細(xì)胞因子對肝纖維化影響的中醫(yī)藥研究進(jìn)展

高湲，陳桂敏，梁振鈺，謝毅強(qiáng)

(海南醫(yī)學(xué)院中醫(yī)學(xué)院，海南?？?71101)

·綜述·

細(xì)胞因子對肝纖維化影響的中醫(yī)藥研究進(jìn)展

高湲，陳桂敏，梁振鈺，謝毅強(qiáng)

(海南醫(yī)學(xué)院中醫(yī)學(xué)院，海南?？?71101)

肝纖維化(HF)是慢性肝病向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)病理過程。其關(guān)鍵病機(jī)是肝星狀細(xì)胞(HSC)的活化，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的合成與降解失衡，ECM在肝內(nèi)大量沉積。HSC的激活受多種細(xì)胞因子的調(diào)控，促進(jìn)因子主要有：轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)、血小板衍生生長因子(PDGF)、腫瘤壞死因子(TNF)，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMPs)、結(jié)締組織生長因子(CTGF)；抑制因子主要有：基質(zhì)金屬蛋白酶家族(MMPS)、肝細(xì)胞生長因子(HGF)。兩大類細(xì)胞因子的調(diào)控維持著ECM在肝內(nèi)的合成與降解平衡。近年來，在中醫(yī)藥研究抗HF過程中發(fā)現(xiàn)，中藥可通過下調(diào)促進(jìn)因子或上調(diào)抑制因子達(dá)到減輕及逆轉(zhuǎn)肝纖維化進(jìn)程，并具有多成分、多環(huán)節(jié)的作用特點(diǎn)，在治療上具有綜合優(yōu)勢。

細(xì)胞因子；肝纖維化；中醫(yī)藥；研究進(jìn)展

在肝纖維化(Hepatic fibrosis，HF)發(fā)生和發(fā)展的進(jìn)程中，肝星狀細(xì)胞(Hepatic stellate cells，HSC)的活化是關(guān)鍵環(huán)節(jié)。肝內(nèi)多種細(xì)胞因子參與調(diào)節(jié)HSC，最終引起細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)合成增加，以致其在肝內(nèi)大量沉積，HF逐漸形成[1]。

HSC活化受細(xì)胞因子和細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑的調(diào)控。HSC的激活是通過各種細(xì)胞因子經(jīng)旁分泌或自分泌途徑作用的結(jié)果。這些細(xì)胞因子主要分兩大類：促進(jìn)因子和抑制因子。促進(jìn)因子主要包括轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)、血小板衍生生長因子(PDGF)、腫瘤壞死因子(TNF)，基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMPs)、結(jié)締組織生長因子(CTGF)；抑制因子主要有基質(zhì)金屬蛋白酶家族(MMPS)、肝細(xì)胞生長因子(HGF)。兩類細(xì)胞因子之間相互調(diào)控制約，直接決定HF進(jìn)程。

HSC活化過程中的相關(guān)調(diào)控因子是抗HF治療的重要靶標(biāo)，因此對關(guān)鍵性細(xì)胞因子的來源、作用方式、信號傳導(dǎo)途徑干預(yù)已成為防治肝纖維化的重要措施之一。近年來，在研究中醫(yī)藥抗HF過程中發(fā)現(xiàn)，中藥可通過下調(diào)促進(jìn)因子或上調(diào)抑制因子達(dá)到減輕肝損傷及肝纖維化進(jìn)程，具有多成分、多環(huán)節(jié)的作用特點(diǎn)，在治療上具有綜合優(yōu)勢。

1 下調(diào)促進(jìn)因子

1.1 對TGF-β的調(diào)控TGF-β是一類多功能細(xì)胞因子，是肝損傷后全面促進(jìn)HF中的一個關(guān)鍵細(xì)胞因子，它包括三個亞型(TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3)。而TGF-β1在肝纖維化時出現(xiàn)高表達(dá)，并與病理上HF程度相平行，表現(xiàn)出與HF的發(fā)生發(fā)展有極其密切的關(guān)系[2]。

1.1.1 單味藥或單體有效成分川芎嗪為傘形科植物川芎的根莖及姜科植物溫莪術(shù)等植物提純的一種生物堿。實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)川芎嗪具有逆轉(zhuǎn)肝纖維化的作用，且高劑量療效更顯著[3]。其作用機(jī)制可能與其降低TGF-β1的表達(dá)以及改善Smad3與Smad7之間的失衡有關(guān)。免疫組化法觀察肝組織中TGF-β1表達(dá)的變化，并運(yùn)用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)測量各組TGF-β1表達(dá)的平均陽性面積，結(jié)果顯示川芎嗪能明顯抑制肝組織中TGF-β1水平的表達(dá)，對實(shí)驗(yàn)性大鼠肝纖維化具有明顯的保護(hù)和治療作用[4]。三七有效成分三七總皂苷能顯著降低肝纖維化小鼠血清中TGF-β1的水平，減輕肝纖維化程度[5]。姜黃素(郁金、莪術(shù)、姜黃等中藥的有效成分)具有治療肝纖維化的作用，其機(jī)理可能與抑制肝組織中TGF-β1的表達(dá)有關(guān)[6]。丹參中所含丹酚酸B(SA-B)的主要作用機(jī)制在于干預(yù)HSC中TGF-β1/Smads信號傳導(dǎo)，抑制膠原基因及其蛋白表達(dá)[7]。

1.1.2 復(fù)方的研究肝心康(由丹參、桃仁、紅花等組成)能明顯抑制TGF-β1在肝組織中的表達(dá)[8]?？估wⅡ號具有抑制與纖維化有關(guān)的細(xì)胞因子TGF-β1及下游信號Smad3的表達(dá)，最終導(dǎo)致肝纖維化的逆轉(zhuǎn)，并且在肝纖維化的早期治療用藥優(yōu)于后期治療[9]?？估wⅠ號(由丹參、當(dāng)歸、莪術(shù)、三棱、鱉甲等組成)可以通過下調(diào)TGF-β1的表達(dá)，降低Ⅰ、Ⅲ型膠原的生成[10]。經(jīng)金三莪方劑治療后大鼠肝內(nèi)TGF-β1mRNA表達(dá)明顯降低，且肝小葉結(jié)構(gòu)趨于正常，纖維間隔變薄[11]。其作用機(jī)制可能與抑制肝內(nèi)TGF-β1mRNA表達(dá)有關(guān)。漢丹肝樂對肝纖維化大鼠的TGF-β1mRNA的增高表達(dá)具有抑制作用，可阻斷肝纖維化相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，在一定程度上延緩了肝纖維化的形成和發(fā)展[12]。清纖方(葉下珠、山豆根、平地木、丹參、柴胡、當(dāng)歸、黃芪、威靈仙、甘草)具有降低TGF-β1表達(dá)的作用[13]。

1.2 對PDGF的調(diào)控PDGF是HSC的強(qiáng)裂有絲分裂原，可促進(jìn)HSC分裂、增殖。還可上調(diào)TIMP-1，抑制膠原酶活性，減少ECM降解[14]。

1.2.1 單味藥及單體有效組分半枝蓮可明顯改善肝纖維化大鼠肝功能，并呈劑量依賴性，能顯著增加SOD含量，降低MDA含量，抑制肝臟脂質(zhì)過氧化物的形成以及TGF-β1和PDGF的表達(dá)，從而發(fā)揮預(yù)防肝纖維化的作用[15]。姜黃素可抑制大鼠肝纖維化模型中PDGF-BB和TGF-β1的表達(dá)，而達(dá)到抗肝纖維化[16]。

1.2.2 復(fù)方的研究益肝康及拆方丹參小復(fù)方純化浸膏及藥物血清均具有良好的抑制PDGF和蛋白表達(dá)的作用，且全方作用優(yōu)于拆方[17]。肝力克能夠減輕肝纖維化大鼠肝組織TGF-β1和PDGF-B mRNA的表達(dá)[18]。

1.3 腫瘤壞死因子α(TNF-α)通常認(rèn)為TNF-α是介導(dǎo)肝損傷的主要和終末介質(zhì)，且與其他細(xì)胞因子相互影響并形成調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，加強(qiáng)HSC的趨化性，促進(jìn)HSC的增殖和轉(zhuǎn)化，對肝纖維化的啟動及調(diào)控起重要作用。有研究顯示，肝纖維化患者血清TNF-α水平顯著增高，尤其在肝纖維化初期。

蟲草菌絲(CSB)及其組分(C12)能抑制庫普弗細(xì)胞活化和細(xì)胞因子TNF-α、TGF-β1的釋放，抑制肝星狀細(xì)胞活化、合成和分泌細(xì)胞外基質(zhì)。從而阻斷和逆轉(zhuǎn)二甲基亞硝胺大鼠肝纖維化[19]。氧化苦參堿(苦參素)是豆科植物苦參根中提取的一種生物堿。研究發(fā)現(xiàn)氧化苦參堿抑制膠原合成，其抗肝纖維化的作用機(jī)制可能與下調(diào)血清TNF-α水平有關(guān)，且呈劑量依賴性。體外研究發(fā)現(xiàn)苦參堿可降低血清ALT和TNF水平，并能抑制脂多糖誘導(dǎo)的、經(jīng)痤瘡丙酸桿菌預(yù)刺激的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞釋放TNF，提示苦參堿的保肝作用與其抑制TNF的釋放有關(guān)[20]。

1.4 結(jié)締組織生長因子(CTGF)CTGF是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種間質(zhì)細(xì)胞的生長因子。作為TGF-β1的下游反應(yīng)元件，CTGF介導(dǎo)TGF-β1促組織纖維化的效應(yīng)，因此可能成為抗肝纖維化的更具特異性的靶點(diǎn)。組織學(xué)研究顯示在纖維化模型大鼠中CTGFmRNA的水平明顯高于正常對照組，且CTGF水平的增高與肝纖維化進(jìn)展程度相平行，證實(shí)了CTGF與肝纖維化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[21]。研究顯示鱉甲煎丸能有效治療復(fù)合因素誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化，其作用機(jī)理可能是通過抑制肝纖維化組織CTGF的表達(dá)，進(jìn)而阻斷TGF-β1促膠原合成作用、抑制細(xì)胞外基質(zhì)的合成，最終延緩肝纖維化的進(jìn)程[22]。

2 上調(diào)抑制因子

研究發(fā)現(xiàn)在HSC增殖的同時也存在著細(xì)胞的凋亡，因此通過干預(yù)細(xì)胞凋亡的環(huán)節(jié)，促進(jìn)肝纖維化逆轉(zhuǎn)，將可能成為抗HF的研究重點(diǎn)。最新研究表明，肝纖維化恢復(fù)期，激活狀態(tài)的HSC主要是通過凋亡機(jī)制，而不是表型的轉(zhuǎn)化。

肝細(xì)胞生長因子(HGF)是由非實(shí)質(zhì)細(xì)胞如HSC、竇狀內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的多效性的細(xì)胞因子，在刺激肝細(xì)胞增殖和抑制肝纖維化中起重要作用：HGF可以減少前膠原mRNA的表達(dá)水平、抑制TGF-β1mRNA的表達(dá)、保護(hù)肝細(xì)胞、促進(jìn)肝細(xì)胞增殖與成熟。肝炎平能促進(jìn)HGF的表達(dá)而抑制TGF-β1，因而認(rèn)為肝炎平增加HGF表達(dá)是其抗肝纖維化可能的機(jī)制之一[23]。

3 對基質(zhì)金屬蛋白酶家族(MMPS)和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(TIMPs)的調(diào)節(jié)

基質(zhì)金屬蛋白酶-基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑是肝臟ECM代謝的主要調(diào)節(jié)因素，前者促進(jìn)降解，后者是對前者降解作用的抑制[24]。當(dāng)MMPs-TIMPs功能失調(diào)會導(dǎo)致ECM沉積增多和纖維化的發(fā)生。

3.1 單味藥及單體有效組分研究發(fā)現(xiàn)蟲草多糖治療組不僅可使多項(xiàng)肝纖維化指標(biāo)下降，同時也包括TIMP-2含量下降，而MMP-2含量升高[25]。其機(jī)制與促進(jìn)膠原降解和抗脂質(zhì)過氧化作用有關(guān)。姜黃素可使肝組織中MMP-1 mRNA的表達(dá)升高，TIMP-1 mRNA的表達(dá)降低，且具量效關(guān)系[26]。熊果酸(主要是女貞葉、枇杷葉、夏枯草、鐵冬青葉及毛泡桐葉的提取物)可上調(diào)肝纖維化大鼠肝組織MMP-1 mRNA的表達(dá)，下調(diào)TIMP-l mRNA的表達(dá)，而增加ECM降解，是其抗HF的可能機(jī)制[27]。

3.2 復(fù)方的研究肝樂顆粒各劑量組能明顯降低肝纖維化大鼠MDA、TIMP-1的含量，升高SOD水平，抑制肝纖維化大鼠肝組織中TIMP-1蛋白和TIMP-1 mRNA的表達(dá)，有一定的抗肝纖維化作用[28]。丹芍化纖膠囊(由漢防己甲素、丹參、赤芍、黃芪、銀杏葉等組成)能夠抑制肝纖維化組織中TIMP-1的表達(dá)，從而減弱其對MMP-1的抑制作用，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，發(fā)揮抗肝纖維化作用[29]?？估w抑癌方(柴胡、黃芪、山藥、益母草、浙貝母、陳皮、土茯苓、炙鱉甲等)可使實(shí)驗(yàn)性HF大鼠MMP-1表達(dá)顯著升高，TIMP-1表達(dá)明顯降低。可促進(jìn)ECM降解，有明顯抗肝纖維化的作用[30]。小柴胡湯具有抗炎、抗氧化、清除自由基、調(diào)節(jié)免疫及預(yù)防腫瘤發(fā)生的多重生物學(xué)作用，實(shí)驗(yàn)表明，復(fù)方小柴胡湯可顯著降低肝纖維化大鼠TIMP-1水平，有效減輕和抑制肝纖維化進(jìn)程[31]。雙甲五靈膠囊(柴胡、五味子、丹參、黃芪、靈芝、鱉甲、穿山甲等)可下調(diào)肝組織TIMP-1表達(dá)而治療慢性肝病HF患者[32]。藻鱉軟肝湯(由海藻、鱉甲、蘇木、丹參、山楂等組成)能抑制HF大鼠TIMP-1的分泌，調(diào)節(jié)TIMP-1/MMP-1比值，糾正ECM合成和降解的不平衡，從而起到抗HF的作用[33]。

綜上所述，近年來中醫(yī)藥研究者從分子生物水平對肝纖維化相關(guān)因子的研究取得了一些成果，并用于臨床，收到了較好的療效。但也存在一些需要解決的問題。如動物造模如何能更接近人肝纖維化的發(fā)病機(jī)制；目前研究更多的是藥物對某個因子的作用，而肝纖維化是非常復(fù)雜的病理過程，各種細(xì)胞因子對肝纖維化的作用是多方面的；由于實(shí)驗(yàn)研究的時限性，目前的研究未能在肝纖維化的不同階段運(yùn)用中醫(yī)理論辨證應(yīng)用不同的方劑進(jìn)行干預(yù)。若能在今后的研究中，重視和解決相關(guān)問題，相信中醫(yī)藥在防治肝纖維化方面一定會取得更大的收獲。

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R575

A

1003—6350(2013)01—0111—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2013.01.0051

2012-06-23)

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高湲。E-mail：gaoyuan58505@163.com