上皮鈣黏附素及β-連接素在大腸癌變中的表達(dá)及意義

宋曉昕

(邢臺(tái)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第一附屬醫(yī)院病理科，河北 邢臺(tái) 054000)

大腸癌是臨床常見惡性腫瘤之一，其死亡原因絕大多數(shù)是腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。腫瘤轉(zhuǎn)移是瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)相互作用復(fù)雜的、多步驟的連續(xù)過程［1］。其中瘤細(xì)胞脫離原發(fā)灶是腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟和先決條件，各種細(xì)胞黏附分子在這一過程中起著重要作用［2］。上皮鈣黏附素(Epithelal cadherin，E-cad)是黏附素分子家族成員，屬跨膜蛋白，與β-連接素(β-catenin，β-cat)連結(jié)合具有影響細(xì)胞的黏附性、運(yùn)動(dòng)性的作用。2003-01—2008-12，筆者通過采用免疫組化法測(cè)定120例E-cad及βcat在不同大腸組織中的表達(dá)，進(jìn)一步探討兩者與大腸癌臨床病理特征的關(guān)系，為臨床診斷、治療及預(yù)后判斷提供新的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本采集 本組120例均為我院病理科研究病例，男63例，女57例;年齡22～81歲，平均56.1歲;＜55歲43例，≥55歲77例;大腸腺瘤50例，大腸腺瘤癌變30例，大腸癌40例。大腸腺瘤均取自我院內(nèi)鏡活檢標(biāo)本，其中輕度異型增生19例，中重度異型增生31例。大腸腺瘤癌變及大腸癌取自同期我院手術(shù)切除標(biāo)本。大腸腺瘤癌變患者癌周均可見典型腺瘤成分，癌組織侵及黏膜肌層。大腸癌40例中，男24例，女16例;＜55歲12例，≥55歲28例;浸潤(rùn)深度未侵及漿膜13例，侵及漿膜27例;無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的24例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的16例;Dukes分期［3］:A+B期24例，C+D期16例;組織學(xué)類型，高-中分化29例，低-未分化11例。同時(shí)取20例正常大腸黏膜作為對(duì)照(均取距腸癌標(biāo)本腫物10 cm以上的大腸黏膜)。所有病例全部切片均由2位高年資病理醫(yī)師嚴(yán)格按照2000年世界衛(wèi)生組織(WHO)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行明確診斷復(fù)核［3］，均經(jīng)10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。

1.2 試劑 鼠抗人E-cad單克隆抗體、鼠抗人β-cat單克隆抗體、免疫組化超敏S-P檢測(cè)試劑盒及DAB酶底物顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.3 檢測(cè)方法 免疫組織化學(xué)按免疫組織化學(xué)增強(qiáng)型試劑盒說明書進(jìn)行，每批染色均設(shè)陰性、陽性對(duì)照，即以PBS替代一抗作為陰性試劑對(duì)照，以試劑說明書中推薦的組織切片為陽性組織對(duì)照。免疫組化標(biāo)記采用SP法，抗原修復(fù)采用檸檬酸鹽緩沖液中加熱，保持92～98℃ 15 min，室溫下自然冷卻，DAB顯色。

1.4 染色結(jié)果判斷 E-cad及β-cat主要表達(dá)于正常黏膜上皮的細(xì)胞膜上，在相鄰的細(xì)胞間隙呈連續(xù)點(diǎn)狀或同質(zhì)線狀分布，以細(xì)胞膜為陽性表達(dá)部位作為陽性對(duì)照。2位病理醫(yī)師分別雙盲閱片。每張切片觀察10個(gè)高倍視野，只有明顯胞膜染色的細(xì)胞被判定為正常染色;如染色不連續(xù)、明顯減弱或缺失、或出現(xiàn)胞漿染色，則被評(píng)為不正常染色。E-cad染色結(jié)果以癌細(xì)胞細(xì)胞膜陽性表達(dá)＞70%為正常表達(dá)，＜70%為膜表達(dá)缺失。β-cat染色結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)按照Maruyama K等的［1］方法，分別從細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核3個(gè)方面判斷β-cat在細(xì)胞內(nèi)的分布特征:細(xì)胞膜陽性表達(dá)＞70%為正常表達(dá);細(xì)胞膜陽性表達(dá)＜70%為膜表達(dá)缺失;細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核陽性表達(dá)＞10%為胞質(zhì)或胞核陽性表達(dá)，胞質(zhì)或胞核表達(dá)稱為異位表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料率的比較采用χ2檢驗(yàn)、Fisher確切概率計(jì)算法及相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組間β-cat及E-cad表達(dá)情況比較 見表1。

表1 各組間β-cat及E-cad表達(dá)情況比較 例(%)

由表1可見，大腸腺瘤組、大腸腺瘤癌變組及大腸癌組的β-cat異位表達(dá)、膜表達(dá)缺失及E-cad表達(dá)缺失情況與大腸黏膜組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);大腸腺瘤癌變組、大腸癌組的β-cat異位表達(dá)、膜表達(dá)缺失及E-cad表達(dá)缺失情況與大腸腺瘤組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。β-cat、E-cad均可正常表達(dá)于大腸黏膜的細(xì)胞膜，大腸腺瘤、大腸腺瘤癌變及大腸癌組織中β-cat、E-cad表達(dá)呈不同程度膜表達(dá)缺失，且β-cat可呈胞質(zhì)和(或)胞核異位表達(dá)。

2.2 大腸癌組不同臨床病理特征對(duì)β-cat及E-cad表達(dá)的影響 見表2。

表2 大腸癌組不同臨床病理特征對(duì)β-cat及E-cad表達(dá)的影響 例(%)

由表2可見，在大腸癌組不同臨床病理特征中漿膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期及組織學(xué)類型多受β-cat及E-cad表達(dá)的影響，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，性別及年齡影響不大(P＞0.05)。

3 討論

E-cad/β-cat復(fù)合體是介導(dǎo)同型細(xì)胞間黏附的連接復(fù)合體，其在維持正常黏膜上皮的極性和完整性中起重要作用，E-cad/β-cat復(fù)合體結(jié)構(gòu)和功能異常導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞間黏附的喪失是腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。β-cat具有雙重功能，還是細(xì)胞外因子(Wnt)信號(hào)傳導(dǎo)通路中的重要成員，β-cat介導(dǎo)的Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路異常激活與腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切。β-cat在一些生長(zhǎng)因子等誘導(dǎo)下發(fā)生酪氨酸磷酸化，即與E-cad/β-cat復(fù)合體分離而進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，一部分與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的抑癌因子結(jié)腸腺瘤性息肉蛋白(APC)結(jié)合后被降解，另一部分進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，與轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子結(jié)合，導(dǎo)致與細(xì)胞增生有關(guān)的基因轉(zhuǎn)錄，使細(xì)胞過度增生［3］。E-cad作用的發(fā)揮離不開β-cat，在細(xì)胞膜E-cad與β-cat結(jié)合成復(fù)合體，該復(fù)合體通過α-連接素(α-cat)與細(xì)胞骨架的肌動(dòng)蛋白微絲網(wǎng)連接。Oyama T等［4］證實(shí)β-cat基因的移碼突變產(chǎn)生的不完整β-cat，缺少與α-cat的連接點(diǎn)，打破了E-cad與α-cat的連接，使癌細(xì)胞連接松散，從而促進(jìn)癌細(xì)胞浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移。Hao X等［5］發(fā)現(xiàn)β-cat的胞核異位表達(dá)隨大腸腺瘤上皮不典型增生程度增高而增強(qiáng)，大腸腺癌β-cat的胞核異位表達(dá)程度明顯高于大腸腺瘤。Shimizu M等［6］也發(fā)現(xiàn)大腸腺瘤癌變者β-cat胞核異位表達(dá)率明顯高于腺瘤，且βcat的異位聚集早于P53基因突變，因而提出β-cat異位聚集可以作為大腸腺瘤癌變指標(biāo)之一。

在本研究結(jié)果中，與大腸黏膜組比較，β-cat的異常表達(dá)也頗為明顯，在大腸腺瘤組、大腸腺瘤癌變組及大腸癌組中均有不同程度異位表達(dá)及膜表達(dá)缺失(P＜0.05)，且大腸腺瘤癌變組、大腸癌組β-cat異位表達(dá)及膜表達(dá)缺失顯著高于大腸腺瘤組，呈逐漸增加的趨勢(shì)，這與以往結(jié)果基本相符。E-cad膜表達(dá)缺失在本研究中也得到了充分體現(xiàn)，大腸腺瘤組、大腸腺瘤癌變組及大腸癌組E-cad膜表達(dá)缺失與大腸黏膜組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且大腸腺瘤癌變組、大腸癌組E-cad膜表達(dá)缺失高于大腸腺瘤組(P＜0.05)。

本研究在大腸癌組不同臨床病理特征對(duì)β-cat及E-cad表達(dá)情況的結(jié)果表明，其與漿膜侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Dukes分期及組織學(xué)分型密切相關(guān)，有漿膜侵犯明顯高于無漿膜侵犯(P＜0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P＜0.05)，Dukes分期A+B期明顯低于C+D期(P＜0.05)，組織學(xué)高-中分化明顯低于低-未分化(P＜0.05)。

本研究結(jié)果表明，β-cat及E-cad可能參與了大腸從正常黏膜—腺瘤—癌的發(fā)生發(fā)展過程，β-cat的異位表達(dá)可以作為大腸腺瘤癌變指標(biāo)，而β-cat及E-cad的膜表達(dá)缺失則使大腸癌在發(fā)生發(fā)展過程中更具侵襲性、轉(zhuǎn)移性，有可能作為判斷預(yù)后的標(biāo)記。

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