慢性粒細胞白血病不同藥物治療后樹突細胞的變化

李 爽，顧 敏，劉卓剛，郝良純，王 弘

慢性粒細胞白血病(Chronic myelocytic leukemia，CML)屬于骨髓增生疾病，是一種由多能干細胞病變所致、以粒細胞系統(tǒng)無限制增生為特征的白血?。?］。病程發(fā)展較慢，患者中數(shù)生存期40個月左右。樹突細胞(Dendritic cell，DC)是一種重要的抗原呈遞細胞(Antigen presenting cell，APC)，是體內(nèi)最強的腫瘤免疫載體。DC通過巨胞飲、受體介導的內(nèi)吞方式及吞噬3種方式攝取抗原與主要組織相容性復合物-Ⅱ(Major histocompability complex，MHC)、MHC-Ⅰ類分子結(jié)合形成 MHC-Ⅱ、MHC-Ⅰ抗原肽復合物激活CD4+、CD8+T細胞，產(chǎn)生細胞毒性T細胞作用(Cytotoxic t lymphocyte，CTL)，具有顯著的抗腫瘤作用［2］。本實驗通過檢測干擾素 α(Interferon-α，IFN-α)、伊馬替尼(Imatinib)、羥基脲(Hydroxycarbamide，HU)3 種藥物治療后慢性粒細胞白血病患者體內(nèi)樹突細胞(Dendritic cells，DC)的含量變化，觀察3種藥物的抗腫瘤作用，為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2008年1月至2012年1月，我院血液科收治的經(jīng)骨穿及融合基因確診的慢性粒細胞白血病患者，均無髓外腫瘤浸潤，隨機分為3組，選擇不同方法規(guī)律治療(無間斷用藥，外周血白細胞維持在正常范圍內(nèi))3～12個月的慢性期患者26例。其中單獨應用羥基脲9例，年齡48～72歲，中位年齡62.3歲;應用IFN-α 8例，年齡45～74歲，中位年齡63.7歲;應用伊馬替尼9例，年齡46～72歲，中位年齡62.8歲。正常人對照組9例，年齡43～75歲，中位年齡63.3歲。四組一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

1.2 實驗方法 取流式試管，加入Lin1 20 μL及Anti-HLA-DR 10 μL。采患者抗凝外周血 2～3 mL，搖勻，取其中200 μL血加入流式試管中，不要碰到管壁，輕輕混勻，室溫避光保存15 min。取出試管，每管加入10倍稀釋的FACS Lysing Solution 2 mL，輕輕混勻，避光10 min。待管內(nèi)液體透亮。然后1 300 r/min離心5 min，棄去上清液。每管加入2 mL PBS，輕輕混勻，1 300 r/min離心5 min，棄去上清液。然后加入0.5 mL PBS混勻，置暗處保存，1 h內(nèi)上機檢測。檢測在CellQuest軟件，圈定門，以對照管確定陰性范圍，F(xiàn)SC v SSC界定出外周血中單個核細胞區(qū)，LIN1(包括 CD3、CD14、CD16、CD19、CD20、CD56)表達陰性和 HLADR表達陽性界定排除T、B、NK細胞，圈定外周血DC。然后檢測試驗管。分析細胞含量。

1.3 統(tǒng)計分析 采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計學處理。計量資料以±s表示，兩組間比較使用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

羥基脲組外周血DC含量與正常組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);伊馬替尼組、IFN-α組與正常人組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);伊馬替尼組、IFN-α組與羥基脲組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);IFN-α組和伊馬替尼組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見表1。

表1 不同治療組外周血DC含量(%)

3 討論

慢性粒細胞白血病(CML)是一種由多能干細胞病變所致、以粒細胞系統(tǒng)無限制增生為特征的惡性血液腫瘤。病程發(fā)展較慢，如果能長期維持在慢性期，可以很大程度上延緩患者的生存時間。而DC是一種重要的APC，是體內(nèi)最強的腫瘤免疫載體，具有顯著的抗腫瘤作用。患者應用不同治療后，體內(nèi)DC的含量可以代表體內(nèi)腫瘤免疫、抗腫瘤的狀態(tài)。

羥基脲是一種核苷二磷酸還原酶抑制劑，可阻止核苷酸還原為脫氧核苷酸，干擾嘌呤及嘧啶堿基生物合成，選擇性地阻礙DNA合成，對RNA及蛋白質(zhì)合成無阻斷作用。作用于DNA合成期細胞，是一種周期特異性抗腫瘤藥物。在CML患者中單純服用羥基脲組外周血DC含量明顯下降。說明在瘤負荷狀態(tài)下，體內(nèi)腫瘤抗原遞呈及抗腫瘤作用的下降。

干擾素是天然的細胞因子，有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)及誘導分化的作用。應用IFN-α治療慢性粒細胞白血病可以使慢性期及生存時間均顯著延長，有效地治療CML，延長患者生存時間。但IFN-α治療CML的機制尚不清楚。有研究認為，IFN-α在CML中的治療反應與抗CML特異性T細胞的存在呈高度相關性，提示IFN-α引起的臨床反應可能與促進CML自體白血病特異性效應T細胞的擴增有關，而DC作為效應最強的抗原遞呈分子，在免疫調(diào)節(jié)中處于中心地位，能有效刺激T細胞的增殖［3］，提示 IFN-α可能通過 CML來源 DC(CML-DC)發(fā)揮作用，上調(diào)CML-DC共刺激分子及MHC-Ⅰ抗原分子的表達，從而促進T細胞免疫反應。以上研究都是基于體外IFN-α對DC的培養(yǎng)或是體外培養(yǎng)出的DC加入IFN-α再刺激而得出的結(jié)論［4-5］。并不能說明IFN-α對體內(nèi)DC的作用及臨床注射IFN-α治療CML的真正機制。本實驗基于以上原理直接檢測CML患者注射IFN-α后患者體內(nèi)外周血DC的含量，結(jié)果表明，IFN-α治療后體內(nèi)DC含量也明顯增加，說明IFN-α可以直接作用于體內(nèi)DC，增強DC增殖，從而發(fā)揮IFN-α抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)的作用。同樣，Sato［6］研究證實，伊馬替尼作為特異性的酪氨酸激酶抑制劑，是目前有效的靶向治療CML的藥物［7］，除了對表達Bcr/Abl細胞直接作用外，還上調(diào)Ph+CML外周血單核細胞來源的DC協(xié)同刺激因子的表達，可培養(yǎng)出典型 DC，且 HLA-DR、CD86、CD83表達水平較對照組顯著增加，刺激同種T淋巴細胞增殖能力比對照組增強。本實驗證實患者服用伊馬替尼后體內(nèi)外周血DC的含量明顯增加，表明伊馬替尼可以直接作用于體內(nèi)DC，增強DC增殖從而發(fā)揮其抗腫瘤的作用。

綜上所述，CML患者體內(nèi)DC含量明顯減少，抗腫瘤作用下降，而伊馬替尼和IFN-α可促使體內(nèi)DC增殖，從而達到抗腫瘤的作用。兩者間促使DC增殖的作用無顯著差異。

［1］ Schiffer CA.BCR-ABL tyrosine kinase inhibitors for chronic myelogenous leukemia［J］.N Engl J Med，2007，357(3):258-265.

［2］ 劉俊峰，何志旭，沈冬，等.樹突細胞骨髓瘤疫苗的體外抗腫瘤活性［J］.實用兒科臨床雜志，2008，3(23):176-178.

［3］ Molldrem JJ，LeePP，Wang C.Evidence that specific T lymphocytes may participate in the elimination of chronic myelogenous leukemia［J］.Nat Med ，2000，6:1018-1023.

［4］ Korthals M，Safaian N，Kronenwett R.Monocyte derived dendritic cells generated by IFN-alpha acquire mature dendritic and natural killer cell properties as shown by gene expression analysis［J］.Transl Med，2007，25(1):46.

［5］ 金潔，鄭水兒，童向民.干擾素-α聯(lián)合GM-CSF誘導慢性髓性白血病細胞向樹突狀細胞分化［J］.中國病理生理雜志，2006，22(3):481-485.

［6］ Sato N，Narita M，Takahashi M.The effects of ST1571 on antigen presetation of dendritic cells generated from patients with chronic myeloid leukemia［J］.Hematol Oncol，2003，21:67-75.

［7］ Bumbea H，Vladareanu AM，Voican I，et al Chronic myeloid leukemia theray in the era of tyrosine kinase inhibitors-the first molecular targeted treatment［J］.J Med Life，2010，3(2):162-166.