看[5]，育雛育成蛋雞（包括肉雞）感染后多表現(xiàn)為以呼吸道癥狀為主，發(fā)病率和死亡率較低，常診斷為其他病因引起的呼吸道疾病。養(yǎng)雞戶僥幸認(rèn)為育雛育成雞不易發(fā)生H9亞型禽流感，加之疫苗成本和注射疫苗工作量大等因素的影響，養(yǎng)雞戶只重視高致病性H5亞型禽流感的免疫，只重視產(chǎn)蛋雞群的免疫，而對(duì)育雛育成雞H9亞型禽流感的免疫不重視，不按程序進(jìn)行免疫。因此，養(yǎng)雞戶應(yīng)該按照免疫程序做好免疫的同時(shí)，做好H5和H9亞型禽流感病的免疫預(yù)防。否則，育雛育成雞在發(fā)生了H9亞型禽流感后，一方面，由于臨床癥狀不典型，不易做出正確診斷；另一方面，雞體由于免疫抵抗力差，易于繼發(fā)感染大腸桿菌病或其他疾病，常造成混合感染，給診斷和防治工作帶來(lái)更大困難。

[1]房海.大腸埃希氏菌[M].河北：科學(xué)技術(shù)出版社，1997.

[2]傅先強(qiáng)，劉占君等編.養(yǎng)禽場(chǎng)禽病檢驗(yàn)手冊(cè)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科技出版社，1997.

[3]中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T 18936-2003）.高致病性禽流感診斷技術(shù).

[4]中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB 16550-1996）.新城疫檢疫技術(shù)規(guī)范.

[5]韓梅英，劉國(guó)華，許衛(wèi)戈，等.雞H9亞型禽流感的發(fā)病特點(diǎn)與防治研究[A].中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第13次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C].長(zhǎng)沙：中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)，2006.