大蒜素對ketr－3裸鼠腎癌移植瘤的抑制作用

莫金水，馮建華，樂有為，鄺世航，莫 卒 (廣東省深圳市龍崗區(qū)龍崗中心醫(yī)院泌尿外科，廣東 龍崗 518116)

腎細(xì)胞癌是最常見的泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其發(fā)病率位居泌尿生殖系腫瘤的第2位，僅次于膀胱癌。腎癌惡性度較高，且發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。雖然近年來影像學(xué)技術(shù)發(fā)展迅速，診斷有較大進(jìn)展，但RCC起病隱匿，早期診斷仍非常困難，約有30%的患者在確診時已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。研究顯示，大蒜主要是通過其有效成分大蒜素起到對腫瘤的防治作用，但目前大蒜素的抗腫瘤作用機制尚未完全明確。本試驗通過建立ketr－3細(xì)胞Balb/c裸鼠移植瘤模型，了解大蒜素在動物水平上對腫瘤的抑制作用。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器:大蒜素注射液是由上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)，人腎癌細(xì)胞株(ketr－3)由中科院上海細(xì)胞所提供，Balb/c裸鼠購自暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物中心，大蒜素購自新疆華世丹藥業(yè)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 實驗準(zhǔn)備:ketr－3細(xì)胞培養(yǎng):取 ketr－3細(xì)胞用含10%小牛血清RPMI1 640培養(yǎng)基于37℃含5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，3～5 d傳代1次。實驗動物準(zhǔn)備:Balb/c裸鼠24只，雄性，5周齡，SPF級，飼養(yǎng)于暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物中心SPF級飼養(yǎng)房。

1.2.2 灌服大蒜素藥物對裸鼠移植瘤生長的影響:收集指數(shù)生長期ketr－3細(xì)胞1 000 rpm離心10 min后，NaCl溶液洗滌2～3遍，調(diào)整細(xì)胞密度為5×107細(xì)胞/ml。每只Balb/c裸鼠接種0.2 ml腫瘤細(xì)胞懸液于左側(cè)大腿背側(cè)皮下。觀察皮下移植瘤的生長狀況。標(biāo)本常規(guī)10%甲醛固定24 h后，石蠟包埋，HE染色后，光鏡下觀察結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理:統(tǒng)計分析應(yīng)用SPSS 13.0版統(tǒng)計軟件。瘤體體積均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示;分析方法為方差分析、兩兩比較計算P值。檢驗水準(zhǔn):α=0.01。

2 結(jié)果

2.1 大蒜素局部注射對裸鼠移植瘤生長的影響:裸鼠皮下接種ketr－3細(xì)胞2周后均成瘤。將移植瘤組織剪碎接種于裸鼠皮下，約十天后成瘤，成瘤率100%，大蒜素治療組處理后，腫瘤生長明顯受到抑制，2周后，NS組與空白組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05，n=8);DSS組與空白組、NS組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01，n=8)。

表1 2周后各組裸鼠移植瘤體積(±s)

表1 2周后各組裸鼠移植瘤體積(±s)

注:與NS組比較，①P＜0.01

組別 瘤體體積(mm3)空白對照組1 378.3±118.2 NS對照組 1 365.2±105.4 DSS實驗組 879.8±89.3①

2.2 裸鼠移植瘤組織病理學(xué)觀察:灌服藥物2周后，解剖腫瘤，進(jìn)行HE染色。在HE染色的石蠟切片上可見:NS組細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)松散，可見核仁，顯示細(xì)胞增殖活躍，大蒜素治療組可見到程度不同的細(xì)胞核深染，很少見核仁，顯示腫瘤組織生長抑制，見圖1。

圖1 灌服藥物2周后裸鼠腫瘤組織切片HE染色×400

3 討論

大蒜為單子葉植物百合屬植物蒜的鱗莖，含有一些特殊的具有生物活性的物質(zhì)，如硫化合物(蒜氨酸、蒜油、蒜素、阿霍烯等)、微量元素(高含量的鍺、硒、磷、鎂等)、超氧化物歧化酶(SOD)等，使大蒜具有廣泛的藥效。大蒜素是指從植物大蒜中提取的有效成分的總稱，他具備多種特別的生物學(xué)作用。研究人員通過流行病學(xué)資料的分析發(fā)現(xiàn)，大蒜能對胃癌、大腸癌、前列腺癌、乳腺癌等多種腫瘤產(chǎn)生預(yù)防或治療作用［1］，顯示出大蒜素具備良好的臨床治療效果，由于是植物提取物，他的不良反應(yīng)很小?；熕幬镏委熌I癌效果不佳，而且化療所導(dǎo)致的不良反應(yīng)非常大，長期治療，部分患者難以接受。細(xì)胞因子治療如白細(xì)胞介素－2和干擾素為對部分患者具有一定效果，但治療費用較貴，且易帶來較多不良反應(yīng)。國內(nèi)外的流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，大蒜素對多種惡性腫瘤如肺癌、前列腺癌等具有一定的抗腫瘤作用［2－3］。

大蒜素由于其獨特的生物學(xué)特性在某種程度上可直接殺傷腫瘤細(xì)胞、抑制腫瘤細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡;大蒜素還可通過激發(fā)患者自身免疫系統(tǒng)釋放多種活性因子，通過自身機體的細(xì)胞免疫和體液免疫抑制腫瘤細(xì)胞生長，來達(dá)到大蒜素抑制腫瘤生長的作用。與傳統(tǒng)腫瘤放療化療方案相比較，大蒜素在治療惡性腫瘤的過程中，不但對機體不良反應(yīng)輕微，而且還能激發(fā)機體自身免疫機制釋放多種重要的細(xì)胞因子，從而提高了機體自身的免疫力。目前大家對大蒜素抑制癌的形成及生長的研究雖然較多，但對腎癌的研究仍屬于起步階段。腎癌除了早期用手術(shù)治療以外，對中晚期及轉(zhuǎn)移性腎癌尚無其他有效的治療方法，中晚期腎癌對化療、放療均不敏感，而IFN和IL－2等生物治療的效果目前不能讓人滿意，化療總有效率十分低，僅為6%，且不良反應(yīng)明顯。

綜上所述，大蒜素具有抑制ketr－3腎癌細(xì)胞的作用，具體作用機制有待于深入研究;由此提示，大蒜素在腎癌的臨床治療中具有潛在的應(yīng)用前景，值得進(jìn)一步臨床研究。

［1］ LI S，Xu W.Effects of allicin on both telomerase activity and apotosis in gastric cancer SGC27901 cells［J］.World JGastroenterol，2003，9(9):1930.

［2］ Arditti FD，Kov AR，Miron T，et al.Apoptotic killing of B－chronic lymphocytic leukemia tumor cells by allicin generated in stiu using a rituximab2alliinase conjugate［J］.Molecular Cancer-Therapeutics，2007，4(2):325.

［3］ Elango EM，Asita H，Nidhi G，et al.Inhibition of cyclooxygenase22 by diallyl sulfides in HEK293 Tcells［J］.Appl Genet，2008，45(4):469.