正交試驗優(yōu)選五倍子軟膏處方

王 磊，程 嵐，楊躍輝

五倍子(Galla chinensis)，為不同的倍蚜科Pemphigidae昆蟲在其寄主植物漆樹科或其他樹上不同的特定部位形成的蟲癭［1］。在我國四川、貴州、陜西、云南、湖南、湖北6省產量較高，占全國總產量90%以上［2］。五倍子中的主要有效成分為鞣質［3］，為我國傳統(tǒng)中藥，具有斂肺降火、澀腸止瀉、固精縮尿、止汗、止血、解毒、斂瘡等多種功效?，F(xiàn)代藥理研究證明，五倍子還有抗菌、抗病毒、抑突變、癌化學預防、清除自由基、抗氧化、收斂等作用［4］。根據(jù)臨床需要，我們研制了五倍子提取物軟膏劑，并采用正交設計法進行了處方優(yōu)化，為五倍子外用制劑研究提供參考。

1 儀器、試藥及色譜條件

1.1 藥品與試劑 五倍子(豪州市中藥飲片廠，批號:1202011)、凡士林(沈陽紅旗制藥有限公司，批號:1202011)、羊毛脂(湖南爾康制藥有限公司，批號:20110501)、蜂蠟(國藥集團化學試劑有限公司，批號:20100910)、span-80(國藥集團化學試劑有限公司，批號:F20080203)、甘油(南昌白云藥業(yè)有限公司，批號:20111211)、薄荷醇(國藥集團化學試劑有限公司，批號:F20110811)。

1.2 儀器 T1000型電子天平(美國雙杰兄弟有限公司)、LD5-2A型離心機(北京醫(yī)用離心機廠)、SK2105多功能電磁爐(美的)、HN101-2AS型數(shù)顯不銹鋼電熱鼓風干燥箱(南通滬南科學儀器有限公司)、恒溫水浴鍋(金壇市瑞華儀器有限公司)、冰箱(海爾)、R2000型流變儀、安捷倫1100高效液相色譜儀。

2 方法與結果

2.1 處方工藝(軟膏制備)

2.1.1 處方有效成分的提取與精制 五倍子提取液制備［5］:將200 g五倍子打碎，加6倍量蒸餾水煎煮，提取2次，每次煎煮2 h，合并提取液，過濾，濾液濃縮至相對密度為1.02(50℃)以上。

2.1.2 五倍子軟膏的處方及工藝 配制方法:根據(jù)處方，五倍子提取液、凡士林、羊毛脂、蜂蠟、span-80、甘油、薄荷醇共制成1 200 g軟膏。按表1的設計分別將油相、水相置于燒杯中，水浴加熱熔化至85℃，保溫，再將油相緩緩加入水相中，不斷攪拌成乳膏，冷凝，即得。主藥有3種加入方式:加入水相中;加入油相中;加入兩相之中。

2.2 處方因素及其水平的選擇 在本配方中，五倍子軟膏由五倍子提取液、薄荷醇、凡士林、蜂蠟、羊毛脂、span-80、甘油組成。通過考察以上處方因素，確定了以蜂蠟、span-80、藥物加入方式為3個影響因素，每個因素安排3個水平，因此，本試驗按L9(34)正交表進行實驗，其中D列設計成空列，以便進行方差分析。實驗方案見表1。

表1 因素水平表

2.3 考察指標

2.3.1 外觀考察 觀察膏體外觀性狀，包括稠度、色澤、細膩度、涂展性等。

2.3.2 離心實驗 分別取各成品5 g，于10 mL離心管內，以3 000 r/min離心30 min，觀察軟膏分層情況。

2.3.3 耐熱耐寒實驗 分別取各成品5 g，置于塑料軟膏盒內，盒外用塑料袋密封，分別置于45℃恒溫烘箱6 h，－18℃低溫冰箱24 h，觀察膏體變化情況。

2.3.4 評分標準 根據(jù)“2.3”項考察指標對實驗結果進行評分，每項滿分20分，最后對各項得分進行加權綜合評分，滿分100分，評分標準見表2。

表2 五倍子軟膏處方評分標準

2.4 流變學參數(shù)測定［6］取五倍子軟膏適量，采用AR2000型流變儀的 Flow Curve Yield Fluid lin測試模式，剪切速率1～100/s，數(shù)據(jù)點100，測試溫度25℃，轉子PLATE。結果見圖1。

圖1 五倍子提取物軟膏流變學測定

2.5 正交實驗結果與分析

2.5.1 試驗結果 五倍子提取物軟膏成品的外觀性狀觀察、離心實驗(3 000 rpm)與不同溫度下穩(wěn)定性考察結果，及其綜合評價見表3。

表3 試驗方案與實驗結果

2.5.2 結果分析 (1)直觀分析:水平優(yōu)劣依次為 A2＞A3＞A1、B3＞B2＞B1、C2＞C3＞C1，因素主次順序為 B＞C＞A。結果最佳處方為 A2B3C2。(2)方差分析:方差分析結果見表4。由方差分析結果可知，B、C因素對五倍子軟膏穩(wěn)定性具有顯著性影響，A因素對其穩(wěn)定性影響較小，主要是影響膏體的外觀性狀，影響順序為B＞C＞A。結合直觀分析和方差分析結果，確定最佳處方配比為A2B3C2，即:蜂蠟2%，span-80 4%，加藥方式加入油相。

表4 正交試驗方差分析表

2.5.3 流變學 結果表明，所制備五倍子提取物膏屬于假塑性流體，具有剪切變稀的特性;具有觸變性，觸變滯后回環(huán)面積較小，觸變測試過程中體系結構能恢復而未出現(xiàn)不可逆破壞;具有一定的黏性，能兼顧生產灌裝涂抹使用及穩(wěn)定性的要求。

2.6 優(yōu)化處方的驗證 根據(jù)篩選結果，按最優(yōu)組方A2B3C2制備3批五倍子軟膏，按2.3項下考察指標進行試驗，以驗證五倍子軟膏的穩(wěn)定性。結果見表5。結果表明該處方工藝穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，合理、可行。

表5 優(yōu)選處方的驗證

2.7 含量測定 經(jīng)實驗確定了以下色譜條件對以上3批軟膏采用HPLC法進行沒食子酸的含量測定。流動相:甲醇-1%磷酸水(5∶95，v∶v);流速:1.0 mL/min;檢測波長:273 nm;柱溫:30℃;進樣量:20 μL。結果3批軟膏沒食子酸含量測定的結果分別為55.57%、54.54%、53.52%。結果表明，五倍子軟膏含量穩(wěn)定，處方制備工藝合理可行。

3 討論

本組方為中藥W/O型乳膏劑，油性基質熔點較低，高溫易分層，而且乳劑儲存過程中也易出現(xiàn)乳析分層現(xiàn)象，針對其穩(wěn)定性較差的情況，采用離心分層、耐溫試驗、外觀性狀及流變學參數(shù)等作為穩(wěn)定性的考察指標，對軟膏處方工藝進行考察，同時測定了3批軟膏的主藥含量。

采用正交設計實驗可以明顯減少試驗次數(shù)，但數(shù)據(jù)統(tǒng)計過程較為復雜，故在試驗過程中，考察因素應選擇準確，并合理設置水平，保證試驗條件與操作平行性。正交實驗優(yōu)選結果表明，乳化劑的用量是配制五倍子提取物的關鍵，其比例為4%時配出的膏劑更加穩(wěn)定，外觀柔軟、細膩、光亮美觀;組方中主藥為中藥五倍子，而且五倍子提取物濃縮液粘度較大，其加入到基質中的方式對乳膏的穩(wěn)定性也有一定的影響;蜂蠟的用量主要影響軟膏的外觀，其用量對乳膏穩(wěn)定性的影響較小。該實驗優(yōu)選結果表明，最優(yōu)處方的成品不僅外觀優(yōu)良，且經(jīng)不同溫度下放置后外觀性狀較穩(wěn)定，符合中國藥典2010年版軟膏劑項下有關規(guī)定。

［1］ 馮淑萍，王曉娟，薛妮娜.五倍子生藥學研究［J］.現(xiàn)代中藥研究與實踐，2008，22(5):24-26.

［2］ 李紅然，付大友.五倍子中有效成分提取方法研究進展［J］.廣東化工，2010，37(10):71.

［3］ 周勁光.五倍子的藥理作用與臨床研究進展［J］.海峽藥學，2010，22(4):30-32.

［4］ 李秀萍，李春遠，渠桂榮，等.五倍子的研究概況［J］.中醫(yī)藥學報，2002，30(3):72-74.

［5］ 楊君，楊躍輝，姜清華.五倍子軟膏制備工藝優(yōu)化研究［J］.中華中醫(yī)藥學刊，2011，29(11):2579-2581.

［6］ 關志宇，王森，管詠梅，等.黃連軟膏處方優(yōu)化與流變學考察［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18(9):10-13.