HPLC法測(cè)定金振口服液中大黃素和大黃酚含量

曹云飛?吳小峰　蔡芳?殷黎霞

摘 要 目的 高效液相色譜法測(cè)定金振口服液中大黃素和大黃酚的含量。方法 色譜柱：Symmetry C18柱（3.9 mm ×150mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸85：15；流速：1mL/min；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm[2]；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：1 0μL。結(jié)果 本法可用來(lái)測(cè)定金振口服液中大黃素和大黃酚的含量。分別在0.0100～0.1045μg和0.0253～0.2783μg范圍內(nèi)成線性關(guān)系，平均回收率分別為98.81%和98.24%。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，可作為金振口服液質(zhì)量控制的方法。

關(guān)鍵詞 金振口服液 液相色譜法 大黃素 大黃酚

金振口服液主要由羚羊角、平貝母、大黃、黃芩等組方而成，具有清熱解毒，祛痰止咳。主要用于小兒痰熱蘊(yùn)肺所致的發(fā)熱、咳嗽、咳吐黃痰、咳吐不爽、舌質(zhì)紅、苔黃膩；小兒急性支氣管炎等癥狀，臨床應(yīng)用較為廣泛?！秶?guó)家藥典》2010年版一部[1]中通過(guò)控制黃芩中黃芩苷的含量以控制金振口服液的質(zhì)量。由于本品中大黃含量較多，而大黃中主要含有大黃素、大黃酚、大黃酸等成分，大黃素別名朱砂蓮甲素，化學(xué)名為1，3，8-三羥基-6-甲基蒽醌，分子式為C15H10O5，來(lái)源于蓼科植物虎杖的干燥根莖和根，具有抗菌、止咳、抗腫瘤、降血壓等作用；大黃酚又名大黃根酸，化學(xué)名為1，8-二羥基-3-甲基蒽醌，分子式為C15H10O4，有明顯的止咳作用。測(cè)定金振口服液中大黃素、大黃酚的含量有助于判斷藥用效力。本文參照文獻(xiàn)[2，3]本文采用HPLC法同時(shí)對(duì)金振口服液中大黃素和大黃酚的含量進(jìn)行測(cè)定，該法簡(jiǎn)便，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀、工作站（美國(guó)安杰侖公司）。

1.2 試劑

大黃素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110756-200110）；大黃酚對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110796-200615）；甲醇（國(guó)藥集團(tuán)色譜純）；其余試劑為國(guó)藥集團(tuán)分析純；金振口服液（江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)120401，120901，121201）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Symmetry C18柱（3.9 mm ×150mm，5μm）[4]；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸85：15；流速：1.0ml/min；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm[5]；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：1 0μL；在此條件下大黃素峰的理論塔板數(shù)為7502，大黃酚峰的理論塔板數(shù)為8020；大黃素與大黃酚峰的分離度為6.23。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別精密稱取大黃素和大黃酚對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇—醋酸乙酯（2：1）適應(yīng)溶解并定量稀釋成含大黃素95.0μg /mL和大黃酚210.8μg /mL的貯備液。分別精密量取大黃素貯備液5mL，大黃酚貯備液6mL，用無(wú)水乙醇—醋酸乙酯（2：1）定量稀釋至50mL，制成對(duì)照品的在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，測(cè)定峰面積值（A），并以A對(duì)進(jìn)樣濃度（C）進(jìn)行回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。大黃素線性關(guān)系見(jiàn)表1，大黃酚線性關(guān)系見(jiàn)表2，色譜圖見(jiàn)圖1。

2.3 供試品溶液的制備

取本品2 mL，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷[6，7]，再稱重量，用甲醇補(bǔ)減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液15mL，置燒瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇—鹽酸（10：1）溶液15mL，置水浴中加熱水解1h，立即冷卻，用氯仿強(qiáng)力振搖提取4次，每次15mL，合并氯仿液，在水浴上蒸干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇—醋酸乙酯（2：1）溶解，移至20mL容量瓶中，稀釋至刻度，即得。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液（含大黃素9.50μg /mL和大黃酚25.30μg /mL），分別于0，4，8，12h在上述色譜條件下測(cè)定，峰面積基本不變。其中，大黃素的RSD為0.33%，大黃酚的RSD為0.35%。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

取對(duì)照品溶液（含大黃素9.50μg /mL和大黃酚25.30μg /mL），在上述色譜條件下連續(xù)測(cè)定5次，大黃素RSD為0.1%，大黃酚的RSD為0.1%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

按照擬訂的含量測(cè)定方法，取同批號(hào)樣品5份，分別制備樣品供試液，在上述色譜條件下測(cè)定5次，大黃素的RSD為0.7%，大黃酚的RSD為1.1 %。

2.7 回收率試驗(yàn)

取6份已知含量的樣品，分別加入大黃素和大黃酚對(duì)照品貯備液1ml，按2.3中所述方法操作，在上述色譜條件下測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3，表4。

2.8 空白試驗(yàn)

按處方比例稱取除了大黃以外的其它幾味藥[8]，按制備工藝制成供試液，照樣品測(cè)定法測(cè)定，在主成分出峰處無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖2。

2.9 樣品測(cè)定

對(duì)同一廠家不同批號(hào)樣品的含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5，色譜圖見(jiàn)圖3。

3 結(jié)論與討論

采用高效液相色譜法測(cè)定金振口服液中大黃素和大黃酚的含量，在0.0100～0.1045μg和0.0253～0.2783μg范圍內(nèi)成線性關(guān)系，平均回收率分別為98.81%和98.24%。該方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，可作為金振口服液質(zhì)量控制的方法。

在制備供試品溶液時(shí)，參考《中國(guó)藥典》2010年版一部中大黃的藥材處理方法。筆者還曾分別采用超聲30min，處理樣品，結(jié)果所測(cè)含量與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比，含量較低。

通常大黃蒽醌類的檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，選用該波長(zhǎng)測(cè)定，其它組分及輔料無(wú)干擾。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中曾嘗試乙腈-甲醇- 0.1%磷酸（44：46：33） [9] ，乙腈-水-冰醋酸（60：40：1） ，甲醇-0.2%磷酸（80：20）為流動(dòng)相，經(jīng)比較得知選用甲醇-0.1%磷酸（85：15），比例最佳，峰形及柱效較好。

參考文獻(xiàn)

[1] 中華人民共和國(guó)藥典一部[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.22-23.

[2] 陳敬然，謝飛，尹曉飛，等.高效液相色譜法測(cè)定牛黃解毒滴丸中大黃素和大黃酚含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，04（1）：2-3.

[3] 竇金鳳.HPLC法同時(shí)測(cè)定女金膠囊中黃芩苷和丹皮酚的含量[J].中國(guó)藥師，2012，03（5）：40-42.

[4] 竇金鳳，曹云飛.HPLC法測(cè)定腎衰寧膠囊中大黃素和大黃酚的含量[J].黑龍江中醫(yī)藥，2007，10（10）：52-54.

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[6] 倪曉霓，楊燕飛.反相高效液相色譜法測(cè)定感特靈膠囊中黃芩苷的含量[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2004，08（30）：30-32.

[7] 楊水清，張尚斌，洪志勇.HPLC法測(cè)定保肝寧顆粒中大黃素的含量[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2007，03（20）：23-24.

[8] 譚朝陽(yáng)，尤昭玲. HPLC法測(cè)定化癥回生口服液中大黃素和大黃酚的含量[J].湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2004，6（52）：92-93.

[9] 原永芳，劉愛(ài)波，金山叢，等.新脂康口服液中大黃素和大黃酚的HPLC法定量分析[J].中國(guó)藥師，2004，12（12）：940-942.