Her－2／neu和CD138在乳腺癌中表達及意義

陳 軍，胡永均，張?zhí)胰A，陳玲玲

（1.上海市嘉定區(qū)中心醫(yī)院 病理科，上海201800；2.上海市第六人民醫(yī)院金山分院）

乳腺癌是我國女性最常見的惡性腫瘤之一，癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移是影響乳腺癌患者預(yù)后的重要因素。癌細胞的侵襲轉(zhuǎn)移是一個非常復(fù)雜的過程，與細胞－細胞和細胞－細胞外基質(zhì)的黏附功能降低有關(guān)。CD138屬于Syndecans基因家族，是一類細胞表面跨膜蛋白多糖，作為膜表面黏附受體參與細胞與細胞及細胞－細胞外基質(zhì)之間的黏附。大量實驗研究表明，CD138促進了惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤及轉(zhuǎn)移［1－3］。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測乳腺癌和乳腺良性病變組織中CD138的表達，探討其與Her－2／neu的表達、乳腺癌轉(zhuǎn)移及各臨床病理因素之間的關(guān)系，以評價CD138在乳腺癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集我院1998－2005年手術(shù)切除

的乳腺癌根治標(biāo)本102例，患者均為女性，年齡25－75歲，包括浸潤性導(dǎo)管癌78例，導(dǎo)管內(nèi)癌9例，浸潤性小葉癌9例，特殊類型癌6例，并結(jié)合其相應(yīng)的臨床資料，按國際抗癌學(xué)會（UICC）及美國癌癥聯(lián)合會（AJCC）建議的TNM分期法（第六版）對其進行臨床分期，同時選擇15例乳腺良性腫瘤（纖維腺瘤）和15例正常乳腺組織（巨乳癥患者的乳腺組織）作對照。其中93例（91.18%）有完整隨訪資料，生存超過5年者70例（68.63%），超過10年者49例（48.04%）。所有標(biāo)本均經(jīng)中性10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片。

1.2 主要試劑和方法 Her－2／neu、CD138單克隆抗體，S－P試劑盒，DAB－酶底物顯色試劑購于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司，采用免疫組化的方法，按照公司試劑盒的操作步驟執(zhí)行。用已知陽性染色的乳腺癌切片為陽性對照片，用PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷 Her－2／neu陽性定位于細胞膜和（或）細胞質(zhì)內(nèi)，表達結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：－（無染色或少于10%細胞膜染色），＋（＞10%細胞有不完整胞膜染色），＋＋（＞10%細胞有較弱但完整的胞膜染色），＋＋＋（＞10%細胞有較強的完整胞膜染色），（－＋）視為無或低表達，（＋＋－＋＋＋）為過表達。CD138陽性定位于細胞膜和（或）細胞質(zhì)內(nèi)，在10×40倍光鏡下隨機觀察5個視野，計算其平均數(shù)，每個視野計數(shù)100個細胞，以整張切片陽性細胞＞25%為陽性（＋），＜25%為陰性（－）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 Her－2／neu、CD138在組織中的陽性表達率比較用卡方檢驗，相關(guān)性用Spearman相關(guān)分析（統(tǒng)計軟件STATA8.0）。

2 結(jié)果

2.1 Her－2／neu、CD138在乳腺正常組織，良性腫瘤及乳腺癌組織中的表達（表1）

表1 Her－2／neu、CD138在乳腺正常組織、良性腫瘤及癌組織中的表達

由上表可見，Her－2／neu在癌組織中的表達與正常乳腺組織和良性腫瘤中的差異有顯著性（P＜0.05），在不同種類的乳腺癌中無差異（P＞0.05），Her－2／neu在0期與Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ－Ⅳ期分別為30%、38.09%、59.18%、81.81%，Her－2／neu陽性表達與臨床分期之間：0期與Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ－Ⅳ期差異有顯著性（P＜0.05），陽性表達與患者5年生存率差異有顯著性（P＜0.05），在有轉(zhuǎn)移和無轉(zhuǎn)移組中差異有顯著性（P＜0.05）。此外，Her－2／neu陽性表達與年齡、腫瘤大小、ER、PR無關(guān)。

CD138在癌組織中的表達與正常乳腺組織和良性腫瘤中的差異有顯著性（P＜0.05），在不同種類的乳腺癌中無差異（P＞0.05），CD138在0期與Ⅰ期、Ⅱ 期、Ⅲ－Ⅳ 期 分 別 為 80%、66.67%、34.69%、18.18%，CD138陽性表達與臨床分期之間：0期與Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ－Ⅳ期差異有顯著性（P＜0.05），陽性表達與患者5年生存率差異有顯著性（P＜0.01），在有轉(zhuǎn)移和無轉(zhuǎn)移組中差異有顯著性（P＜0.05）。此外，CD138陽性表達與年齡、腫瘤大小、ER、PR無關(guān)。

圖1 Her－2／neu表達于乳腺癌細胞膜和細胞質(zhì)內(nèi)SP×200

圖2 CD138表達于乳腺癌細胞膜和細胞質(zhì)內(nèi)SP×200

2.2 Her－2／neu、CD138在乳腺癌中表達的相互關(guān)系 見表2。

表2 Her－2／neu、CD138在乳腺癌中表達的相互關(guān)系

由上表可見，Spearman相關(guān)分析rs＝－0.259，P值為0.009＜0.01，顯示兩者在乳腺癌中的表達相關(guān)。

3 討論

CD138（Syndecans－1）基因是黏附分子整合素跨膜黏結(jié)蛋白的聚糖家族成員，人類基因位于2號染色體，亦稱蛋白聚糖，存在于所有哺乳動物中，是細胞間質(zhì)、細胞質(zhì)膜的重要組成成分。一般認(rèn)為，硫酸乙酰肝素與胞外配體的結(jié)合是CD138功能活性的關(guān)鍵。這些配體主要包括多肽生長因子、胞外基質(zhì)蛋白、細胞–細胞黏附分子、酶和其他蛋白（膠原Ⅰ、Ⅲ和Ⅴ型、層黏連蛋白、替拿素、纖黏連蛋白等）［4］。CD138具有一系列功能：①生長因子受體激活的調(diào)節(jié)。CD138的表達水平可直接影響肝素結(jié)合生長因子家族（如FGF）、肝細胞生長因子（HGF）、肝素－結(jié)合表皮生長因子（EGF）、血管內(nèi)皮生長因子等與受體的結(jié)合。②參與細胞－胞外基質(zhì)黏附。介導(dǎo)細胞黏附到胞外基質(zhì)蛋白的主要受體為整合素家族受體，但胞外基質(zhì)蛋白還具有結(jié)合起來糖胺聚糖的能力，尤其是硫酸乙酰肝素。實驗證明，細胞能利用整合素和CD138雙受體來介導(dǎo)細胞－胞外基質(zhì)的黏附，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖增加了結(jié)合作用的總的強度。③促進細胞－細胞間黏附。細胞可通過其表面的CD138與鄰近細胞上的受體如血小板內(nèi)皮細胞黏附因子、L－選擇素等結(jié)合達相互黏附目的。④與細胞移行有關(guān)。CD138表達量減少或缺失可降低細胞－基質(zhì)間黏附力，加速細胞的移行。CD138是一種跨膜蛋白聚糖，可表達在各種來源的腫瘤細胞表面，包括骨髓瘤、卵巢癌，乳腺癌、肝癌、霍奇金淋巴瘤及某些HIV有關(guān)的淋巴瘤。在正常細胞惡變后，細胞膜表面CD138分子的表達常發(fā)生改變，并且與腫瘤的惡性程度、預(yù)后有一定相關(guān)性［2、3］。

本研究顯示乳腺癌組織中CD138陽性表達率為42.16%，顯著低于乳腺良性高變組織的表達率100.00%（P＜0.01）；CD138在高中分化、低分化乳腺癌中陽性表達率分別為47.5%和22.72%，分化程度越高，表達越強（P＜0.05）；在臨床分期組中分期越高，其表達降低，差異有顯著性（P＜0.05）；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達（33.85%）顯著低無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（56.75%，P＜0.05），這與史偉峰等［5］研究的結(jié)果一致，提示乳腺癌細胞CD138表達降低或缺失導(dǎo)致腫瘤細胞與細胞，細胞與細胞外基質(zhì)黏附功能降低，細胞生長接觸抑制功能喪失，導(dǎo)致瘤細胞大量增殖，具有侵襲性，這可能與乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

Her－2／neu基因又稱 C－erbB－2基因，是一種原癌基因，主要在胚胎發(fā)育時開始表達，成年后正常組織可檢到少量表達。位于人第17號染色體長臂，分子量為185KD的跨膜糖蛋白，具有酪氨酸激酶的活性［6］，而氨基酸的序列和結(jié)構(gòu)與表皮生長因子受體（EGFR）同源，故又稱為人表皮生長因子相關(guān)基因，參與調(diào)控細胞生長、增殖及分化，其產(chǎn)物過度表達與腫瘤惡性程度高、生長快、預(yù)后差相關(guān)。應(yīng)用DNA雜交分析法發(fā)現(xiàn) Her－2／neu只在腺癌中擴增，而Her－2／neu在乳腺癌中的擴增率為其他腺癌的3倍［7］。以上研究表明，Her－2／neu的表達對乳腺癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移和早期發(fā)現(xiàn)有重要意義。本研究顯示Her－2／neu在乳腺良性病變中的表達率低（6.67%），而在乳腺癌組織中的陽性表達率可達56.86%，差異有高度顯著性，與一些研究［8］結(jié)果一致，表明Her－2／neu與乳腺癌惡性程度有關(guān)，隨著陽性表達率的增高，惡性程度也增高。故它對良惡性病變有一定的鑒別診斷價值。本實驗還發(fā)現(xiàn)Her－2／neu在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌中的陽性率（66.15%）明顯高于無轉(zhuǎn)移者（43.24%），差異有高度顯著性。有學(xué)者［8］認(rèn)為乳腺癌中 Her－2／neu的表達不僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，而且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目相關(guān)。并對292例原發(fā)性乳腺浸潤癌中的Her－2／neu蛋白染色，證實Her－2／neu擴增及蛋白表達與組織分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度、死亡率、復(fù)發(fā)率呈正相關(guān)。其他學(xué)者也有相同的報道［8－10］。本實驗結(jié)果與以上學(xué)者的研究結(jié)果相吻合，這表明Her－2／neu表達與乳腺癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況一樣可以作為評估乳腺癌患者預(yù)后指標(biāo)之一。

雌激素對女性生殖器官（包括陰道、子宮、輸卵管、卵巢）及乳腺的生長、發(fā)育起著最為關(guān)鍵的作用，而且對男性的睪丸功能、精子發(fā)生以及附后屬性器官也極為重要。本研究發(fā)現(xiàn)，CD138、Her－2／neu在乳腺癌組織中的表達與ER無關(guān)，對乳腺癌激素治療的判斷意義不大，與Tang等［11］報道一致。

本研究發(fā)現(xiàn)，CD138和 Her－2／neu密切相關(guān)，CD138在乳腺癌組織中低表達時 Her－2／neu高表達，乳腺癌組織中低表達時Her－2／neu高表達，表達率增高，CD138陽性表達率下降，二者呈負相關(guān)（P＜0.01）。兩者在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，在腫瘤診斷、病情進展、轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后的評價等方面具有很大的潛在價值。因此，隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，癌基因研究的不斷深入，相信該基因?qū)Π┑念A(yù)測、診斷、治療、預(yù)后的價值會得到更為全面的認(rèn)識。

［1］Kambham N，Kong C，Longacre TA，et al.Utility of Syndecans－1（CD138）expression in the diagnosis of undifferentiated malignant neoplasms：a tissue microarray study of 1754case［J］.Appl Immunhistochem Mol Morphol，2005，13（4）：304.

［2］Rintala M，Inki P，Klemi P，et al.Association of Syndecans－1with tumors for grade and histoiogy in primary invasive cervical carcinoma［J］.Gynecol Oncol，1999，75（3）：372.

［3］Attonen A，Kajanti M，Heikkila P，et al.Syndecans－1expression has prognostic significance in head and neck carcinoma［J］.Br J Cancer，1999，79（3－4）：558.

［4］Stanley MJ，Stanley MW，Sanderson RD，et al.Syndecans－1expression is induced in the stroma of infiltrating breast carcinoma［J］.Am J Clin Pathol，1999，112（3）：377.

［5］史偉峰，張學(xué)光，陳同鈺.細胞粘附分子CD138在乳腺癌的表達及意義［J］.中國檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2002，25（4）：245.

［6］Chambers AF，Matrisian LM，Changing Views of the roles of matrix metalloproteinase in metastasis［J］.J Nafi Cancer Znst，1997，89：1260.

［7］Maker AP，Desmdt EJ，Potter CR，et al.Neu（C－erbB－2）oncogene in breast cancer and its possible association the rick of distant metastasis［J］.Acta Oncol，1990，29（2）：931.

［8］唐利立，劉少華，李景和，等.Her－2／neu在新輔助化療乳腺癌中的表達及其意義［J］.中國腫瘤臨床，2001，28（3）：508.

［9］張愛鳳，蘇 寧.乳腺癌基因和抑癌基因的研究進展［J］.臨床和實驗病理學(xué)雜志，1999，14（2）：174.

［10］張 斌，李艷萍，馬 特，等.若干生物學(xué)指標(biāo)對淋巴結(jié)陰性乳腺癌預(yù)后意義的評價Her－2／neu在新輔助化療乳腺癌中的表達及其意義［J］.中國腫瘤雜志，2000，22（4）：298.

［11］Tang SC，Shehata N，Chemenko，et al.Expression of bag－1in invasive breast carcinoma［J］.J Clin Oncol，1999，17（6）：3721710.