子宮肌瘤動物模型研究

景慧芳,張曉

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué),江蘇南京210029;2.南京市中醫(yī)院,江蘇南京210009)

子宮肌瘤是女性生殖器最常見的良性腫瘤,其發(fā)病率有逐年上升的趨勢,而病因和發(fā)病機制尚不明確。目前治療子宮肌瘤最根本的手段是手術(shù)治療,因為手術(shù)治療的局限性和患者自身的意愿,藥物保守治療顯得尤為重要,中醫(yī)藥辨證治療子宮肌瘤的臨床效果明確,適宜的動物模型是發(fā)病機制研究和臨床前藥物篩選的關(guān)鍵。筆者回顧近年來子宮肌瘤動物模型的相關(guān)文獻(xiàn),以期為子宮肌瘤的中醫(yī)動物實驗研究提供幫助。

1 自發(fā)性子宮肌瘤動物模型

自發(fā)性子宮肌瘤動物模型以Eker鼠為代表。Eker鼠存在tuberous sclerosis complex 2(Tsc-2,結(jié)節(jié)硬化復(fù)合物2)腫瘤抑制基因的缺陷。65%的雌性未交配Eker鼠可自發(fā)地形成子宮肌瘤,且其表現(xiàn)、對激素的反應(yīng)及在分子水平的改變與人類子宮肌瘤相似[1]。

2 免疫缺陷動物移植性子宮肌瘤模型

這類模型的實驗動物有NOD/SCID鼠和無胸腺裸鼠。NOD/SCID鼠缺乏IL-2家族共同因子受體鏈基因[2],無胸腺裸鼠存在第11對染色體上等位基因的突變。Hiroshi Ishikawa等[3]將人子宮肌瘤組織植入NOD/SCID鼠的腎包膜下,移植的子宮肌瘤組織存活率近100%;且移植瘤保留了原子宮肌瘤的生物學(xué)特征[4]。Shahram Vaezy等[5]在60只8～10周無胸腺裸鼠的單側(cè)肩胛上注射3×106～5×106子宮肌瘤細(xì)胞,每周測量并計算肌瘤的大小,3個月后51只裸鼠成功造模。

3 誘發(fā)性子宮肌瘤動物模型

3.1 單一雌激素誘導(dǎo)法 孫虎等[6]選雌性未孕Wistar大鼠造模,予肌內(nèi)注射己烯雌酚0.02 mL/只(含藥0.04 mg),隔日1次,連續(xù)5周造模成功。Porter等[7]認(rèn)為卵巢中的某些因素會抑制因雌激素刺激而引起的子宮肌瘤生長,而隨著患者年齡的增長,這種保護作用減弱。這提示實驗動物在雙側(cè)卵巢摘除后給予雌激素誘導(dǎo)可能更易造出子宮肌瘤的動物模型,朱焰等[8]選用性成熟的豚鼠,在摘除雙側(cè)卵巢后經(jīng)皮下注射E2100 μ g/只,2次/周,連續(xù)12周,成功造模。在單一雌激素誘導(dǎo)子宮肌瘤動物模型造模的過程中,動物死亡率與E2誘導(dǎo)頻率呈正相關(guān),與E2給藥周期可能存在正相關(guān),但因為給予高劑量E2時動物死亡時間均早于低劑量組,所以動物死亡率與E2給藥劑量之間的關(guān)系尚不明確;E2誘導(dǎo)劑量與肌瘤發(fā)生率呈正相關(guān),延長E2的作用時間或許并不能顯著提高肌瘤形成率[9-10]。

3.2 雌、孕激素協(xié)同誘導(dǎo)法

3.2.1 雌激素全程給藥、后期加入孕激素 蔣秋燕等[11]取SD大鼠每周3次肌內(nèi)注射苯甲酸雌二醇0.05 mg/100 g,連續(xù)3個月,第4個月起每周2次加注黃體酮0.5 mg/100g,連續(xù)1個月;每周稱重1次,并根據(jù)體質(zhì)量調(diào)整激素用量;4月后造模成功。雷呈志等[12]選用清潔級實驗用雌性豚鼠,給予苯甲酸雌二醇0.1mg/d腹腔注射,每周3次,第12～16周加用黃體酮1 mg/d腹腔注射,每周1次,16周后造模成功。

3.2.2 雌激素早期給藥、后期改為孕激素 奚劍敏等[13]取未孕SD系清潔級雌性大鼠造模,腹腔注射苯甲酸雌二醇0.05 mg/100 g,每天1次,連續(xù)25 d后,改為腹腔注射黃體酮注射液0.4 mg/100 g,每天1次,連續(xù)5 d;30 d后造模成功。李東華等[14]也用此法應(yīng)用于Wistar雌性健康成年未孕大鼠成功造模。

3.2.3 雌、孕激素全程聯(lián)用 胡舒勤等[15]取清潔級雌性SD大鼠,肌注苯甲酸雌二醇0.06 mL(含藥量0.12 mg),每周3次;同時肌注黃體酮0.05 mL(含藥量1 mg),每周1次,16周后造模成功。在雌、孕激素協(xié)同誘導(dǎo)造模過程中,在造模的初期可能會出現(xiàn)大鼠活動減少,倦怠、精神欠佳等情況,有的大鼠進食減少,生長緩慢,毛豎立無光澤,易激惹,部分大鼠出現(xiàn)脫毛、四肢炎性腫塊等現(xiàn)象[11,14],而動物死亡的情況鮮有報道。

4 討論

國外子宮肌瘤動物模型多為自發(fā)性或免疫缺陷動物移植模型,國內(nèi)因條件所限多選誘發(fā)性子宮肌瘤動物模型。就造模的成功率而言,將人類子宮肌瘤組織植入NOD/SCID鼠的腎包膜下來形成子宮肌瘤動物模型的成模率最高,近100%;其次為在無胸腺裸鼠單側(cè)肩胛上注射子宮肌瘤細(xì)胞,為85%;再次為雌性未交配Eker鼠,自發(fā)性成膜率為65%;而國內(nèi)普遍使用的誘導(dǎo)性模型的成模率僅為27%～41%[16]。

在誘導(dǎo)性子宮肌瘤動物模型中,雌孕激素協(xié)同誘導(dǎo)法較單一雌激素誘導(dǎo)法的動物死亡率低,且有研究[17]表明雌、孕激素同用的造模方法成型穩(wěn)定,且與子宮肌瘤的發(fā)病原因相吻合,更易觀察到藥物的預(yù)防和實驗治療作用,綜合評價優(yōu)于單用雌激素造模的方法。雌孕激素協(xié)同誘導(dǎo)造模法根據(jù)造模周期不同分為短期和長期2種,研究[18]表明長期雙模法更符合子宮肌瘤發(fā)展緩慢、病程長的特點,造模更穩(wěn)定、更成功,可作為進一步實驗?zāi)Ｐ偷倪x擇。應(yīng)用雌孕激素協(xié)同長期誘導(dǎo)大鼠或豚鼠形成子宮肌瘤的動物模型更適宜子宮肌瘤的研究,但激素的給藥劑量、頻率、周期目前尚不統(tǒng)一,還需進一步研究。

目前,文獻(xiàn)中報道的子宮肌瘤證型模型僅血瘀證1種,中醫(yī)藥治療疾病需辨證論治,子宮肌瘤的中醫(yī)分型多樣,兩者之間存在的差異可能對子宮肌瘤的中醫(yī)動物實驗研究造成一定的不良影響,適宜于子宮肌瘤的中醫(yī)動物實驗研究的證型模型還應(yīng)繼續(xù)完善。

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