油茶提取物對陰道毛滴蟲的殺滅實驗

【摘 要】目的：研究油茶果皮（60%丙酮提取物、30%醇洗脫物、60%醇洗脫物）和油茶籽（60%丙酮提取物、85%醇洗脫物）體外對陰道毛滴蟲的殺滅作用，評價它們的抗性病作用。方法：按照衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002年版）第二部分“消毒劑殺微生物實驗”中的方法和操作程序，結(jié)合陰道毛滴蟲的特點進行試驗，觀察藥物的抗性病作用。結(jié)果：油茶果皮30%醇洗脫物在50mg/ml作用5分鐘時，不能殺滅陰道毛滴蟲。油茶果皮60%丙酮提取物在25mg/ml作用5分鐘時，有殺滅陰道毛滴蟲作用。油茶果皮60%醇洗脫物在6.25mg/ml作用5分鐘時，有殺滅陰道毛滴蟲作用。油茶籽60%丙酮提取物、油茶籽85%醇洗脫物在3.125mg/ml作用5分鐘時，即有殺滅陰道毛滴蟲作用。這一結(jié)果為將油茶進一步開發(fā)成抗性病藥物提供實驗依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】油茶；抗性病作用；陰道毛滴蟲

油茶（Camellia oleifera Abel.）系山茶科（Theaceae）山茶屬油茶組植物。在我國分布廣產(chǎn)量大，資源非常豐富[1]。中國有油茶面積3660000公頃，年產(chǎn)油茶種子645000噸[2]。將油茶的果皮稱為油茶果皮；種子稱為油茶籽，即茶子心；種子的脂肪油稱茶油；榨去脂肪油的殘渣稱茶麩。本草綱目記載：茶籽苦寒， 可治療急喘咳嗽， 去痰垢[3]?，F(xiàn)代藥理研究表明，油茶籽具有抗菌[4]、抗突變[5]、抗癌[6]，以及抑制心腦血管疾病[7-9]、毒殺軟體動物及魚[3，10]等作用。過去，油茶常被用來榨油，而榨出脂肪油后，油茶果皮和茶麩就變成了工廠的廢料，無人問津，殊屬可惜。為了能開發(fā)和綜合利用這一豐富的自然資源，在前期研究工作的基礎(chǔ)上我們對油茶果皮（60%丙酮提取物、30%醇洗脫物、60%醇洗脫物）和油茶籽（60%丙酮提取物、85%醇洗脫物）體外殺滅陰道毛滴蟲的作用進行了觀察，為將油茶進一步開發(fā)成抗性病藥物提供依據(jù)?，F(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1 實驗部分

1.1 實驗材料

陰道毛滴蟲臨床株，于南京市婦幼保健醫(yī)院臨床取材數(shù)株，經(jīng)實驗室滅菌、分離，得到純培養(yǎng)的陰道毛滴蟲蟲株。

油茶果皮和籽于2005年11月采自廣西壯族自治區(qū)燕洞鄉(xiāng)，并經(jīng)大連大學(xué)中醫(yī)中藥系高松教授鑒定為Camellia oleifera Abel.，批號為20051101。

供試樣品體外試驗以泰氏液配成所需濃度混懸液，在體試驗以2%羧甲基纖維素鈉配成所需濃度。

1.2 實驗方法

1.2.1 供試樣品制備

油茶果皮60%丙酮提取物：稱取油茶果皮1000g，60%丙酮-水回流提取3次，1h/次[11]，合并提取液，回收溶劑至干，備用。

油茶果皮30%醇洗脫物：將油茶果皮60%丙酮提取物用蒸餾水混懸流經(jīng)D101型大孔吸附樹脂，然后用30%乙醇進行洗脫，所得洗脫液回收溶劑至干，備用，又稱油茶果皮多元酚富集物。

油茶果皮60%醇洗脫物：將油茶果皮60%丙酮提取物用蒸餾水混懸流經(jīng)D101型大孔吸附樹脂，然后用60%乙醇進行洗脫，所得洗脫液回收溶劑至干，備用。

油茶籽60%丙酮提取物：將榨油后的油茶籽再用石油醚脫脂三次，用60%丙酮-水回流提取剩余物3次，1h/次[12]，合并提取液，回收溶劑至干，備用。

油茶籽85%醇洗脫物：將油茶籽60%丙酮提取物用蒸餾水混懸流經(jīng)D101型大孔吸附樹脂，然后用85%乙醇進行洗脫，所得洗脫液回收溶劑至干，備用，即為油茶皂素。（含量在95%以上）

1.2.2 實驗方法

1.2.2.1 檢驗依據(jù)：按照衛(wèi)生部《消毒技術(shù)規(guī)范》2002年版第二部分“消毒劑殺滅微生物實驗”中的方法和操作程序，根據(jù)陰道毛滴蟲特點進行試驗。

1.2.2.2 毛滴蟲懸液：105/ml；

1.2.2.3 樣品配制：實驗前按要求將各藥物配制成100mg/ml的混懸液。方法是先經(jīng)超聲溶解成混懸狀態(tài)，再用無菌蒸餾水倍比稀釋，常規(guī)配成50、25、12.5、6.25、3.125mg/ml濃度的混懸液待用；

1.2.2.4 溶劑：將甲醇用無菌蒸餾水倍比稀釋，常規(guī)配成50、25、12.5%濃度的稀釋液待用；

1.2.2.5 作用時間：5分鐘；

1.2.2.6 殘留樣品的去除用稀釋法（毛滴蟲液體培養(yǎng)基作為稀釋液）；

1.2.2.7 實驗室溫度：19℃±2；

1.2.2.8 實驗重復(fù)次數(shù)：2次；

2 實驗結(jié)果

2.1 殘留樣品稀釋離心法去除的鑒定試驗（見表1）

2.2 陰道毛滴蟲的殺滅試驗（見表2）

3 實驗結(jié)論

3.1 甲醇濃度在為25%與滴蟲作用5分鐘時，無殺滅陰道毛滴蟲作用。

3.2 油茶果皮30%醇洗脫物濃度在50mg/ml作用5分鐘時，不能殺滅陰道毛滴蟲。

3.3 油茶果皮60%丙酮提取物濃度在25 mg/ml作用5分鐘時，有殺滅陰道毛滴蟲作用。

3.4 油茶果皮60%醇洗脫物濃度在6.25 mg/ml作用5分鐘時，有殺滅陰道毛滴蟲作用。

3.5 油茶籽60%丙酮提取物、油茶籽85%醇洗脫物濃度在3.125 mg/ml作用5分鐘時，有殺滅陰道毛滴蟲作用。

參考文獻(xiàn)：

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6.26辦理

本課題為大連市科技計劃項目，編號：2007A13GX037。