黃芪多糖抗衰老作用的實驗研究*

鐘 靈，王振富，文德鑒

（1.湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院，2.湖北民族學(xué)院醫(yī)學(xué)院，恩施445000）

許多研究表明，自由基損傷與衰老密切相關(guān)。人參多糖、香菇多糖等許多中草藥提取物能直接清除自由基，提高SOD、CAT等抗氧化酶的活性及降低MDA含量，發(fā)揮抗衰老作用［1］。黃芪為豆科多年生草本植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，性甘，微溫，歸脾、肺經(jīng)，具有補(bǔ)氣升陽、益衛(wèi)固表、利水消腫、托瘡生肌之功效，可煎服、生用或蜜炙用。黃芪為常用中藥，臨床常用于防治免疫功能紊亂性疾病、心腦血管疾病、促智、延緩衰老和抗腫瘤等多種疾病，療效確切且副作用較少［2］。黃芪提取物（extract of astragalus，EA）是從黃芪中提取的有效成分，主要包括黃芪總苷（astragalosides，AST）和黃芪多糖（astragalus polysaccharides，APS）。本實驗通過建立D-半乳糖小鼠衰老模型，采用堿醇提取法提取黃芪多糖，進(jìn)一步研究黃芪多糖抗衰老作用及其機(jī)制，為該藥在延緩衰老方面防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和儀器

D-半乳糖（中國上?；坌巧噭┯邢薰荆?；香菇菌多糖片（武漢迪奧藥業(yè)有限公司）；丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過氧化氫酶（catalase，CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（gutathion peroxidase，GSH-Px）試劑盒（南京建成生物工程研究所）；WFZ-UV2000紫外可見分光光度計（尤尼科上海儀器有限公司）；TJ270-30A紅外分光光度計（天津光學(xué)儀器廠）；TGL-16G高速臺式離心機(jī)（上海安亭儀器廠）；F-160型藥物粉碎機(jī)（北京市永光明醫(yī)療儀器廠）；RE52-3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海滬西分析儀器廠）。

1.2 黃芪多糖提取物的制備

采用堿醇提取黃芪多糖：準(zhǔn)確稱取黃芪飲片，黃芪與5%乙醇按1／10的量，在pH 12（碳酸鈉調(diào)節(jié)）、溫度為90℃的條件下提取2次，每次1.5 h，過濾，合并濾液，濃縮沉糖。冷凍干燥保存。實驗前以純水為溶劑配制不同濃度樣品，4℃低溫保存，備用。

1.3 實驗動物分組、造模及處理

昆明種小鼠，體重28～32 g，由湖北民族學(xué)院實驗動物中心提供。將60只小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只（雌雄各5只）：空白組，模型組，香菇菌多糖組和黃芪多糖低、中、高劑量組?？瞻捉M，灌胃等體積生理鹽水；模型組頸背部皮下注射D-半乳糖120 mg／kg和灌胃等體積生理鹽水；陽性組頸背部皮下注射D-半乳糖120 mg／kg和灌胃等體積香菇菌多糖100 mg／kg；根椐預(yù)試驗確定低、中、高黃芪多糖劑量各組劑量小鼠的每日用量，分別灌胃50、100、200 mg／kg和同時頸背部皮下注射 D-半乳糖 120 mg／kg。按 0.2 ml／10 g，一天灌胃一次，連續(xù)給藥60 d。

1.4 觀察指標(biāo)與方法

1.4.1 小鼠胸腺和脾臟指數(shù)的測定 末次給藥24 h后，稱小鼠體重，眼眶取血后處死小鼠，取胸腺、脾臟、肝臟和腦組織并稱重，分別測定相關(guān)指標(biāo)。按“胸腺（mg）／體質(zhì)量（g）、脾臟（mg）／體質(zhì)量（g）”計算胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。

1.4.2 小鼠血MDA含量及SOD活力測定 將小鼠血液立即離心取其血清，按丙二醛試劑盒說明書操作，于532 nm處測定各管吸光度，計算血清中丙二醛含量。按超氧化物歧化酶試劑盒說明書操作。于550 nm處測定各管吸光度，計算血清中超氧化物歧化酶活力。

1.4.3 小鼠肝組織GSH-Px活力測定 取小鼠肝臟，剔去結(jié)締組織，勻漿器研磨、加預(yù)冷的生理鹽水制備成10%的組織勻漿。冷凍離心（2℃～4℃），取其上清液，用谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒測定谷胱甘肽過氧化物酶活力。

1.4.4 小鼠腦組織CAT活力測定 取小鼠腦組織，加預(yù)冷的生理鹽水進(jìn)行勻漿制備成10%的組織勻漿。冷凍離心（2℃～4℃），取其上清液，用過氧化氫酶試劑盒測定過氧化氫酶活力。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ˉx±s）表示，采用 SPSS 15.0軟件系統(tǒng)進(jìn)行分析，組間比較采用方差分析。

2 結(jié)果

2.1 黃芪多糖對衰老小鼠胸腺和脾臟指數(shù)的影響

與空白對照組比較，模型組胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均有顯著性降低（P＜0.05）；與模型組比較，香菇菌多糖組及黃芪多糖低、中、高劑量組胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均有顯著性升高（P＜0.05，P＜0.01，表 1）。

Tab.1 Effects of APSon thymus index and spleen index of aging mice（ˉx±s，n＝10）

2.2 黃芪多糖對衰老小鼠MDA含量和SOD、GSH-Px、CAT活力的影響

與空白對照組比較，模型組MDA含量有顯著性升高，SOD、GSH-Px、CAT活力有顯著性降低（P＜0.05）；與模型組比較，香菇菌多糖組及黃芪多糖低、中、高劑量組MDA含量有顯著性降低（P＜0.05），SOD和GSH-Px活力均明顯提高（P＜0.01），香菇菌多糖組及黃芪多糖中、高劑量組CAT活力顯著提高（P＜0.01，表2），低劑量組則差異無顯著性。

3 討論

衰老的自由基學(xué)說是Denham Harman在1956年提出的，認(rèn)為衰老過程中的退行性變化是由于細(xì)胞正常代謝過程中產(chǎn)生的自由基的有害作用造成的。目前，自由基理論在機(jī)體衰老中的作用已受到人們的高度重視。所謂自由基（free radica1）又稱游離基，就是具有未配對的原子、原子團(tuán)、分子或離子叫自由基。自由基的化學(xué)性質(zhì)活潑，有極強(qiáng)的氧化反應(yīng)能力，可使各種生物膜的不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化，形成過氧化脂質(zhì)，這些產(chǎn)物具有一定毒性，能使蛋白質(zhì)分子內(nèi)和分子間發(fā)生交聯(lián)，發(fā)生去氫、加成、裂解等反應(yīng)，從而引起DNA的雙螺旋交聯(lián)出現(xiàn)錯誤或無法分裂，一些酶的活性改變，影響細(xì)胞的代謝。D-半乳糖是機(jī)體的正常營養(yǎng)成分，當(dāng)半乳糖過多時，可由半乳糖氧化酶催化生成醛糖和過氧化氫，產(chǎn)生超氧陰離子自由基。過量的氧自由基可引起神經(jīng)元細(xì)胞的損傷，使腦內(nèi)總RNA和蛋白質(zhì)含量下降，腦內(nèi)神經(jīng)元密度降低，造成動物學(xué)習(xí)記憶能力下降及機(jī)體的衰老［3］。許多中草藥是強(qiáng)有力的抗氧化劑，適當(dāng)補(bǔ)充外源性抗氧化物質(zhì)，可提高機(jī)體抗氧化系統(tǒng)的活力，降低過氧化脂質(zhì)含量，從而起到抗衰老作用。有研究表明腦的老化和慢性應(yīng)激導(dǎo)致的小鼠空間學(xué)習(xí)記憶功能損傷與海馬及前腦皮層神經(jīng)元GDNF表達(dá)密切相關(guān)［4］；杭白菊總黃酮（TFCM）能顯著改善 D-半乳糖衰老小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，其機(jī)制可能與TFCM的抗氧化特性以及提高中樞膽堿能系統(tǒng)功能有關(guān)［5］。本實驗結(jié)果顯示：黃芪多糖能顯著提高衰老模型小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)；明顯降低MAD含量；提高CAT活性，以中、高劑量為宜；顯著提高SOD、GSH-Px活性。提示黃芪多糖可通過增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、提高機(jī)體抗氧化能力和直接清除自由基等發(fā)揮其延緩衰老的作用，但其作用機(jī)理還有待于進(jìn)一步研究。

Tab.2 Effects of APSon the content of MDA and the vitality of SOD、GSH-Px and CAT of aging mice（ˉx±s，n＝10）

［1］ 黃婭琳.抗衰老中藥的研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2007，18（3）：691-693.

［2］ 陳聰穎，陸 陽，陳澤乃.內(nèi)蒙黃芪的研究概況［J］.中草藥，2001，32（6）：567-569.

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