甘石青黛膏對大鼠亞急性濕疹模型皮損的影響

孫占學(xué)　趙麗娟　張豐川　李元文

濕疹是由多種內(nèi)外致病因素引起的一種具有滲出傾向的皮膚炎癥反應(yīng)，屬于IV型變態(tài)反應(yīng)[1]。皮疹表現(xiàn)為紅斑、丘疹、水腫、水皰、結(jié)節(jié)、表皮剝脫、苔蘚化等多型性損害，伴有劇烈瘙癢，易復(fù)發(fā)。濕疹屬于中醫(yī)“濕瘡”范疇，是皮膚科常見難治性疾病。北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院應(yīng)用甘石青黛膏治療濕疹多年，臨床療效顯著。本課題主要從實(shí)驗(yàn)角度進(jìn)行研究，以大鼠亞急性濕疹模型為研究對象，從皮損紅斑、水腫、表皮剝脫、苔蘚化等方面進(jìn)行療效觀察，為研究中藥甘石青黛膏治療濕疹作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠40只，4～5周齡健康，雄性，清潔級(jí)，體重(290±6)g，購于北京北京維通利華動(dòng)物中心，合格證號(hào)：0220333,許可證號(hào)：SCXK(京)2006-0009。

1.2　藥物與試劑

治療藥物：甘石青黛膏，處方組成(以下藥物為道地藥材飲片粉碎成微粉后稱取的重量)：煅石膏38.6 g、爐甘石25 g、滑石110.8 g、青黛6.5 g、枯礬6.5 g、苦參128.8 g、冰片12.8 g。另稱取白凡士林537 g，應(yīng)用水浴箱加熱熔化，待冷卻至40～50 ℃，加入上述微粉，攪勻，自然冷卻后，分裝密封，10 g/盒，其中含生藥38%。

對照藥物：白凡士林，批號(hào)：蘇衛(wèi)藥準(zhǔn)字(82)第3014-1，南京長江石化有限公司。

主要試劑：硫化鋇，硫化鈉，2.4-二硝基氯苯(dinitrochloro-benzo,DNCB)，98%戊巴比妥鈉，丙酮，醫(yī)用淀粉，液態(tài)氮，福爾馬林溶液。

1.3　分組與模型制備

常規(guī)飼養(yǎng)大鼠7天后，隨機(jī)分為2組，安慰劑組、甘石青黛膏組每組20只。兩組大鼠體重比較沒有顯著性差異，具有可比性。飼養(yǎng)過程中甘石青黛膏組死亡2只，安慰劑組死亡1只。

造模方法參考文獻(xiàn)[2-3],略有更改。

脫毛：給予2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，在每只大鼠背部標(biāo)記甲乙兩處，甲處面積約0.5 cm×0.5 cm，乙處面積約1 cm×1 cm，兩處間隔2 cm；應(yīng)用剪刀剪除長毛，應(yīng)用備皮刀刮凈鼠毛，再用6%硫化鈉混合適量淀粉糊涂抹在剃毛區(qū)，等待4分鐘，然后應(yīng)用紗布蘸溫水輕輕揩去硫化鈉淀粉糊。

造模：剃毛區(qū)甲處涂7%的2，4-二硝基氯苯丙酮溶液致敏。2周后，在安慰劑組、甘石青黛膏組剃毛乙處涂0.1%的2，4-二硝基氯苯丙酮溶液，每周激發(fā)1次，療程4周。

大鼠亞急性濕疹模型造模成功后，大鼠背部皮損均出現(xiàn)紅斑、丘疹、結(jié)痂、少許滲出、部分皮損表現(xiàn)表皮剝脫、鱗屑。組織病理表現(xiàn)為表皮細(xì)胞內(nèi)水腫，棘層增厚，角化過度及角化不全，血管周圍淋巴細(xì)胞浸潤。

1.4　藥物干預(yù)

甘石青黛膏組予甘石青黛膏外涂干預(yù)。于造模成功次日，繼續(xù)常規(guī)飼養(yǎng)之外，在剃毛區(qū)乙處，甘石青黛膏外涂干預(yù)治療，每次取藥0.6 g(即0.15 g/cm2)，輕輕按摩10圈，以不黏膩為度，每日涂藥2次，療程2周。

安慰劑組予白凡士林干預(yù)，干預(yù)方法同甘石青黛膏組。

1.5　觀察指標(biāo)與療效評(píng)定方法

大鼠亞急性濕疹模型皮損判定指標(biāo)：具有紅斑、丘疹、結(jié)痂、少許滲出、表皮剝脫、鱗屑。

皮損療效評(píng)定方法：皮損的評(píng)分采用趙辨濕疹面積及嚴(yán)重度指數(shù)(eczema area and severity index，EASI)評(píng)分法[4]，臨床表現(xiàn)分為4項(xiàng)，即：紅斑、硬腫(水腫)/丘疹、表皮剝脫、苔蘚化。每一臨床表現(xiàn)的嚴(yán)重度評(píng)分參考Berth-Jones[5-6]的六區(qū)域六體征異位性皮炎評(píng)分法。即以0～3分計(jì)分，0=無，1=輕，2=中，3=重，各種癥狀分值之間可記半級(jí)分，即0.5。

皮損總體療效評(píng)定方法：參照《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》(試行)療效判定標(biāo)準(zhǔn)，略作改動(dòng)，僅以皮疹(紅斑、水腫、表皮剝脫、苔蘚化)治療前后的總積分變化來判斷療效，分4級(jí)判定。計(jì)算公式(尼莫地平法)為：[(治療前積分-治療后積分)/治療前積分]×100%。臨床痊愈：皮損基本全消退，癥狀積分減少95%。顯效：皮損大部分消退，95%>癥狀積分減少≥70%。有效：皮損部分消退，70%>癥狀積分減少≥50%。無效：皮損消退不明顯，癥狀積分減少不足50%?？傆行?(痊愈+顯效)例數(shù)/總例數(shù)×100%

1.6　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2　結(jié)果

2.1　皮損療效評(píng)定

兩組大鼠濕疹模型在干預(yù)前皮損積分比較經(jīng)t檢驗(yàn)，P>0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

干預(yù)之后，安慰劑組紅斑、水腫、表皮剝脫較治療前有所改善，經(jīng)t檢驗(yàn)P>0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而苔蘚化改善明顯，經(jīng)t檢驗(yàn)P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

甘石青黛膏組紅斑、水腫、表皮剝脫、苔蘚化較治療前均有明顯改善，經(jīng)t檢驗(yàn)P<0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

甘石青黛膏組治療后和安慰劑組治療后，在紅斑、水腫、表皮剝脫、苔蘚化相比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，P<0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，甘石青黛膏療效優(yōu)于安慰劑。

表1　甘石青黛膏和安慰劑對大鼠濕疹模型皮損的

注：與甘石青黛膏組治療前比較，aP>0.05；與安慰劑組治療前比較，bP>0.05，cP<0.05；甘石青黛膏組治療后與治療前比較，dP<0.05；甘石青黛膏組治療后和安慰劑組治療后比較，eP<0.05。

2.2　皮損總體療效評(píng)定

兩組大鼠濕疹模型干預(yù)后皮損均有不同程度的改善，其中，安慰劑組總有效率為42.10%，甘石青黛膏組總有效率為72.22%，經(jīng)Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，Z=-2.124,P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

表2　兩組皮損總體療效比較

3　討論

中醫(yī)外治濕疹多選用清熱解毒、祛風(fēng)止癢、收斂生肌等藥物，外治之法在濕疹治療過程中占有重要地位，中藥外治濕疹具有直達(dá)病所，迅速止癢，劑型變化靈活等特點(diǎn)，非常適合濕疹的多形性損害伴瘙癢劇烈特征。本課題采用中藥甘石青黛膏為治療藥物干預(yù)大鼠濕疹模型皮損，研究結(jié)果表明甘石青黛膏對于消除紅斑、水腫，促進(jìn)表皮修復(fù)以及消除鱗屑方面具有較好的療效，總有效率為72.22%，明顯高于安慰劑療效(42.10%，P<0.01)。另外，本課題采用在大鼠背部進(jìn)行濕疹造模方法，一方面濕疹皮損面積大，利于觀察皮損，解決既往研究以大鼠或小鼠耳部為濕疹造模部位，皮損局限之弊；另一方面，分別從紅斑、水腫、表皮剝脫、苔蘚化等皮損進(jìn)行逐項(xiàng)觀察、療效評(píng)定以及總體療效判定，比較全面反映甘石青黛膏治療濕疹效果。甘石青黛膏為中草藥制劑，主要成分為煅石膏、爐甘石、滑石、青黛、枯礬、苦參、冰片等。其中青黛清熱解毒，現(xiàn)代研究青黛具有抑制角質(zhì)細(xì)胞增殖作用；煅石膏、滑石粉、煅爐甘石能收斂止癢；苦參燥濕止癢，具有殺菌效果；冰片、枯礬清涼止癢、軟堅(jiān)散結(jié)[7-8]。諸藥共同發(fā)揮清熱燥濕、祛風(fēng)止癢功效。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明甘石青黛膏可以明顯控制紅斑、水腫、表皮剝脫及苔蘚化，療效顯著。但是甘石青黛膏以凡士林膏為基質(zhì)，主要成分含有青黛，應(yīng)用后皮膚黏膩，染衣著色，給應(yīng)用帶來不便。下一步準(zhǔn)備從基質(zhì)改良，藥物脫色方面進(jìn)行研究，以利于推廣。

[1]趙辨.臨床皮膚病學(xué)[M].3版.南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社, 2001:604.

[2]Boyera N, Caver D,Bouclier M, et al.Repeated application of dinitrochlorobenze to the ears of sensitized guinea pigs: Apreliminary characterization of a potential new animal model for contact eczema in humans[J].Skin Pharmacol，1992，5(3)：184-188.

[3]蘆源,關(guān)洪全.小鼠背部慢性皮炎—濕疹模型的初步研究[J]. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2009,11(10):181-182.

[4]趙辨. 濕疹面積及嚴(yán)重度指數(shù)評(píng)分法[J]. 中華皮膚科雜志,2004,37(1):3-4.

[5]Berth-Jones J. Six area six sign atopic dermatitis(SASSAD) severity score: a simple system for monitoring disease activity in atopic dermati-tis[J]. Br J Dermatol, 1996,135 (Suppl48):25-30.

[6]Fuchibe K Nabe T，F(xiàn)ujii M，et a1．Delayed type allergic itch-associated response induced by toluene-2,4-diisocyanate in hairless mice[J]．J Pharma-col Sci,2003,93(1):47-54.

[7]李楠,張豐川,李元文.復(fù)方甘石青黛膏治療皮炎濕疹的臨床觀察[J].環(huán)球中醫(yī)藥,2009，2(4)：280-281.

[8]孫占學(xué),李元文,李曰慶,等.甘石青黛膏治療神經(jīng)性皮炎66例臨床療效觀察[J].中華中醫(yī)藥雜志, 2010，25(11)：1849-1851.