新魚腥草素鈉眼用即型凝膠的制備與藥效學(xué)研究

何泰東 劉志承 郭 彬

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬深圳市中醫(yī)院藥學(xué)部，深圳518033）

新魚腥草素鈉眼用即型凝膠的制備與藥效學(xué)研究

何泰東 劉志承 郭 彬

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬深圳市中醫(yī)院藥學(xué)部，深圳518033）

目的 研究新魚腥草素鈉眼用即型凝膠（NSHFEG）對(duì)三種質(zhì)控菌混合感染角膜炎的藥效學(xué)。方法以泊洛沙姆407、泊洛沙姆188和羥丙甲基纖維素為混合基質(zhì)，采用冷溶法制備凝膠；用金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和大腸桿菌以注射法制成模型家兔角膜炎，再用NSHFEG藥物治療，以新魚腥草素鈉滴眼液（NSHED）、氧氟沙星滴眼液和注射用水作對(duì)照進(jìn)行治療觀察。結(jié)果NSHFEG高劑量組療效最佳，其治愈率和病原體轉(zhuǎn)陰率分別為93.22%和90.00%；中劑量組與氧氟沙星組相仿；低劑量組與NSHED相當(dāng)，P＞0.05。NSHFEG對(duì)家兔模型角膜炎的療效比NSHED提高3～5倍。結(jié)論NSHFEG對(duì)混合感染兔眼藥效學(xué)試驗(yàn)療效明顯，可供臨床治療使用。

新魚腥草素鈉；眼用即型凝膠；泊洛沙姆407與188；造模角膜炎；藥效學(xué)研究

清涼解毒中草藥魚腥草對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌等多種常見病菌有一定的抗菌作用［1］，現(xiàn)代科學(xué)提?。ê铣桑﹩误w新魚腥草素鈉亦在眼科感染研究應(yīng)用［2］，為了提高臨床療效，筆者采用熱敏材料泊洛沙姆（P407和P188）及粘性材料羥丙甲基纖維素（HPMC）配制新魚腥草素鈉眼用即型凝膠（New sodium Houttuynine in situ forming eye gel，NSHFEG），并對(duì)60只家兔三種質(zhì)控菌混合感染角膜炎結(jié)膜炎進(jìn)行藥效學(xué)研究試驗(yàn)，結(jié)果令人滿意?，F(xiàn)在簡(jiǎn)要報(bào)道如下。

1 材料

1.1 試藥與試劑新魚腥草素鈉原料（江蘇亞邦藥物研究有限公司，批號(hào)：120502，含量：98.5%），泊洛沙姆407（P407）、泊洛沙姆188（P188）（德國(guó)BASF公司），羥丙甲基纖維素（HPMC）、尼泊金乙酯（廣州化學(xué)試劑有限公司），新魚腥草素鈉眼用即型凝膠（NSHFEG，研究品，批號(hào)：120801），新魚腥草素鈉滴眼液（NSHED，自制對(duì)照品，批號(hào)：120802），氧氟沙星滴眼液（OED，廣州東康制藥廠，批號(hào)：120603）。

1.2 實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物與病原菌健康新西蘭大白兔，♀♂兼用，2.5～3.2kg，共60只（廣東省醫(yī)用試驗(yàn)動(dòng)物場(chǎng)提供，粵證：12-028）；金黃色葡萄球菌（ACTT25923）濃度2.5×109CFU·ml-1，綠膿桿菌（ACTT27853）濃度1 ×106CFU·ml-1，大腸桿菌（ACTT25922）濃度1.8× 109CFU·ml-1，均為廣東省藥品檢驗(yàn)所提供的質(zhì)控菌株。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品的制備

2.1.1 處方新魚腥草素鈉1.0g，P407 200g、P188 20g，HPMC 20g，尼泊金乙酯0.5g，用注射用水配制成1000ml。

2.1.2 制備稱取處方量的P407、P188和HPMC依次分散在上述溶液中，攪溶，置4℃冷藏溶脹24h（過夜）得澄明液，另稱取1.0g新魚腥草素鈉加入溶解，攪勻，過0.5μ微孔濾膜，調(diào)PH6.5左右，加注射用水成1000ml，攪勻，分裝即得新魚腥草素鈉眼用即型凝膠（NSHFEG），本品室溫下為微黃白色澄明液，當(dāng)?shù)窝圻_(dá)34.5℃時(shí)，即由液狀轉(zhuǎn)變成凝膠狀，故日眼用即型凝膠，黏附在眼角膜和眼結(jié)膜上。批號(hào)：120801。

另取新魚腥草素鈉原料1.0g，用注射用水配制成1000ml，p H6.5左右即為0.1%新魚腥草素鈉滴眼液（NSHED）［2］。批號(hào)：120802。

2.2 對(duì)家兔眼細(xì)菌性混合感染的藥效學(xué)試驗(yàn)［1］

2.2.1 動(dòng)物模型的建立用兔座鋏固定家兔，以0.6%丁卡因2～3滴滴眼，待其失去知覺后，用1ml注射器抽取0.2ml含混合菌培養(yǎng)液（含金黃色葡萄球菌2.5× 108CFU、綠膿桿菌1×105CFU和大腸桿菌1.8× 108CFU）自眼角膜近中心部位注入角膜實(shí)質(zhì)層內(nèi)，連續(xù)2d（即2次），使造成直徑約2～3mm的白色菌斑，經(jīng)取眼分泌物細(xì)菌培養(yǎng)檢查起碼要有2種細(xì)菌培養(yǎng)為陽(yáng)性，模型家兔隨機(jī)分為六組，每組10只，分別放入單籠飼養(yǎng)治療。

2.2.2 動(dòng)物分組試驗(yàn)與給藥方法模型家兔60只，每組10只，分為NSHFEG高、中、低劑量組（高劑量組指6次／d，1～2滴／次；中劑量組指4次／d，1～2滴／次；低劑量組指2次／d，1～2滴／次）。另設(shè)兩組陽(yáng)性對(duì)照組，即新魚腥草素鈉滴眼液組8次／d，1～2滴／次；氧氟沙星滴眼液組8次／d，1～2滴／次，及空白對(duì)照組，給注射用水8次／d，1～2滴／次。以造模后12h開始用藥，為期5d，每天進(jìn)行相關(guān)觀測(cè)工作。天天取眼分泌液作細(xì)菌培養(yǎng)，檢查分離、鑒別，并記錄對(duì)比。

2.2.3 觀察指標(biāo)①病原體轉(zhuǎn)陰率：給藥前及給藥后第5d（直到第7d）取家兔治療眼分泌物進(jìn)行涂片及培養(yǎng)分離鑒定，連續(xù)2次鑒定病原體均為陰性定為轉(zhuǎn)陰，并計(jì)算轉(zhuǎn)陰率（細(xì)菌清除率）（表1）；②家兔眼部病變治愈程度（肉眼觀察）：借助眼科反光鏡從第3d檢查家兔眼球結(jié)膜、角膜、眼瞼等是否充血、水腫、出血等。于停藥后第2d將家兔活殺、解剖取眼球標(biāo)本進(jìn)行肉眼觀察。眼球炎癥標(biāo)本按充血、水腫、出血3項(xiàng)基本指標(biāo)進(jìn)行評(píng)分。0分（正常）——無(wú)充血、無(wú)水腫、無(wú)出血；1分（輕度）——眼球結(jié)膜、角膜及眼瞼尚平滑、輕度充血；2分（中度）——眼球結(jié)膜或角膜眼瞼稍平滑，中度充血，可見點(diǎn)狀出血點(diǎn)；3分（重度）——眼球結(jié)膜、角膜、眼瞼光滑，重度充血，可見大量出血點(diǎn)，組織重度水種。各組檢查記分后，再計(jì)算治愈率，見表2。

2.3 結(jié)果

2.3.1 家兔眼角膜混合感染病原體轉(zhuǎn)陰率見表1。

表1 NSHFEG與三個(gè)對(duì)照組兔眼混合感染病原體轉(zhuǎn)陰率比較（n，%）

2.3.2 家兔眼部病變治愈程度見表2。

表2 NSHFEG與三個(gè)對(duì)照組治療兔眼造模角膜炎治愈率比較

3 討論

家兔眼造模角膜炎選用角膜內(nèi)實(shí)質(zhì)層注射法［2］菌斑可達(dá)2～3mm甚至更大，造模成功率高，筆者達(dá)96%以上，這比角膜環(huán)鉆法和角膜劃痕法及菌液直點(diǎn)法先進(jìn)且易操作。

造模角膜炎經(jīng)NSHFEG三劑量，NSHED和氧氟沙星陽(yáng)性對(duì)照品及注射用水空白對(duì)照依法治療后，從表1病原體轉(zhuǎn)陰率比較看：NSHFEG高劑量對(duì)三種致病菌混合感染的消除（轉(zhuǎn)陰）率最佳達(dá)90.00%（54／60）；中劑量組與氧氟沙星組相當(dāng)分別為74.14%（43／58）和72.88%（43／59），P＞0.05；低劑量與NSHED相當(dāng)分別為66.10%（39／59）和67.24%（39／58），P＞0.05。但NSHFEG和NSHED對(duì)綠膿桿菌的清除率均最差，這表明新魚腥草素鈉對(duì)G＋菌作用較強(qiáng)，對(duì)G-菌尤其綠膿桿菌的作用較差。從表2治療兔眼造模角膜炎治愈率比較看：NSHFEG高劑量最佳，其治愈率為93.22%，其中劑量組與氧氟沙星相當(dāng)，分別為84.75%和86.44%，P＞0.05，其低劑量組則與NSHED組幾乎同效分別為81.36%和79.66%，P＞0.05。看來(lái)，NSHFEG的療效比NSHED可提高3～5倍，這與文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)［3］接近。

德國(guó)研制的泊洛沙姆是一類由聚氧乙烯（PEO）和聚氧丙烯（PPO）組成的PEO-PPO-PEO型三嵌的共聚體。其中，泊洛沙姆407（P407）在一定濃度下具有低溫時(shí)為液狀，溫度升高時(shí)會(huì)轉(zhuǎn)變成凝膠的特性［4］，泊洛沙姆188（P188）的特性與P407相反，兩者合用具有調(diào)節(jié)作用。吳明釵等［5］以15.5%泊洛沙姆407為基質(zhì)制備凝膠；筆者以20%泊洛沙姆407和2%P188及PHMC為混合基質(zhì)制備凝膠，其膠凝溫度分別32℃和30.5℃，但兩者以液態(tài)滴眼，達(dá)34.5℃時(shí)均轉(zhuǎn)變成凝膠粘附在眼角膜、結(jié)膜和眼瞼上，形成長(zhǎng)效緩釋制劑比滴眼液緩釋作用可長(zhǎng)達(dá)4倍以上，因?yàn)樗幬锏淖饔冒z的溶蝕和擴(kuò)散吸收兩個(gè)過程［6］，其藥效可與靜脈注射和皮下注射用藥相比。

［1］郭彬，劉志承，魏俊婷，等．魚腥草熱敏凝膠滴眼液的藥效學(xué)研究［J］．中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，5（19）：32-33．

［2］陳效，徐永紅，王章元．新魚腥草素鈉滴眼對(duì)家兔細(xì)菌性角膜炎的影響［J］．中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2006，26（7）：820-823．

［3］Dumortier G，Grossiord JL，Agnely F，et al．A review of poloxamer 407 pharmaceutical and pharmacological characteristics［J］．Pharm Res，2006，23（12）：2709-28．

［4］金璐燕，李娟．泊洛沙姆407在制劑中的應(yīng)用進(jìn)展［J］．藥學(xué)與臨床研究，2009，17（3）：231-234．

［5］吳明釵，陳鎮(zhèn)國(guó)，林潔．氟康唑莫西沙星眼用即型凝膠的制備及質(zhì)量控制［J］．中國(guó)藥房，2012，23（17）：1602-1604．

［6］郝吉福，李學(xué)桐，張翠玲，等．氯霉素眼用溫敏原位凝膠的制備及其兔眼刺激性研究［J］．中國(guó)藥房，2011，22（21）：1979-1981．

10個(gè)穴位可用于急癥（二）

頭痛：頭痛發(fā)作時(shí)，可用雙手食指分別按壓頭部雙側(cè)太陽(yáng)穴（位于眉梢與外眼角中間向后1寸凹陷處），壓至有脹痛感并按順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)1分鐘，頭痛便可減輕。

胃痛：胃痛時(shí)，用雙手拇指按揉雙腿足三里穴（位于膝蓋下3寸，脛骨外側(cè)1橫指處），待有酸麻脹感后堅(jiān)持3～5分鐘，胃痛便可明顯減輕。

心絞痛：心絞痛發(fā)作時(shí)常常伴有胸部壓迫感、窒息感等。此時(shí)可按壓至陽(yáng)穴（位于第7胸椎棘突下凹陷處），一般按壓3～6分鐘，心絞痛即可得到有效緩解。

膽絞痛：膽囊炎、膽結(jié)石發(fā)作時(shí)，右上腹可發(fā)生劇烈絞痛。這時(shí)可用大拇指持續(xù)按摩右小腿的陽(yáng)陵泉穴（位于膝蓋斜下方，小腿外側(cè)之腓骨小頭稍前凹陷處）2分鐘，即可獲得良好的止痛效果。

腎絞痛：腎絞痛發(fā)作時(shí)，可用大拇指按揉三陰交穴（位于足內(nèi)踝尖上3寸，脛骨內(nèi)側(cè)緣后方），反復(fù)按摩3～5分鐘，腎絞痛便可得到緩解。

——國(guó)家中醫(yī)藥管理局網(wǎng)站

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.23.118

：1672-2779（2013）-23-0162-02

蘇 玲

2013-10-28）