C型尿鈉肽在動物繁殖過程中的作用研究進展

賈振偉 張家新 安磊 吳中紅 田見暉

（1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)動物科技學(xué)院，通遼 028000；2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，北京 100193；3.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，呼和浩特 010018）

C型尿鈉肽（C-type natriuretic peptide，CNP）與心房鈉尿肽（atrial natriuretic peptide，ANP）和腦鈉肽（brain natriuretic peptide，BNP）同屬于尿鈉肽家族成員，最初于1990年在豬的大腦中被分離提純［1］，廣泛分布于動物大腦、腎臟、心臟及血管等組織，具有維持心血管系統(tǒng)功能穩(wěn)態(tài)、調(diào)控細(xì)胞增殖及促進骨骼生長等作用。值得注意的是，近年在小鼠中研究發(fā)現(xiàn)卵泡壁層顆粒細(xì)胞能夠分泌CNP，通過結(jié)合卵丘顆粒細(xì)胞上的受體產(chǎn)生cGMP進入卵母細(xì)胞，從而維持高水平cAMP抑制卵母細(xì)胞減數(shù)分裂［2］。目前，家畜卵母細(xì)胞體外成熟后發(fā)育能力較差，為了促進胞質(zhì)成熟、提高體外發(fā)育能力，國內(nèi)外普遍采用減數(shù)分裂抑制劑處理卵母細(xì)胞，然后進行體外成熟、受精及胚胎培養(yǎng)，但是一般認(rèn)為這些減數(shù)分裂抑制劑沒有促進卵母細(xì)胞體外發(fā)育，甚至產(chǎn)生了不利的影響。CNP由22個氨基酸殘基組成，是生理性多肽物質(zhì)，相對于化學(xué)合成的減數(shù)分裂抑制劑危害性應(yīng)較小，將可能替代傳統(tǒng)的減數(shù)分裂抑制劑用于建立家畜卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)體系。此外，最近研究發(fā)現(xiàn)，CNP能夠促進小鼠卵泡發(fā)育，而且增加了促性腺激素處理后的排卵數(shù)量［3］?；谝陨习l(fā)現(xiàn)，我們認(rèn)為CNP在作為生理活性的減數(shù)分裂抑制劑促進家畜卵母細(xì)胞體外發(fā)育及超數(shù)排卵增強劑提高超排效率方面將具有潛在的利用價值。

1 C型尿鈉肽結(jié)構(gòu)

CNP是由22個氨基酸殘基組成的多肽（CNP-22），其核心部分含有一個由17個氨基酸通過二硫鍵組成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，此結(jié)構(gòu)環(huán)能夠與受體結(jié)合，對維持CNP生物活性十分重要［4］。CNP是鈉肽家族中最保守的成員，不僅物種間氨基酸序列高度一致，而且前體氨基酸序列也高度保守。例如，在牛、人、豬和小鼠中，成熟CNP氨基酸序列基本一致。人類的CNP前體（proCNP）含有103個氨基酸殘基，細(xì)胞內(nèi)蛋白酶furin可用于proCNP產(chǎn)生具有生物功能的由53個氨基酸組成的多肽（CNP-53）［5］。在某些組織中，CNP-53被一種未知的細(xì)胞外酶分解為CNP-22。體內(nèi)成熟的CNP以CNP-53和CNP-22兩種形成存在，其中CNP-22為循環(huán)的活性形式，而CNP-53為其儲存形式，CNP主要以CNP-22形式發(fā)揮生物學(xué)作用［6］。

2 C型尿鈉肽受體

目前，普遍認(rèn)為哺乳動物鈉尿肽家族有3種受體：NPR1、NPR2和NPR3（或NPRA、NPRB和NPRC）。NPR1、NPR2為鳥苷酸環(huán)化酶偶聯(lián)受體（也稱GC-A、GC-B受體），NPR-3為鈉肽清除受體。鈉尿肽主要通過NPR-1和NPR-2受體介導(dǎo)發(fā)揮生物學(xué)作用，激活偶聯(lián)的鳥苷酸環(huán)化酶，使GTP轉(zhuǎn)化為cGMP調(diào)控下游靶物質(zhì)。研究認(rèn)為CNP是目前已知唯一的NPR-2天然配體，其結(jié)合NPR2的能力比ANP大50倍，比BNP大500倍［7］。NPR3與3種鈉肽結(jié)合能力基本一致。

NPR2蛋白細(xì)胞膜外結(jié)構(gòu)與生長因子受體相似，大約由450氨基酸殘基組成，主要起連接CNP的作用，跨膜區(qū)域為20-25氨基酸殘基序列，細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)由大約570個氨基酸殘基組成。而且，細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)由激酶同型區(qū)域（KHD）、卷曲螺旋狀的二聚體及鳥苷酸環(huán)化酶催化區(qū)域組成。

3 C型尿鈉肽作用機制

CNP與受體NPR2膜外蛋白區(qū)域結(jié)合后，使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的KHD去磷酸化、構(gòu)象發(fā)生變化，同時結(jié)合ATP激活鳥苷酸環(huán)化酶，將GTP轉(zhuǎn)化為cGMP，然后激活下游信號通路。一般認(rèn)為CNP引起細(xì)胞內(nèi)反應(yīng)依賴第二信使cGMP，目前研究證實cGMP能夠結(jié)合3種蛋白激活下游生理反應(yīng)，分別為cGMP依賴蛋白激酶G（PKG）、cGMP結(jié)合磷酸二酯酶（PDEs）、環(huán)核苷門控離子通道蛋白。

當(dāng)前對CNP通過cGMP轉(zhuǎn)導(dǎo)的信號通路研究比較清楚的是激活具有絲氨酸、蘇氨酸激酶活性的PKG引起生物學(xué)反應(yīng)［8］。PKG基因有PKGI、PKGII兩種亞型。PKGI屬于細(xì)胞內(nèi)溶質(zhì)，主要在血小板、平滑肌、心臟及大腦表達，研究表明同源重組敲除PKGI基因?qū)е滦∈笱芷交∷沙诩坝g小鼠血壓升高［9］；PKGII主要位于細(xì)胞膜上，在腸、腎臟、軟骨組織、大腦及骨骼表達較高，敲除PKGII基因?qū)е滦∈蠛痛笫笊L矮?。?0］。磷酸二酯酶（PDEs）家族主要由11個成員組成，能夠降解環(huán)核苷酸為5'核苷一磷酸，是環(huán)核苷酸的關(guān)鍵調(diào)控者。目前研究認(rèn)為，cGMP能夠引起PDEs構(gòu)象發(fā)生變化，調(diào)控其活性。例如，cGMP結(jié)合PDE5后促進了cGMP的分解，PDEs構(gòu)象變化也能激起cAMP和cGMP信號對話。例如，cGMP結(jié)合PDE2導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)cAMP含量下降；相反，cGMP抑制PDE3活性，增加細(xì)胞內(nèi)cAMP含量。

此外，cGMP也能通過調(diào)控環(huán)核苷門控離子通道蛋白介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)反應(yīng)。這些離子通道蛋白C端含有環(huán)核苷位點結(jié)合區(qū)域，能夠結(jié)合cAMP或cGMP。但是，目前CNP與環(huán)核苷門控離子通道蛋白相關(guān)聯(lián)的功能數(shù)據(jù)尚未見報道。

4 C型尿鈉肽在動物繁殖過程中的作用

Sudoh 等［11］首先對豬大腦中的CNP進行了分離鑒別，隨后研究確認(rèn)其為神經(jīng)遞質(zhì)及心血管肽，由此推測CNP可能參與動物繁殖機能調(diào)控。

4.1 C型尿鈉肽在雄性動物繁殖過程中的作用

4.1.1 C型尿鈉肽在雄性動物生殖器官上表達 Middendorff 等［12］研究發(fā)現(xiàn)，CNP和受體在人類睪丸中均有表達。El-Gehani 等［13］研究結(jié)果顯示，CNP在胎兒期大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)表達；近年研究發(fā)現(xiàn)大鼠出生時CNP表達量較多，然后逐漸下降，在出生后35 d表達再次增加［14］。小鼠出生后CNP表達模式與大鼠相似，出生時表達量較高，然后逐漸下降，在出生后20 d表達再次增加。Nielsen等［15］采用放射免疫方法檢測了公豬多種組織的CNP蛋白表達量，發(fā)現(xiàn)CNP在附睪、生精囊泡和前列腺等生殖器官含量最高，并且mRNA在附睪、生精囊泡比其他組織高125倍。以上研究結(jié)果說明CNP在調(diào)控雄性動物繁殖過程方面可能具有重要作用。

4.1.2 C型尿鈉肽在雄性動物繁殖過程中的調(diào)控 Chrisman等［16］研究發(fā)現(xiàn)CNP增加了豬精液的cGMP水平。由此推測CNP可能通過促進cGMP產(chǎn)生調(diào)控睪丸的內(nèi)分泌功能。隨后研究證明CNP能夠促進睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮的分泌，同時也參與睪丸間質(zhì)細(xì)胞和支持細(xì)胞功能的調(diào)控［17，18］。另外，CNP還可能以旁分泌的方式通過影響曲細(xì)精管的舒張來調(diào)控精子的傳遞和睪丸血液的供應(yīng)。此外，普遍認(rèn)為cGMP不僅能夠調(diào)控睪丸的自分泌和旁分泌功能，同時也對陰莖勃起功能有影響。在兔子和大鼠中，CNP通過結(jié)合海綿體細(xì)胞膜上的NPR2受體，引起陰莖平滑肌肌肉細(xì)胞的松弛。Küthe等［19］發(fā)現(xiàn)，NPR2受體在人的陰莖海綿體組織中表達，說明CNP對陰莖勃起有作用。此外，體外培養(yǎng)期間，CNP促進了支持細(xì)胞表達雄激素結(jié)合蛋白、抑制素B和轉(zhuǎn)鐵蛋白，由于這些基因蛋白與血管屏障形成相關(guān)，揭示CNP可能參與了血管屏障的動態(tài)調(diào)控［14］。

4.2 C型尿鈉肽在雌性動物繁殖過程中的作用

4.2.1 C型尿鈉肽在雌性動物生殖器官上表達 Cameron等［20］利用mRNA原位雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)小鼠胎盤組織中CNP大量表達始于性交后10.5 d。Stepan等［21］檢測到灰鼠胚盤組織內(nèi)CNP mRNA在性交后9.5-15.5 d表達最高。大鼠胎盤CNP表達與ANP相似，在性交后16 d表達最高。胎盤、子宮以及卵巢組織間CNP表達的比較研究表明，胎盤CNP mRNA表達高于子宮和卵巢。另外，人類妊娠期胎盤組織的NPR1及NPR2表達變化幅度較大的研究結(jié)果進一步支持胎盤組織中鈉肽系統(tǒng)功能性作用［22］。

Stepan等［23］發(fā)現(xiàn)，未妊娠小鼠子宮和卵巢組織CNP mRNA的表達最高，甚至超過了大腦和腎臟組織。更加細(xì)致的研究表明，子宮內(nèi)CNP的表達受其他激素調(diào)控。例如，去勢小鼠腹膜內(nèi)注射雌激素以劑量依賴的方式促進子宮內(nèi)CNP表達［24］。大鼠子宮中CNP表達受發(fā)情期影響，而且在發(fā)情初期表達最高。CNP的表達依賴發(fā)情周期歸咎于子宮內(nèi)容物及液體內(nèi)容物質(zhì)或者雌激素的變化［25］。同樣，發(fā)情周期內(nèi)大鼠卵巢組織中CNP和NPR2表達也呈時間依賴性的變化。此外，CNP/NPR2體系在卵巢組織中表達亦受激素調(diào)控，研究表明具有FSH功能作用的eCG注射小鼠后促進了 CNP/NPR2 mRNA表達，而具有LH功能作用的hCG抑制了其表達［26，27］。

4.2.2 C型鈉肽在雌性動物繁殖過程中的調(diào)控 近年小鼠上的研究發(fā)現(xiàn)，CNP主要在卵泡壁層顆粒細(xì)胞表達，NPR2主要在卵丘顆粒細(xì)胞上表達，體外培養(yǎng)期間CNP抑制了卵母細(xì)胞減數(shù)分裂，敲除CNP基因后卵母細(xì)胞啟動了減數(shù)分裂，說明CNP是體內(nèi)在LH峰值啟動前抑制卵母細(xì)胞減數(shù)分裂的功能性物質(zhì)，其抑制減數(shù)分裂的機制是CNP作用于卵丘顆粒細(xì)胞后激活NPR2，產(chǎn)生大量的cGMP并進入卵母細(xì)胞，抑制PDE3A的活性，減少cAMP的分解，維持減數(shù)分裂的靜止［2］。另外，McGee等［28］發(fā)現(xiàn)在卵泡竇前向竇內(nèi)轉(zhuǎn)變時期，8-bromo-cGMP（一種cGMP的類似物）可以降低卵泡閉鎖，同時促進了有腔卵泡的發(fā)育。由此推測，CNP可能通過結(jié)合NPR2產(chǎn)生cGMP促進卵泡發(fā)育。最近研究結(jié)果顯示，小鼠注射CNP后促進了卵巢上早期和后期有腔卵泡發(fā)育，使用eCG超排處理后增加了排出的卵母細(xì)胞數(shù)量，并且體外培養(yǎng)后沒有影響卵母細(xì)胞發(fā)育能力［3］。一般認(rèn)為FSH通過作用卵泡細(xì)胞G蛋白偶聯(lián)的腺苷酸環(huán)化酶產(chǎn)生cAMP調(diào)控卵泡的生長發(fā)育，當(dāng)前研究揭示CNP通過激活鳥苷酸環(huán)化酶產(chǎn)生cGMP也能促進卵泡發(fā)育，但是FSH和CNP通過第二信使cAMP/cGMP是否存在交叉作用通路調(diào)控卵泡發(fā)育尚不明確。

綿羊妊娠后期子宮內(nèi)cGMP含量提高了38倍，說明激活了鈉肽系統(tǒng)，促進子宮內(nèi)cGMP的產(chǎn)生［29］。McNeill等［30］研究發(fā)現(xiàn)綿羊血液中母源CNP蛋白含量低，且穩(wěn)定存在，但妊娠后40-50 d迅速增加，在妊娠120 d時達到高峰，在產(chǎn)前7 d迅速下降至妊娠前水平。小鼠子宮CNP mRNA濃度在妊娠期提高了7倍多，而卵巢中的水平則降低到未妊娠對照組的10%。以上數(shù)據(jù)揭示妊娠期間CNP可能通過松弛平滑肌肌肉抑制子宮收縮維持妊娠過程。CNP誘導(dǎo)的松弛可能不依賴cGMP介導(dǎo)的信號通路，因為抑制NPR1和NPR2活性并沒有影響CNP對子宮肌層的作用［31］，具體的調(diào)控機制還有待進一步研究。

此外，羊妊娠期間子宮動靜脈連接高濃度的CNP，揭示子宮胎盤組織是母源CNP的主要來源。但是，目前關(guān)于子宮和胎盤各自對母源CNP的貢獻能力尚不明確。McNeill等［30］研究發(fā)現(xiàn)綿羊母源CNP含量與妊娠胎兒數(shù)量呈正相關(guān)，隨后McNeill等［32］研究結(jié)果顯示，在綿羊妊娠期間，胎盤組織是母源CNP含量的主要貢獻者，合成的CNP與胎盤成熟和胎兒發(fā)育密切相關(guān)。然而，在人類研究結(jié)果顯示，胎兒血漿CNP的含量高于母源水平，且母源與胎兒間梯度含量較低，表明母源和胎兒可能獨立產(chǎn)生CNP。因此，在妊娠期間調(diào)控胎盤成熟和胎兒發(fā)育的CNP合成在物種間可能存在差異。

5 應(yīng)用前景

目前，在畜牧業(yè)生產(chǎn)方面，雄性動物存在一些繁殖障礙問題，如陰莖勃起困難。由于CNP能夠通過產(chǎn)生cGMP調(diào)控雄性動物陰莖勃起，將可能在治療此項疾病方面發(fā)揮一定的作用，提高雄性動物的繁殖力。此外，也可以開發(fā)治療男性因陽痿導(dǎo)致不育的藥物。

鑒于CNP能夠促進雌性動物卵泡發(fā)育，有提高排卵數(shù)量的作用，其可以在提高牛、羊等大家畜超排效率方面具有一定的利用價值。此外，目前由于家畜卵母細(xì)胞來源于卵巢上不同生長時期的卵泡，盡管體外成熟培養(yǎng)后能夠完成減數(shù)分裂，但由于脫離卵泡內(nèi)生理環(huán)境，體外難以獲得支持受精后胚胎發(fā)育的胞質(zhì)成熟，逐漸成為提高牛體外胚胎發(fā)育能力的瓶頸因素。另外，幼畜超排技術(shù)近年來有較大進展，但同樣存在胞質(zhì)不成熟導(dǎo)致胚胎發(fā)育能力低的問題。鑒于卵母細(xì)胞體內(nèi)成熟過程涉及的生理條件及影響因素，許多學(xué)者理論上認(rèn)為體外維持卵母細(xì)胞靜止，模擬體內(nèi)LH激素刺激啟動GVBD前卵母細(xì)胞經(jīng)歷胞質(zhì)成熟的歷程，是提高受精后胚胎發(fā)育能力的一種重要的手段。但是，目前體外使用的減速分裂抑制劑沒有顯著的作用效果，一些物質(zhì)甚至具有不利影響。值得注意的是，近年來一些學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)CNP體外能夠抑制卵母細(xì)胞減數(shù)分裂，且由于其為生理活性物質(zhì)，用于體外成熟培養(yǎng)更接近于牛卵泡內(nèi)的生理環(huán)境，對卵母細(xì)胞毒害應(yīng)該小于化學(xué)合成的減數(shù)分裂抑制劑。因此，在體外用新型的減數(shù)分裂抑制劑提高卵母細(xì)胞發(fā)育能力方面將具有潛在利用價值。

［1］ Sudoh T, Minamino N, Kangawa K, et al. C-type natriuretic peptide（CNP）：a new member of natriuretic peptide family identified in porcine brain［J］. Biochem Biophys Res Commun, 1990, 168：863-870.

［2］ Zhang M, Su YQ, Sugiura K, et al. Granulosa cell ligand CNP and its receptor NPR2 maintain meiotic arrest in mouse oocytes［J］. Science, 2010, 330：366-369.

［3］ Sato Y, Cheng Y, Kawamura K, et al. C-type natriuretic peptide stimulates ovarian follicle development［J］. Mol Endocrinol, 2012, 26（7）：1158-1166.

［4］ Misono KS, Grammer RT, Fukumi H, et al. Rat atrial natriuretic factor：isolation, structure and biological activities of four major peptides［J］. Biochem Biophys Res Commun, 1984, 123：444-451.

［5］ Wu C, Wu F, Pan J, et al. Furin-mediated processing of Pro-C-type natriuretic peptide［J］. J Biol Chem, 2003, 278：25847-25852.

［6］ Yeung VT, Ho SK, Nicholls MG, et al. Bindmg of CNP-22 and CNP-53 to cultured mouse astrocytes and effects on cyclic GMP［J］. Peptides, 1996, 17：101-106.

［7］ Koiler KJ, Lowe DG, Bennett GL, et al. Selective activation of the B-type natrinretic peptide receptor by CNP［J］. Science, 1991, 252：120-123.

［8］ Lohmann SM, Vaandrager AB, Smolenski A, et al. Distinct and specific functions of cGMP-dependent protein kinases［J］. Trends Biochem Sci, 1997, 22：307-312.

［9］ Pfeifer A, Klatt P, Massberg S, et al. Defective smooth muscle regulation in cGMP kinase I-deficient mice［J］. EMBO J, 1998, 17：3045-3051.

［10］ Chikuda H, Kugimiya F, Hoshi K, et al. Cyclic GMPdependent protein kinase II is a molecular switch from proliferation to hypertrophic differentiation of chondrocytes［J］. Genes Dev, 2004, 18：2418-2429.

［11］ Clavell AL, Stingo AJ, Wei CM, et al. C-type natriuretic peptide：a selective cardiovascular peptide［J］. Am J Physiol, 1993, 264：290-295.

［12］ Middendorff R, Davidoff MS, Behrends S, et al. Multiple roles of the messenger molecule cGMP in testicular function［J］. Andrologia, 2000, 32：55-59.

［13］ El-Gehani F, Tena-Sempere M, Ruskoaho H, et al. Natriuretic peptides stimulate steroidogenesis in the fetal rat testis［J］. Biol Reprod, 2001, 65（2）：595-600.

［14］ Huang DH, Zhang SW, Zhao H, et al. The role of C-type natriuretic peptide in rat testes during spermatogenesis［J］. Asian J Androl, 2011, 13（2）：275-80.

［15］ Nielsen SJ, G?tze JP, Jensen HL, et al. ProCNP and CNP are expressed primarily in male genital organs［J］. Regul Pept, 2008, 146（1-3）：204-212.

［16］ Chrisman TD, Schulz S, Potter LR, et al. Seminal plasma factors that cause large elevations in cellular cyclic GMP are C-type natriuretic peptides［J］. J Biol Chem, 1993, 268：3698-3703.

［17］ Middendorff R, Paust HJ, Davidoff MS, et al. Synthesis of C-type natriuretic peptide（CNP）by immortalized LHRH cells［J］. J Neuroendocrinol, 1997, 9：177-182.

［18］ Middendorff R, Davidoff MS, Behrends S, et al. Multiple roles of the messenger molecule cGMP in testicular function［J］. Andrologia, 2000, 32：55-59.

［19］ Küthe A, Reinecke M, ückert S, et al. Expression of guanylyl B in the human corpus cavernosum penis and the possible involvement of its ligand C-type natriuretic polypeptide in the induction of penile erection［J］. Journal of Urology, 2003, 169：1918-1922.

［20］ Cameron VA, Aitken GD, Ellmers LJ, et al. The sites of gene expression of atrial, brain, and C-type natriuretic peptides in mouse fetal development：temporal changes in embryos and placenta［J］. Endocrinology, 1996, 137：817-824.

［21］ Stepan H, Leitner E, Walter K, et al. Gestational regulation of the gene expression of C-type natriuretic peptide in mouse reproductive and embryonic tissue［J］. Regulatory Peptides, 2001, 102：9-13.

［22］ Hatjis CG, Grogan DM. Atrial natriuretic peptide receptors in normal human placentas［J］. American Journal of Obstetrics and Gynecology, 1988, 159：587-591.

［23］ Stepan H, Leitner E, Bader M, et al. Organ-specific mRNA distribution of C-type natriuretic peptide in neonatal and adult mice［J］. Regulatory Peptides, 2000, 95：81-85.

［24］ Acuff CG, Huang H, Steinhelper ME. Estradiol induces C-type natriuretic peptide gene expression in mouse uterus［J］. American Journal of Physiology, 1997, 273：2672-2677.

［25］ Dos Reis AM, Fujio N, Dam TV, et al. Characterization and distribution of natriuretic peptide receptors in the rat uterus［J］. Endocrinology, 1995, 136：4247-4253.

［26］ Kawamura K, Cheng Y, Kawamura N, et al. Pre-ovulatory LH/ hCG surge decreases C-type natriuretic peptide secretion by ovarian granulosa cells to promote meiotic resumption of pre-ovulatory oocytes［J］. Hum Reprod, 2011, 26：3094-3101

［27］ Robinson JW, Zhang M, Shuhaibar LC, et al. Luteinizing hormone reduces the activity of the NPR2 guanylyl cyclase in mouse ovarian follicles, contributing to the cyclic GMP decrease that promotes resumption of meiosis in oocytes［J］. Dev Biol, 2012, 366（2）：308-316.

［28］ McGee E, Spears N, Minami S, et al. Preantral ovarian follicles in serum-free culture：suppression of apoptosis after activation of the cyclic guanosine 3’, 5'-monophosphate pathway and stimulation of growth and differentiation by follicle-stimulating hormone［J］. Endocrinology, 1997, 138：2417-2424.

［29］ Itoh H, Bird IM, Nakao K, et al. Pregnancy increases soluble and particulate guanylate cyclases and decreases the clearance receptor of natriuretic peptides in ovine uterine, but not systemic, arteries［J］. Endocrinology, 1998, 139：3329-3341.

［30］ McNeill BA, Barrell GK, Wellby M, et al. C-type natriuretic peptide（CNP）forms in pregnancy：maternal plasma profiles during ovine gestation correlate with placental and fetal maturation［J］. Endocrinology, 2009, 150：4777-4783.

［31］ Drewett JG, Fendly BM, Garbers DL, et al. Natriuretic peptide receptor-B（gyanylyl cyclase-B）mediates C-type natriuretic peptide relaxation of precontracted rat aorta［J］. Journal of Biological Chemistry, 1995, 270：4668-4674.

［32］ McNeill BA, Barrell GK, Wooding FB, et al. The trophoblast binucl eate cell is the source of maternal circulating C-type natriuretic pep tide during ovine pregnancy［J］. Placenta, 2011, 32：645-650.