五味子多糖質(zhì)量濃度測(cè)定及生物活性研究

王 瑤,張彥飛,貢濟(jì)宇

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,長(zhǎng)春130117)

五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果實(shí)[1]。具有斂肺滋腎、生津斂汗、寧心安神之功?，F(xiàn)代研究認(rèn)為具有保肝、增強(qiáng)免疫、抗衰老等作用[2-5]。本文就五味子多糖含量及生物活性進(jìn)行研究。報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)材料與試劑 五味子藥材(購(gòu)于吉林大藥房),乙醇、硫酸亞鐵銨、水楊酸、過(guò)氧化氫(北京化工廠);抗壞血酸(湖北恒碩醫(yī)藥有限公司),均為分析純。

1.1.2 主要設(shè)備 紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)TU1810(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);電子分析天平AB135-S(梅特勒-托利多儀器上海有限公司);恒溫水浴鍋HH-S數(shù)顯(鄭州佳創(chuàng)儀器設(shè)備有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 五味子多糖的提取 將五味子藥材粉碎過(guò)40目篩,稱(chēng)100.0g,加入 6倍量的蒸餾水,煎煮2次,每次4h,合并液體,過(guò)濾2次,將液體醇沉12 h后離心得沉淀分別用無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚洗脫即得多糖[2-3]。

1.2.2 方法學(xué)考察

1.2.2.1 供試品溶液的配制 精密稱(chēng)取樣品10.06 mg,置50 mL容量瓶中溶解并定容至刻度。即得濃度0.20 mg/mL的溶液。

1.2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制 精密稱(chēng)取干燥至恒重的葡萄糖6.32 mg,蒸餾水溶解于100 mL容量瓶中,稀釋至刻度,搖勻,即得濃度為0.063 2 mg/mL的葡萄糖。

5%苯酚溶液：稱(chēng)取苯酚5 g,用100 mL蒸餾水,超聲溶解,待用。

1.2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制 精密吸取標(biāo)準(zhǔn)液0、0.4、0.6、0.8、1.2、1.4、1.8 mL 分別置于具塞管中,各補(bǔ)水至2 mL。再加5%苯酚液1.0 mL搖勻,滴加濃硫酸6.5 mL,混勻后置沸水浴加熱30 min,冰水浴15 min,另以蒸餾水1.0 mL,同上操作做空白對(duì)照,于紫外486 nm處測(cè)定吸收度(Abs)。以標(biāo)準(zhǔn)品(μ g)為橫坐標(biāo),Abs為縱坐標(biāo),得回歸方程C=0.006 4 X+0.005 8,r=0.999 0。說(shuō)明標(biāo)準(zhǔn)品量在 0～130 μ g范圍內(nèi),與Abs呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

1.2.2.4 精密度測(cè)定 取0.20 mg/mL的樣品溶液1.0 mL,按“標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制”項(xiàng)下測(cè)定Abs值,測(cè)定6次,樣品溶液Abs平均值約為0.123,RSD為0.18%,表明此方法精密度良好。

1.2.2.5 重現(xiàn)性測(cè)定 精密量取0.20 mg/mL樣品溶液1.0 mL 3分,分別按“標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制”項(xiàng)下測(cè)定Abs,重復(fù)測(cè)定3次。平行測(cè)定的3分樣品溶液,其測(cè)定結(jié)果所得RSD為0.69%,在實(shí)際要求的范圍內(nèi),重現(xiàn)性較好。

1.2.2.6 穩(wěn)定性測(cè)定 取“重現(xiàn)性項(xiàng)下”3分供試品分別于顯色后 0、5、15、30、60、120 min 測(cè)定 Abs,樣品溶液在120 min內(nèi)的測(cè)定結(jié)果RSD為0.69%,表明樣品在120 min內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

1.2.2.7 加樣回收率測(cè)定 取已知質(zhì)量濃度的供試樣品分別添加標(biāo)準(zhǔn)品,按上述測(cè)定條件測(cè)定,計(jì)算回收率。參考加樣回收試驗(yàn)法,精密量取0.20 mg/mL樣品溶1 mL,按加樣比例精密加入葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液,制備低、中、高劑量組,每組平行3分,按“1.2.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制”項(xiàng)下測(cè)定Abs,計(jì)算回收率和RSD值,考察方法的準(zhǔn)確性與可行性。平均回收率為99.99%,RSD為1.76%,表明此方法具有較好的回收率。

1.2.3 質(zhì)量濃度測(cè)定 稱(chēng)取上述處理好的樣品溶液1.0 mL于10 mL具塞試管中加蒸餾水至2.0 mL,5%苯酚1.0 mL,加濃硫酸6.5 mL,混勻后置沸水浴加熱30 min,冰水浴15 min,486 nm進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定其Abs值0.124,用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得濃度為0.006 6 mg/mL,即多糖為13.3%。

1.3 測(cè)定方法 在10 mL具塞試管中,依次精密加入7.5 μ mol/L 硫酸亞鐵銨溶液1 mL 、7.5 μ mol/L 水楊酸溶液 1 mL、樣品溶液 1 mL,充分混勻,再加入0.01%過(guò)氧化氫溶液0.15 mL,混勻,37℃恒溫水浴作用30 min后,終止反應(yīng),于510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,蒸餾水為陰性對(duì)照,平行測(cè)定3次[4]。清除率公式為：清除率(%)=[1-(Ai-Aj)/A0]×100%

1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 五味子多糖對(duì)清除羥基自由基活性的清除作用,在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi)五味子多糖對(duì)清除羥基自由基活性的清除能力隨濃度的增加而逐漸增強(qiáng)。

2 小結(jié)

本試驗(yàn)通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證明了五味子多糖具有抗氧化活性,為臨床應(yīng)用提供了一定的理論基礎(chǔ),但生物體內(nèi)多糖的抗氧化作用途徑更為復(fù)雜,還有待作進(jìn)一步的研究。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)出版社,2010：61.

[2]王茹,張琰,程建峰.五味子活性成分提取工藝的優(yōu)選[J].華南國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志,2005,19(6)：4-6,47.

[3]李艷艷,張秀榮.北五味子有效成分提取分離方法的研究進(jìn)展[J].吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào),2008,29(4)：230-232.

[4]孫瑾,王宗舉,陳崗,等.橄欖中多酚類(lèi)物質(zhì)體外抗氧化活性研究[J].中國(guó)食品添加劑,2010(3)：69-73.